高爾基體蛋白73與肝癌診療相關(guān)研究進(jìn)展

曾 灝 翚 纓 張林芝

廣西壯族自治區(qū)貴港市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西貴港 537100

[關(guān)鍵字]肝癌；GP73；診療；研究進(jìn)展

血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）的出現(xiàn)，使得AFP一度被認(rèn)為是肝癌診斷的首選腫瘤標(biāo)志物，但其在早期診斷中存在一定的局限性，有部分肝癌患者其血清AFP呈現(xiàn)出較高的假陰性率（可高達(dá)40%）或者低值，在明確確診為肝癌后卻多為肝癌晚期，此時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過了最有效的治療時(shí)間，限制了AFP在肝癌診斷中的普遍應(yīng)用[1]。因此，國內(nèi)外臨床方面一直致力于尋求一種能早期發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞肝癌更有效的腫瘤標(biāo)志物。過去幾十年，臨床研究從單個(gè)蛋白到組合蛋白，再到蛋白組學(xué)及腫瘤自身抗體等，其研究結(jié)果均未能盡如人意。

1 GP73的發(fā)現(xiàn)

直到2000年，研究成人巨細(xì)胞肝炎的美國學(xué)者Kladney等[2]在構(gòu)建患者的肝臟cDNA文庫時(shí)，應(yīng)用正常肝細(xì)胞cDNA文庫的32P標(biāo)記探針進(jìn)行差異顯示雜交，從中發(fā)現(xiàn)在成人巨大細(xì)胞肝炎患者的肝臟內(nèi)，其cDNA可與新城疫病毒發(fā)生反應(yīng)，后利用5’cDNA快速擴(kuò)增技術(shù)和雙向測序，得出該cDNA為編碼相對(duì)分子量為73 kD糖蛋白的基因，即高爾基體蛋 白73（golgi transmembrane glycoprotein73，GP73）基因。經(jīng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，GP73基因位于9號(hào)染色體，全長3042 bp，根據(jù)其基因序列推測其編碼的蛋白質(zhì)分子約為4.5×104個(gè)，但由于GP73基因在體內(nèi)經(jīng)過大量糖基化處理后，含有較多的酸性氨基酸，使其實(shí)際分子量只有73 kD。在一般情況下，GP73能通過多種上皮細(xì)胞表現(xiàn)出來，肺部是通過纖毛柱狀上皮細(xì)胞將GP73表達(dá)出來，腎臟是通過遠(yuǎn)曲小管和集合管上皮細(xì)胞表達(dá)GP73，前列腺是通過前列腺上皮細(xì)胞表達(dá)，而肝臟則是由膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，但特殊的是，正常的肝細(xì)胞是不表達(dá)或者表達(dá)量極少的。

2 GP73在肝癌診斷中的臨床價(jià)值

Kladney等[3]在研究慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝硬化以及正常肝組織GP73表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，肝病患者肝組織中GP73表達(dá)量與正常受檢組相比較高，且是正常受檢組的70倍左右，而對(duì)各組肝病患者進(jìn)行GP73表達(dá)量之間對(duì)比時(shí)，發(fā)現(xiàn)無明顯差異。在2004年，Maitra等[4]研究發(fā)現(xiàn)，可以在血清中檢測到GP73，并認(rèn)為GP73可以作為肝臟疾病的標(biāo)志物。在2005年，英國Block[5]在對(duì)美洲旱獺HCC血清GP73含量進(jìn)行檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，GP73水平與HCC之間關(guān)系密切；在同年，Marerero等[6]對(duì)352名患者進(jìn)行研究的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清GP73含量與肝硬化患者相比明顯升高，并以10個(gè)相對(duì)單位為臨界值，GP73診斷HCC的敏感性和特異性分別為69%和75%，其診斷效果明顯優(yōu)于AFP。Schwegler等[7]的研究結(jié)果與Marerero研究結(jié)果相似，但其結(jié)果顯示GP73診斷肝癌的敏感性和特異性都比Marerero的研究結(jié)果高，由此認(rèn)為，GP73可作為早期診斷肝癌的腫瘤標(biāo)志物之一。

