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    慢性乙型肝炎患者HBV-DNA載量與血清microRNA-122、ALT的相關(guān)性研究

    2021-01-04 03:47:52杜波高小麗白雪梅
    關(guān)鍵詞:載量乙肝乙型肝炎

    杜波,高小麗,白雪梅

    (榆林市中醫(yī)醫(yī)院 檢驗科,陜西 榆林 719000)

    慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)是全球性疾病,每年導(dǎo)致約100 萬人死亡[1]。乙型肝炎病毒脫氧核糖酸(hepatitis B virus deoxyribonucleic acid,HBV-DNA)的載量水平、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase, ALT)水平和組織學(xué)表現(xiàn)是HBV 治療時應(yīng)考慮的因素[2]?;顒有圆《靖腥緬呙枋峭ㄟ^定量HBV-DNA 來檢測的,但這種檢測是基于分子的,而且費(fèi)用昂貴,考慮到乙肝病毒的分布,特別是在發(fā)展中國家,一種廉價的實驗室測試可以作為HBVDNA 分子檢測的替代[3-4]。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是一種DNA 病毒,具有環(huán)狀和部分雙鏈的基因組,乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)是HBV 包膜上表面抗原,HBsAg 檢測可作為乙型肝炎的初步診斷指標(biāo)[5]。miRNA 對妊娠和肝損傷十分敏感,有研究指出可通過CHB 患者治療前后血清microRNA-122(miR-122)變化預(yù)測干擾素的療效[6]。本研究為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療CHB患者,對CHB 患者血清miR-122、HBV-DNA 載量及ALT 水平的相關(guān)性進(jìn)行了分析,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2017年1月—2019年3月榆林市中醫(yī)醫(yī)院收治的200例CHB 患者作為研究對象。其中,男性121例,女性79例;年齡16 ~78 歲,平均(35.42±4.18)歲;病程1 ~18年,平均(9.17±2.45)年。納入標(biāo)準(zhǔn):①患者符合《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中CHB 的診斷標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)過臨床確診;②年齡16 ~78 歲,病理、臨床及隨訪資料完整;③納入前均未接受過任何治療;④本研究已通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①酒精、藥物等導(dǎo)致的肝損傷患者;②其他器官嚴(yán)重病變患者;③存在資料缺失者;④腫瘤患者;⑤妊娠期或哺乳期婦女;⑥存在意識、精神障礙,無法進(jìn)行語言溝通者。

    1.2 方法

    檢測患者血清ALT 含量、miR-122 水平,分析HBV-DNA 載量與血清miR-122、ALT 含量的相關(guān)性。研究對象均取空腹肘靜脈血5 ml,置于真空采血管中,3 000 r/min 離心3 min,分離血清保存至-80℃冰箱待檢。采用RT-PCR 檢測血清miR-122 水平和HBV-DNA,利用肝功能檢測試劑盒檢測ALT 含量,采用雙抗體夾心法檢測血清乙型肝炎e 抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)、乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg),ELISA 競爭法檢測血清乙型肝炎e 抗體(hepatitis B e antibody, HBeAb)、乙型肝炎核心抗體(hepatitis B core antibody, HBcAb)和乙型肝炎表面抗體(hepatitis B surface antibody, HBsAb),所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。血清標(biāo)志物結(jié)果:HBsAg ≥300 S/N為陽性,HBsAb>10 mIU/ml 為陽性,HBeAg>1.0 S/CO為陽性,HBeAb<1.0 S/CO 為陽性,HBcAb<1.0 S/CO 為陽性。依據(jù)血清標(biāo)志物檢測對照表進(jìn)行分組。模式1:慢性肝炎患者;模式2:早期乙肝感染或慢性攜帶者;模式3:急性乙肝感染期或慢性乙肝表面抗原攜帶者;模式4:急性或慢性乙肝感染者;模式5:感染過乙肝病毒或急性乙肝病毒感染者;模式6:曾感染過乙肝病毒或處于急性感染恢復(fù)期;模式7:既往感染過乙肝,急性感染康復(fù),HBeAb 濃度較低;模式8:既往感染過乙肝,具有保護(hù)性抗體;模式9:既往感染過乙肝,急性感染康復(fù),具有保護(hù)性抗體;模式10:慢性乙肝表面抗原攜帶者或急性感染恢復(fù)期者;模式11:接種乙肝疫苗后,乙肝病毒感染已經(jīng)康復(fù)且已產(chǎn)生免疫力者;模式12:急性乙肝恢復(fù)或慢性攜帶者[8]。ALT ≤40 u/L 定義為正常,ALT>40 ~80 u/L 定義為輕度異常,ALT>80 u/L 定義為異常。HBV-DNA 分組:HBV-DNA<5.00×102copies/ml 作為低病毒載量組,HBV-DNA 在5.00×102~5.00×105copies/ml 作為中病毒載量組,HBV-DNA 在1×105~1×107copies/ml作為高病毒載量組,HBV-DNA>1×107copies/ml 作為超高病毒載量組,分別有91例、46例、25例及38例。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用方差分析,進(jìn)一步的兩兩比較用LSD-t檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示,比較用χ2檢驗;相關(guān)性分析用Pearson 法,P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 CHB 患者不同血清模式的ALT 和HBVDNA 載量比較

    模式1、2、3和4中患者HBV-DNA載量比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=24.820,P=0.000);模式1、2 和3 的患者HBV-DNA 載量較模式4 患者高(P<0.05)。各模式患者血清ALT 含量比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=38.140,P=0.000);模式1 的患者血清ALT 含量較其他模式患者高(P<0.05)。見表1。

