慢性乙型肝炎患者HBV-DNA載量與血清microRNA-122、ALT的相關(guān)性研究

杜波，高小麗，白雪梅

（榆林市中醫(yī)醫(yī)院 檢驗科，陜西 榆林 719000）

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB）是全球性疾病，每年導(dǎo)致約100 萬人死亡[1]。乙型肝炎病毒脫氧核糖酸（hepatitis B virus deoxyribonucleic acid,HBV-DNA）的載量水平、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）水平和組織學(xué)表現(xiàn)是HBV 治療時應(yīng)考慮的因素[2]?；顒有圆《靖腥緬呙枋峭ㄟ^定量HBV-DNA 來檢測的，但這種檢測是基于分子的，而且費(fèi)用昂貴，考慮到乙肝病毒的分布，特別是在發(fā)展中國家，一種廉價的實驗室測試可以作為HBVDNA 分子檢測的替代[3-4]。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）是一種DNA 病毒，具有環(huán)狀和部分雙鏈的基因組，乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen, HBsAg）是HBV 包膜上表面抗原，HBsAg 檢測可作為乙型肝炎的初步診斷指標(biāo)[5]。miRNA 對妊娠和肝損傷十分敏感，有研究指出可通過CHB 患者治療前后血清microRNA-122（miR-122）變化預(yù)測干擾素的療效[6]。本研究為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療CHB患者，對CHB 患者血清miR-122、HBV-DNA 載量及ALT 水平的相關(guān)性進(jìn)行了分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2019年3月榆林市中醫(yī)醫(yī)院收治的200例CHB 患者作為研究對象。其中，男性121例，女性79例；年齡16 ～78 歲，平均（35.42±4.18）歲；病程1 ～18年，平均（9.17±2.45）年。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中CHB 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過臨床確診；②年齡16 ～78 歲，病理、臨床及隨訪資料完整；③納入前均未接受過任何治療；④本研究已通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①酒精、藥物等導(dǎo)致的肝損傷患者；②其他器官嚴(yán)重病變患者；③存在資料缺失者；④腫瘤患者；⑤妊娠期或哺乳期婦女；⑥存在意識、精神障礙，無法進(jìn)行語言溝通者。

1.2 方法

檢測患者血清ALT 含量、miR-122 水平，分析HBV-DNA 載量與血清miR-122、ALT 含量的相關(guān)性。研究對象均取空腹肘靜脈血5 ml，置于真空采血管中，3 000 r/min 離心3 min，分離血清保存至-80℃冰箱待檢。采用RT-PCR 檢測血清miR-122 水平和HBV-DNA，利用肝功能檢測試劑盒檢測ALT 含量，采用雙抗體夾心法檢測血清乙型肝炎e 抗原（hepatitis B e antigen, HBeAg）、乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen, HBsAg），ELISA 競爭法檢測血清乙型肝炎e 抗體（hepatitis B e antibody, HBeAb）、乙型肝炎核心抗體（hepatitis B core antibody, HBcAb）和乙型肝炎表面抗體（hepatitis B surface antibody, HBsAb），所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。血清標(biāo)志物結(jié)果：HBsAg ≥300 S/N為陽性，HBsAb＞10 mIU/ml 為陽性，HBeAg＞1.0 S/CO為陽性，HBeAb＜1.0 S/CO 為陽性，HBcAb＜1.0 S/CO 為陽性。依據(jù)血清標(biāo)志物檢測對照表進(jìn)行分組。模式1：慢性肝炎患者；模式2：早期乙肝感染或慢性攜帶者；模式3：急性乙肝感染期或慢性乙肝表面抗原攜帶者；模式4：急性或慢性乙肝感染者；模式5：感染過乙肝病毒或急性乙肝病毒感染者；模式6：曾感染過乙肝病毒或處于急性感染恢復(fù)期；模式7：既往感染過乙肝，急性感染康復(fù)，HBeAb 濃度較低；模式8：既往感染過乙肝，具有保護(hù)性抗體；模式9：既往感染過乙肝，急性感染康復(fù)，具有保護(hù)性抗體；模式10：慢性乙肝表面抗原攜帶者或急性感染恢復(fù)期者；模式11：接種乙肝疫苗后，乙肝病毒感染已經(jīng)康復(fù)且已產(chǎn)生免疫力者；模式12：急性乙肝恢復(fù)或慢性攜帶者[8]。ALT ≤40 u/L 定義為正常，ALT＞40 ～80 u/L 定義為輕度異常，ALT＞80 u/L 定義為異常。HBV-DNA 分組：HBV-DNA＜5.00×102copies/ml 作為低病毒載量組，HBV-DNA 在5.00×102～5.00×105copies/ml 作為中病毒載量組，HBV-DNA 在1×105～1×107copies/ml作為高病毒載量組，HBV-DNA＞1×107copies/ml 作為超高病毒載量組，分別有91例、46例、25例及38例。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用方差分析，進(jìn)一步的兩兩比較用LSD-t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗；相關(guān)性分析用Pearson 法，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CHB 患者不同血清模式的ALT 和HBVDNA 載量比較

模式1、2、3和4中患者HBV-DNA載量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=24.820，P=0.000）；模式1、2 和3 的患者HBV-DNA 載量較模式4 患者高（P＜0.05）。各模式患者血清ALT 含量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=38.140，P=0.000）；模式1 的患者血清ALT 含量較其他模式患者高（P＜0.05）。見表1。