近幾年來，我國有較多的學(xué)者對(duì)GP73在肝癌診斷中的應(yīng)用進(jìn)行了研究。崔琦等[8]通過對(duì)血清中的AFP、GP73、血清鐵蛋白（serum ferritin，SF）及異常凝血酶原（des-gamma-carboxy prothrombin，DCP）單獨(dú)和聯(lián)合檢測來探討這四個(gè)標(biāo)志物在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價(jià)值，研究結(jié)果顯示，四個(gè)標(biāo)志物聯(lián)合檢測均優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測，可提高原發(fā)性肝癌的陽性診斷率，對(duì)原發(fā)性肝癌的早期診斷具有重要的臨床價(jià)值。國世星[9]通過回顧性分析研究AFP、DCP、甲胎蛋白異質(zhì)體（alpha-fetoprotein variant-L3，AFP-L3）和GP73在早期原發(fā)性肝癌組、肝硬化組、肝炎組、健康對(duì)照組中的血清濃度水平時(shí)，也證實(shí)了GP73聯(lián)合檢測在早期原發(fā)性肝癌診斷中具有診斷意義，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)其可用于評(píng)估肝臟受損程度。此外，研究表明，在對(duì)原發(fā)性肝癌的早期診斷中，血清GP73與SF、AFP聯(lián)合應(yīng)用能夠提高診斷敏感性[10]。

黃風(fēng)玲等[11]對(duì)肝癌患者的肝癌組織及配對(duì)癌旁組織進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)GP73在肝癌組織中多呈陽性表達(dá)，在不同分化程度、不同TNM分期、有無血管侵犯患者的肝癌組織中，GP73表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，揭示其可能參與肝癌的發(fā)生與發(fā)展。劉麗萍等[12]通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染、基因敲除等實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)GP73的表達(dá)可能與肝腫瘤侵襲、增殖和轉(zhuǎn)移有關(guān)。Liu等[13]通過對(duì)29例健康受檢者和69例經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)（TACE）治療的肝癌患者進(jìn)行血清GP73的ELISA檢測與對(duì)比，結(jié)果顯示，GP73可作為肝癌標(biāo)志物來評(píng)價(jià)經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞治療后的預(yù)后情況。趙睿等[13]與Ai等[14]的研究結(jié)果相似，同時(shí)發(fā)現(xiàn)血清GP73可以作為原發(fā)性肝癌患者TACE術(shù)療效判斷的指標(biāo)，尤其是在AFP較低或AFP陰性時(shí)，GP73作為療效的評(píng)價(jià)指標(biāo)比AFP更有優(yōu)勢。唐輝等[15]研究發(fā)現(xiàn)GP73聯(lián)合診斷除了對(duì)原發(fā)性肝癌具有一定診斷價(jià)值外，同時(shí)也對(duì)TACE術(shù)后預(yù)后具有評(píng)估價(jià)值。

GP73臨床價(jià)值的研究，也存在爭議。MAO等[16]的研究顯示，肝細(xì)胞癌患者血清中GP73水平遠(yuǎn)高于無肝硬化或者慢性肝病患者，但與肝硬化患者相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示血清GP73檢測無法鑒別肝硬化和肝癌，因此血清GP73對(duì)肝癌的診斷無價(jià)值，同時(shí)血清GP73用作HCC診斷的ROC曲線下面積過小，診斷效能不足。區(qū)別于血清AFP水平在術(shù)后的立即明顯下降，血清GP73水平卻在肝癌組織切除后濃度基本一致，進(jìn)一步提示血清GP73水平與肝癌是否存在沒有相關(guān)性[17]，并且血清GP73水平與腫瘤細(xì)胞的GP73表達(dá)水平無相關(guān)性[18]。肝癌臨床相關(guān)資料的分析結(jié)果也證實(shí)了腫瘤大小、分化程度、TNM分期等臨床特征與血清GP73水平無關(guān)。故不推薦血清GP73用于原發(fā)性肝癌的實(shí)驗(yàn)室診斷。與此相反的是，血清GP73在肝纖維化、肝硬化的診斷及預(yù)后評(píng)估中，表現(xiàn)出值得預(yù)期的診斷價(jià)值。隨著肝纖維化程度加深以及肝硬化逐步進(jìn)展，血清GP73水平也隨之提高，從而將進(jìn)展期肝纖維化、早期肝硬化與慢性肝病區(qū)分開來，提示其對(duì)肝硬化的診斷有較高的價(jià)值。

綜上，GP73在肝癌的臨床診斷價(jià)值還有待通過進(jìn)一步大量臨床數(shù)據(jù)地驗(yàn)證和研究，方可下定論，但血清GP73在肝纖維化、肝硬化的臨床診斷價(jià)值已得到拓展。

