微柱凝膠法配血不合的原因及處理方法

張 剛 紀芳芳 申寶鳴 趙 林

山東國欣頤養(yǎng)集團新汶中心醫(yī)院檢驗科，山東泰安 271219

交叉配血測定是輸血治療前的檢測指標，也是臨床安全輸血的關(guān)鍵保障，以往臨床多見的鹽水法測定交叉配血測定，簡單方便，但僅僅能夠測定出免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）抗體，無法測定免疫球蛋白G（immunoglobulin M，IgG）抗體。酶法以及抗人球蛋白試驗（Coombs'試驗）的應(yīng)用，雖然能夠測定出IgG抗體，但是操作流程復(fù)雜，當前無法作為常規(guī)測定進行推廣?？紤]到上述研究方法的缺陷，開始應(yīng)用微柱凝膠法（microcolumn gel method，MGT）進行交叉配血，因其較高的準確性和靈敏性，得到臨床大規(guī)模應(yīng)用，且配血狀態(tài)下也存在程度不同的陽性結(jié)果[1]。但在配血中，發(fā)生弱陽性結(jié)果，如果無法進行快速準確的判定，將導(dǎo)致輸血安全性受到影響?；谏鲜鲅芯勘尘?，本文對60例交叉配血不合患者進行分析，研究交叉配血不合原因以及解決措施?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017年2月至2020年3月山東國欣頤養(yǎng)集團新汶中心醫(yī)院共記錄出現(xiàn)交叉配血不合患者60例，采用回顧性分析，記錄60例患者基本資料，其中男26例，女34例，年齡55～84歲，平均（62.25±1.33）歲；其中32例患者出現(xiàn)第二次配血不合情況。納入標準：①應(yīng)用乙二胺四乙酸二鉀（EDTAK2）進行抗凝血[2]，采血量≥2 ml，加入試管后混合6～8次后搖勻，3000 r/min離心5 min；②對本研究知情，簽訂同意書。排除標準：①患傳染性疾?。虎诟文I功能障礙。對無法溶血的患者，血標本不染菌處理，在當日采集最新鮮的血液。

1.2 方法

MGT交叉配血，依據(jù)說明準確操作。對受血者和供血者的血漿以及紅細胞進行分離，將紅細胞應(yīng)用低離子介質(zhì)溶液配比成1%的紅細胞懸液，取出配血卡，對測定號標記，記錄好主側(cè)以及次側(cè)，將封口膜撕開。主側(cè)管中加入受血人員的血漿50 μl以及供血人員1%紅細胞懸液50 μl；次側(cè)管中加入供血人員的血漿50 μl以及受血人員1%紅細胞懸液50 μl。放置在37 ℃度孵育15 min，離心10 min記錄結(jié)果。

1.3 觀察標準

記錄患者交叉配血不合的因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用[n（%）]表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

本研究包括60例MGT交叉配血不合患者數(shù)據(jù)記錄。①有8例（13.33%）患者屬于不規(guī)則抗體，這8例患者均有輸血史，在配血特征中，屬于主側(cè)凝聚。譜細胞測定，抗-E抗體共6例，抗-M抗體共2例。②有14例（23.33%）患者屬于自身抗體導(dǎo)致的交叉配血不合。歸屬為自身免疫性疾?。╝utoimmune diseases，AD）[3]，有 2例（3.33%）屬于自身免疫性溶血性貧血（autoimmune hemolytic anemia，AIHA）[4]，在配血特征中，屬于主側(cè)凝聚、次側(cè)凝聚，采用Coombs'試驗[5]直接測定，結(jié)果為陽性，間接測定為陽性，未檢測出特異性抗體。其余12例（20.00%）患者明顯特征為次側(cè)凝聚，保持在DAT陽性狀態(tài)，區(qū)間范圍±～4+，另2例（3.33%）屬于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）[6]，10例（16.67%）屬于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatic arthritis，RA）[7]。此類患者的抗核抗體、類風(fēng)濕因子記錄陽性。且無黃疸以及脾大的情況，血清蛋白比值處于正常狀態(tài)。③有32例（53.33%）患者屬于藥物導(dǎo)致，配血特點屬于單獨性次側(cè)凝聚，DAT陽性（±～4+），此類患者所具有的明顯特征為：只有藥物影響導(dǎo)致DAT陽性。④有6例（10.00%）患者，屬于血清蛋白不穩(wěn)定及白球比例導(dǎo)致的假凝聚狀態(tài)，此類患者具有的明顯特征為血清蛋白（編號1e7i）障礙/白球比例失衡。

有50例交叉配血次側(cè)不相合的案例，其中6例（10.00%）為血清蛋白紊亂和白球比例倒置引起的假凝集、32例（53.33%）疑似藥物引發(fā)，配血呈現(xiàn)為單獨次側(cè)凝集，主側(cè)多為陰性狀態(tài)，而在次側(cè)的反應(yīng)中，出現(xiàn)有差異的凝聚狀態(tài)，凝聚顆粒特征為不規(guī)則分布，這些凝聚的顆粒均在微柱中，并未處于頂部，12例（20.00%）為自身免疫性病癥，10例（16.67%）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，2例（3.33%）為系統(tǒng)性紅斑狼瘡。