2.2 不同HBV-DNA 組患者血清ALT 陽性率比較

不同HBV-DNA 組患者血清ALT 陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=16.124，P=0.000），低病毒載量組最低（P＜0.05）。見表2。

2.3 不同HBV-DNA 組患者miR-122 相對表達(dá)量比較

低病毒載量組、中病毒載量組、高病毒載量組和超高病毒載量組患者miR-122 相對表達(dá)量分別為（5.31±3.19）、（10.76±2.23）、（15.57±1.62）及（20.46±2.28），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=37.240，P=0.000），miR-122 相對表達(dá)量隨HBVDNA 載量增高而逐漸上升。

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析，HBV-DNA 載量與ALT 和miR-122 均呈正相關(guān)（r=1.024 和0.946，P=0.027 和0.031）。

表1 CHB 患者不同血清模式的ALT 和HBV-DNA 載量比較

表2 不同HBV-DNA 組患者血清ALT 陽性率比較例（%）

3 討論

CHB 是臨床上常見的傳染病，是感染HBV 所致，該病在我國發(fā)病率較高，為6%～10%，且呈不斷上升的趨勢[9]。目前，乙型肝炎已成為全球衛(wèi)生政策的焦點。繼2014年世界衛(wèi)生大會通過關(guān)于病毒性肝炎的決議之后，該組織于2015年3月發(fā)布了關(guān)于CHB的指導(dǎo)方針以及2016年6月的“全球衛(wèi)生部門病毒性肝炎戰(zhàn)略”[10-11]。這些文件描述了到2030年消除病毒性肝炎對公眾健康構(gòu)成的威脅的目標(biāo)，包括從2016年開始，將病毒性肝炎病死率降低65%，但目前只有不到1%的病毒性肝炎患者正在接受治療[12-13]。主要原因為HBV 是CHB 的病原體，其癥狀和表現(xiàn)復(fù)雜，導(dǎo)致CHB 的準(zhǔn)確診斷非常困難[14]。

HBV-DNA 是反映HBV 復(fù)制活躍程度及傳染性的最直接指標(biāo)，也是觀察抗病毒藥物療效、預(yù)后和指導(dǎo)抗病毒藥物應(yīng)用的重要指標(biāo)之一，HBV-DNA 定量的檢測從根本上突破了免疫學(xué)方法等間接方法的局限性，通過直接檢測病毒核酸水平，可真實的反映患者體內(nèi)的病毒水平[15]。在本研究中模式1 ～4 患者均檢測到HBV-DNA 載量，其中模式1、2 患者HBV-DNA載量最高，且4 種模式HBV-DNA 載量比較有差異；而在模式8 ～12 中，12例患者血清HBV-DNA 載量檢測均為陰性，本研究結(jié)果說明單獨檢測HBV-M 載量容易出現(xiàn)假陰性或者假陽性，血清ALT 含量和血清HBV-DNA 載量的相關(guān)性與HBV-M 載量無關(guān)。與覃小梅等[16]研究中提到的HBV-M 對病毒復(fù)制、療效觀察幫助不大結(jié)果相似。

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上對于HBV 的診斷方法增多，比如HBV 基因檢測、核酸檢測等。HBV-DNA 是反映體內(nèi)HBV 感染、復(fù)制和傳染性強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)，HBeAg 也是說明體內(nèi)病毒復(fù)制的良好指標(biāo)[17]。血清ALT 與肝細(xì)胞受損有直接關(guān)系，是體現(xiàn)肝細(xì)胞受損的直接指標(biāo)。多指標(biāo)聯(lián)合檢測更有助于CHB 的診斷[18]。在本研究中低病毒載量組患者ALT陽性最低，各病毒載量組患者ALT 陽性率有差異，HBV-DNA 載量與ALT 含量呈正相關(guān)，結(jié)果表明在一定范圍內(nèi)HBV-DNA 載量越高，HBV 感染復(fù)制率越高，ALT 陽性率越高，患者肝臟損傷加重。

miRNA 是非編碼RNA 轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶基因，其不僅在細(xì)胞發(fā)育中、分化和生理功能中起著重要作用，而且在腫瘤、病毒感染和其他密切相關(guān)疾病的發(fā)展中也具有重要意義[19]。此外，miR 分子在某些疾病評估中越來越被認(rèn)為是一種診斷和預(yù)后指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs 可調(diào)節(jié)多種肝功能，報告了miRNAs 在與HBV 感染相關(guān)的腫瘤診斷中的作用[20]。miR-122 是肝臟中最豐富的miRNA 類型，miR-122 的變化不僅與CHB 的發(fā)病相關(guān)，而且與肝損傷相關(guān)[21]。在本研究中，miR-122 相對表達(dá)量隨著HBV-DNA 載量增高而逐漸上升，與HBV-DNA 載量呈正相關(guān)，miR-122可抑制HBV 的復(fù)制，提示miR-122 可能與CHB 和肝癌的發(fā)生有關(guān)。

綜上所述，CHB 患者血清miR-122 和HBV-DNA及肝功能之間存在一定相關(guān)性，三者聯(lián)合檢測可以相互補(bǔ)充，提高診斷的準(zhǔn)確性，為臨床診治CHB 患者提供科學(xué)依據(jù)。