3 GP73與肝癌的臨床治療

3.1 GP73與索拉菲尼

索拉菲尼是一種新型多靶向性的治療腫瘤的口服藥物，用于治療對(duì)標(biāo)準(zhǔn)療法無響應(yīng)或不能耐受的胃腸道基質(zhì)腫瘤和轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌，能選擇性地靶向某些蛋白的受體。近幾年來，臨床方面對(duì)索拉菲尼的研究主要集中在腫瘤缺氧微環(huán)境、炎癥纖維化、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白以及索拉菲尼的藥物動(dòng)力學(xué)等方面，但索拉菲尼對(duì)肝癌治療中的耐藥性尚且無明確的結(jié)論。楊歡等[19]通過研究發(fā)現(xiàn)GP73在肝癌索拉菲尼耐藥細(xì)胞株中呈高表達(dá)，HepG2細(xì)胞通過表達(dá)GP73能夠降低細(xì)胞對(duì)索拉菲尼的敏感性，耐藥細(xì)胞株中降低GP73之后能夠升高細(xì)胞對(duì)索拉菲尼的敏感性，從而得到GP73的高表達(dá)能夠降低HepG2細(xì)胞對(duì)索拉菲尼的敏感性的結(jié)論。楊穎等[20]的研究證實(shí)了楊歡的結(jié)論，在進(jìn)一步的研究中，還發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)胞中，GP73、PI3K及p-Akt蛋白表達(dá)增加，從而得知PI3K/Akt信號(hào)通路的激活以及GP73表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化可能是肝癌細(xì)胞對(duì)索拉非尼的耐藥機(jī)制。因此對(duì)GP73做進(jìn)一步深入研究，能為肝癌靶向藥物的耐藥研究提供更多的思路。

3.2 GP73與雷帕霉素

雷帕霉素是新型大環(huán)內(nèi)酯的抗排斥藥物，同時(shí)也是一種哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的特異性抑制劑，能通過不同的細(xì)胞因子受體阻斷信號(hào)的傳導(dǎo)，阻斷T淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞由G1期至S期的進(jìn)程，從而發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)[21]。雷帕霉素是目前世界上最新的強(qiáng)效免疫抑制劑，臨床上用于器官移植的抗排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的治療，在抗腫瘤治療中也具有明顯療效。但目前，臨床上對(duì)于雷帕霉素在肝癌臨床治療中機(jī)制尚且不太明確，Wang等[22]通過對(duì)細(xì)胞水平與動(dòng)物水平的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，mTORC1通路能促使GP73上調(diào)，并進(jìn)一步促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，而在應(yīng)用雷帕霉素之后，GP73表達(dá)水平能夠大幅度降低，從而對(duì)肝癌的發(fā)生及發(fā)展形成抑制作用，由此可表明，mTOR抑制劑雷帕霉素或?qū)⒊蔀楦伟┲委煹男掳悬c(diǎn)。

4 結(jié)語

自2000年GP73被首次發(fā)現(xiàn)以來，就被認(rèn)為是最具有潛力的肝癌腫瘤標(biāo)志物，關(guān)于GP73的研究一直沒有停止。對(duì)GP73血清學(xué)的檢查技術(shù)，已由最初手工的酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)，發(fā)展到現(xiàn)在自動(dòng)化的化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)，其檢測的可靠性得到進(jìn)一步地提升，所以越來越多的實(shí)驗(yàn)室將GP73檢測納入其檢測范圍。眾所周知，GP73在肝癌診斷中的臨床效能還需要更多的臨床數(shù)據(jù)來支持才能得出結(jié)論，特別是其對(duì)肝癌的早期診斷價(jià)值。而GP73檢測的臨床應(yīng)用，不應(yīng)該局限于肝癌，在其他疾病方面的應(yīng)用，也應(yīng)該是廣大醫(yī)學(xué)工作者關(guān)注方向，如GP73對(duì)肝纖維化和肝硬化的診斷效能，在此研究方向，已經(jīng)有一定的研究數(shù)據(jù)來支持。還要特別注意的是，目前檢測的腫瘤標(biāo)志物只是相關(guān)抗原，不僅在某些腫瘤人群中有所表達(dá)，在某些非腫瘤患者中也會(huì)存在有一定的假陽性率，這會(huì)使得單項(xiàng)指標(biāo)檢測的診斷準(zhǔn)確率較低，因此，肝癌的檢測不應(yīng)該局限于GP73單項(xiàng)檢測，聯(lián)合其他血清標(biāo)志物的檢測，也是一個(gè)重要的發(fā)展方向，這樣能提高診斷的準(zhǔn)確率。

目前針對(duì)GP73與肝癌臨床治療的相關(guān)研究數(shù)據(jù)量較少，主要停留在基礎(chǔ)研究方面，仍需大數(shù)據(jù)支持才能應(yīng)用于臨床。但GP73與治療相關(guān)的潛力已得到展現(xiàn)，如上述未提到的GP73中和抗體，其在動(dòng)物水平上的應(yīng)用，能夠抑制肝臟腫瘤的生長，從而延長了動(dòng)物的存活期。相信以后會(huì)有更多研究發(fā)現(xiàn)GP73在治療方面的價(jià)值。

綜上所述，隨著更多、更深層次研究地進(jìn)行，GP73的臨床價(jià)值和治療作用會(huì)得到更廣闊的發(fā)展和體現(xiàn)。