3 討論

交叉配血測定是確保臨床輸血安全度提高的一種主要方式，目前MGT因操作簡單，重復(fù)性以及靈敏度較高，目前已經(jīng)在我國廣泛應(yīng)用。因MGT的靈敏度相對比較高，在提升對不相容抗原以及抗體測定能力時，會導(dǎo)致直抗陽性形成[8]。

本研究中，8例（13.33%）屬于不規(guī)則抗體，這8例患者均有輸血史，在配血特征中，屬于主側(cè)凝聚。譜細胞測定，抗-E抗體共計6例，抗-M抗體共計2例。上述案例的分析中，分析可能是患者的血漿中出現(xiàn)同一種抗體和供血者紅細胞上的抗原起反應(yīng)。處理對策：第二次檢查的受供人員ABO以及RH血型[9]，檢查證實，血型鑒定均準確，檢測血液交叉配血情況，行血液輸注[10]。而后經(jīng)過血站的測定有6例存在含有IgG抗-E抗體，2例為含有抗-M抗體。另有2例為：主側(cè)（+）、次側(cè)（+）、自身（-）、DAT（+）、抗體篩選（+）。處理對策[11-12]：采用吸收放射檢測進行不規(guī)則抗體篩查[13]。

有50例交叉配血次側(cè)不相合的案例中6例（10.00%）為血清蛋白紊亂和白球比例倒置引起的假凝集、32例（53.33%）疑似藥物引發(fā)，配血呈現(xiàn)為單獨次側(cè)凝集，主側(cè)多為陰性狀態(tài)[14]，而在次側(cè)的反應(yīng)中，出現(xiàn)有差異的凝聚狀態(tài)[15]，凝聚顆粒特征為不規(guī)則分布，這些凝聚的顆粒均在微柱中，并未處于頂部[16]，12例為自身免疫性病癥，10例為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，2例為系統(tǒng)性紅斑狼瘡，主要反映為：主側(cè)為（-）、次側(cè)為（+）、自身為（-）、DAT 為（+）、抗體篩選為（-），處理方式為：患者進行DAT試驗，復(fù)查受供人員ABO和RH血型，滿足輸血指征[17]。對于手術(shù)患者Hb＜70 g/L，不進行手術(shù)的患者其Hb應(yīng)＜60 g/L，適當輸注主側(cè)相滿足的洗滌紅細胞[18]。

應(yīng)用青霉素以及頭孢菌素類處理，對于上述抗生素藥物可以影響其Coombs'試驗，當紅細胞膜受到如頭孢菌素藥物的影響[19]，而產(chǎn)生變化，則造成蛋白非特異性被紅細胞吸附，導(dǎo)致DAT陽性，這一部分患者不存在自身免疫性疾病以及輸血反應(yīng)，且血漿總蛋白處于正常的狀態(tài)，因此疑似為藥物導(dǎo)致敏感。

MGT的靈敏度較高，因此檢出直抗陽性紅細胞的比率較高，這也是MGT方式配血不合的關(guān)鍵因素。在研究中如果配血呈現(xiàn)為主側(cè)陰性，次側(cè)為弱陽性時，且其余檢查抗篩呈現(xiàn)為陰性，同時自身對照為陽性，直抗陽性，那么在確定血型測定沒有差異后，輸注紅細胞懸液不會出現(xiàn)副作用[20]。造成紅細胞直抗陽性的因素較多，不僅僅是溶血性輸血疾病，新生兒溶血疾病，也包括自身免疫性貧血反應(yīng)。

另外因MGT受到內(nèi)部以及外部的多種因素影響，因此也可以說在某種情況下，會導(dǎo)致假凝集情況出現(xiàn)，這一情況的發(fā)生因素如下：（1）顆粒物受阻，因紅細胞懸液中，白細胞的計數(shù)較高，且血小板呈現(xiàn)為聚集的狀態(tài)，或者出現(xiàn)紅細胞小凝塊出現(xiàn)，均導(dǎo)致凝膠微孔受阻，進一步造成紅細胞下沉游離，引發(fā)假聚集；（2）標本抗凝不完全，當纖維蛋白解析出紅細胞游離狀態(tài)時，從而導(dǎo)致假聚集狀態(tài)，這一情況也多發(fā)生在應(yīng)用血袋供血人員的血漿標本；（3）老舊標本，應(yīng)用老舊標本進行配血，紅細胞在體外導(dǎo)致過敏，引發(fā)假凝集；（4）離心不完全，離心機轉(zhuǎn)速改變，或者配血卡沒有對稱放置造成假凝集。強化配血的每一個流程質(zhì)量控制，可降低配血不合情況，提升輸血工作質(zhì)量。

綜上所述，MGT的應(yīng)用，其準確度較高，但是在予以交叉配血測定的過程中，需要對陽性數(shù)據(jù)進行詳細觀察判定，從而更進一步確保輸血的安全性，同時考慮到本研究數(shù)據(jù)存在一定限制，研究樣本有限，建議后期臨床可加大樣本量進行深入分析，以此判定更為準確的安全性數(shù)值。