    2.2 不同HBV-DNA 組患者血清ALT 陽性率比較

    不同HBV-DNA 組患者血清ALT 陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.124,P=0.000),低病毒載量組最低(P<0.05)。見表2。

    2.3 不同HBV-DNA 組患者miR-122 相對表達(dá)量比較

    低病毒載量組、中病毒載量組、高病毒載量組和超高病毒載量組患者miR-122 相對表達(dá)量分別為(5.31±3.19)、(10.76±2.23)、(15.57±1.62)及(20.46±2.28),經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=37.240,P=0.000),miR-122 相對表達(dá)量隨HBVDNA 載量增高而逐漸上升。

    2.4 相關(guān)性分析

    經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析,HBV-DNA 載量與ALT 和miR-122 均呈正相關(guān)(r=1.024 和0.946,P=0.027 和0.031)。

    表1 CHB 患者不同血清模式的ALT 和HBV-DNA 載量比較

    表2 不同HBV-DNA 組患者血清ALT 陽性率比較例(%)

    3 討論

    CHB 是臨床上常見的傳染病,是感染HBV 所致,該病在我國發(fā)病率較高,為6%~10%,且呈不斷上升的趨勢[9]。目前,乙型肝炎已成為全球衛(wèi)生政策的焦點。繼2014年世界衛(wèi)生大會通過關(guān)于病毒性肝炎的決議之后,該組織于2015年3月發(fā)布了關(guān)于CHB的指導(dǎo)方針以及2016年6月的“全球衛(wèi)生部門病毒性肝炎戰(zhàn)略”[10-11]。這些文件描述了到2030年消除病毒性肝炎對公眾健康構(gòu)成的威脅的目標(biāo),包括從2016年開始,將病毒性肝炎病死率降低65%,但目前只有不到1%的病毒性肝炎患者正在接受治療[12-13]。主要原因為HBV 是CHB 的病原體,其癥狀和表現(xiàn)復(fù)雜,導(dǎo)致CHB 的準(zhǔn)確診斷非常困難[14]。

    HBV-DNA 是反映HBV 復(fù)制活躍程度及傳染性的最直接指標(biāo),也是觀察抗病毒藥物療效、預(yù)后和指導(dǎo)抗病毒藥物應(yīng)用的重要指標(biāo)之一,HBV-DNA 定量的檢測從根本上突破了免疫學(xué)方法等間接方法的局限性,通過直接檢測病毒核酸水平,可真實的反映患者體內(nèi)的病毒水平[15]。在本研究中模式1 ~4 患者均檢測到HBV-DNA 載量,其中模式1、2 患者HBV-DNA載量最高,且4 種模式HBV-DNA 載量比較有差異;而在模式8 ~12 中,12例患者血清HBV-DNA 載量檢測均為陰性,本研究結(jié)果說明單獨檢測HBV-M 載量容易出現(xiàn)假陰性或者假陽性,血清ALT 含量和血清HBV-DNA 載量的相關(guān)性與HBV-M 載量無關(guān)。與覃小梅等[16]研究中提到的HBV-M 對病毒復(fù)制、療效觀察幫助不大結(jié)果相似。

    隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展,臨床上對于HBV 的診斷方法增多,比如HBV 基因檢測、核酸檢測等。HBV-DNA 是反映體內(nèi)HBV 感染、復(fù)制和傳染性強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn),HBeAg 也是說明體內(nèi)病毒復(fù)制的良好指標(biāo)[17]。血清ALT 與肝細(xì)胞受損有直接關(guān)系,是體現(xiàn)肝細(xì)胞受損的直接指標(biāo)。多指標(biāo)聯(lián)合檢測更有助于CHB 的診斷[18]。在本研究中低病毒載量組患者ALT陽性最低,各病毒載量組患者ALT 陽性率有差異,HBV-DNA 載量與ALT 含量呈正相關(guān),結(jié)果表明在一定范圍內(nèi)HBV-DNA 載量越高,HBV 感染復(fù)制率越高,ALT 陽性率越高,患者肝臟損傷加重。

    miRNA 是非編碼RNA 轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶基因,其不僅在細(xì)胞發(fā)育中、分化和生理功能中起著重要作用,而且在腫瘤、病毒感染和其他密切相關(guān)疾病的發(fā)展中也具有重要意義[19]。此外,miR 分子在某些疾病評估中越來越被認(rèn)為是一種診斷和預(yù)后指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn),miRNAs 可調(diào)節(jié)多種肝功能,報告了miRNAs 在與HBV 感染相關(guān)的腫瘤診斷中的作用[20]。miR-122 是肝臟中最豐富的miRNA 類型,miR-122 的變化不僅與CHB 的發(fā)病相關(guān),而且與肝損傷相關(guān)[21]。在本研究中,miR-122 相對表達(dá)量隨著HBV-DNA 載量增高而逐漸上升,與HBV-DNA 載量呈正相關(guān),miR-122可抑制HBV 的復(fù)制,提示miR-122 可能與CHB 和肝癌的發(fā)生有關(guān)。

    綜上所述,CHB 患者血清miR-122 和HBV-DNA及肝功能之間存在一定相關(guān)性,三者聯(lián)合檢測可以相互補(bǔ)充,提高診斷的準(zhǔn)確性,為臨床診治CHB 患者提供科學(xué)依據(jù)。

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