酶聯(lián)免疫吸附法與冷凝集試驗(yàn)在早期肺炎支原體感染中的診斷比較

孫娟子，孫蘇娟，白嬌紅，李園園

（1.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 洛陽(yáng)471000 2.洛陽(yáng)市婦女兒童保健中心 檢驗(yàn)科，河南 洛陽(yáng) 471000）

支原體肺炎是由肺炎支原體感染引起的一種流行性疾病，多發(fā)于兒童，臨表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咽痛、頭痛等癥狀［1］。肺炎支原體主要通過(guò)呼吸道飛沫方式傳播，具有一定的潛伏性，在早期并無(wú)明顯臨床癥狀，導(dǎo)致早期診斷難度較大［2］。實(shí)驗(yàn)室檢查是目前臨床檢測(cè)早期肺炎支原體感染的主要手段，以往，臨床常采用冷凝集試驗(yàn)（CAT）進(jìn)行診斷，但其操作較為復(fù)雜。而酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）為近年來(lái)實(shí)驗(yàn)室檢查常用的檢測(cè)方法之一，具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)?；诖?，本研究選旨在分析ELISA 在早期肺炎支原體感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，以為臨床提供參考。具體信息如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年2 月至2019 年12 月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的80 例疑似為肺炎支原體感染患兒作為研究對(duì)象，其中男37 例，女43 例；年齡2～8 歲，平均（5.36±1.21）歲；病程4～10 d，平均（7.02±2.05）d。本研究經(jīng)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①X 線檢查顯示肺部存在片狀陰影；②支原體培養(yǎng)陽(yáng)性，白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）≥12.0×109，紅細(xì)胞沉降率（ESR）≥15 mm/h；③均行CAT 及ELISA 兩種方法檢測(cè)患者；④患兒監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有先天性心臟病者；②凝血功能障礙者；③過(guò)敏體質(zhì)者；④合并傳染性疾病者；⑤合并肝、腎等器官功能衰竭者。

1.3 方法

采集樣本：采集患兒空腹靜脈血2 mL，以3 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心10 min，取上層清液保存待檢。檢測(cè)方法：①ELISA：使用上海市海天醫(yī)療器械生物有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體免疫球蛋白M（IgM）抗體試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的具體步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明進(jìn)行，若患兒血清標(biāo)本吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值的比值≥1.1，即可判定為陽(yáng)性。②CAT：常溫下，使用患兒自身紅細(xì)胞與5 倍0.9%氯化鈉溶液配置人紅細(xì)胞懸液，取相同10 支試管，分別標(biāo)上1～10 號(hào)，分別加入0.1 mL 血清與0.9%氯化鈉溶液，并搖晃使兩者融合，然后吸取第1 支試管0.1 mL 放置第2 支試管中，按照此方法加至第9 支試管，以第10 支試管為對(duì)照，分別在10 支試管中加入0.1 mL 配置好的紅細(xì)胞懸液，放置在4℃下冷置60 min，若出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，立即加入37℃水浴中，若凝集消失即可判定為陽(yáng)性，滴度>1∶32 即有參考意義。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)

以痰培養(yǎng)檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，記錄ELISA與CAT 檢測(cè)結(jié)果，并計(jì)算ELISA 與CAT 診斷該疾病的準(zhǔn)確度［（a+b）/n］、靈敏度［a/（a+c）］、特異度［d/（b+d）］、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值［a/（a+b）］、陰性預(yù)測(cè)值［d/（c+d）］；其中a 為ELISA 與CAT 檢測(cè)結(jié)果與痰培養(yǎng)均為陽(yáng)性；b 為ELISA 與CAT 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，痰培養(yǎng)為陰性；c 為ELISA與CAT 檢測(cè)結(jié)果為陰性，痰培養(yǎng)為陽(yáng)性；d 為ELISA 與CAT 檢測(cè)結(jié)果與痰培養(yǎng)均為陰性；n為總例數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Kappa一致性檢驗(yàn)分析CAT、ELISA 診斷肺炎支原體感染與痰培養(yǎng)的一致性，Kappa≥0.74 提示一致性好，0.4～0.74 提示一致性一般，<0.4 提示一致性差。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA 診斷早期肺炎支原體感染的效能分析

本研究80 例患兒中，有58 例痰培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性，占比72.50%（58/80），22 例痰培養(yǎng)結(jié)果為陰性，占比27.50%（22/80）。CAT 診斷早期肺炎支原體感染的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為81.25%（65/80）、86.21%（50/58）、68.18%（15/22）、87.72%（50/57）、65.22%（15/23）。ELISA 診斷早期肺炎支原體感染的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為91.25%（73/80）、96.55%（56/58）、77.27%（17/22）、91.80%（56/61）、89.47%（17/19），高于CAT。見(jiàn)表1。

2.2 一致性分析

經(jīng)Kappa 一致性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，CAT 診斷肺炎支原體感染與痰培養(yǎng)的一致性一般，Kappa 值為0.536；ELISA 診斷肺炎支原體感染與痰培養(yǎng)的一致性較好，Kappa 值為0.771，優(yōu)于CAT。

3 討論

肺炎支原體通過(guò)空氣中的飛沫傳播后可侵入患兒呼吸道黏膜，并大量增殖，引起支氣管紅細(xì)胞增多、局部水腫，進(jìn)而發(fā)展為支原體肺炎［3］。支原體肺炎不僅會(huì)對(duì)患兒呼吸系統(tǒng)造成損傷，且會(huì)引起腎炎、心肌炎、腦膜炎等其他系統(tǒng)并發(fā)癥，對(duì)患兒生命健康造成一定影響，若未得到及時(shí)治療，將嚴(yán)重影響患兒預(yù)后［4］。因此，尋找準(zhǔn)確、快捷的方式診斷該疾病具有重要意義。

臨床用于肺炎支原體感染輔助診斷的監(jiān)測(cè)方法較多，包括明膠顆粒凝集法、CAT、ELISA、金標(biāo)斑點(diǎn)法、支原體培養(yǎng)法等［5］。其中明膠顆粒凝集法診斷肺炎支原體感染的敏感性最高，且檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，不需使用儀器設(shè)備，但該方法檢測(cè)試劑成本較高，無(wú)法在臨床得到廣泛推廣及應(yīng)用；金標(biāo)斑點(diǎn)法敏感度較低，臨床很少采用此方法，痰培養(yǎng)為診斷肺炎支原體感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于其培養(yǎng)條件苛刻，且培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)（約為6 周），而患兒的病情需及時(shí)治療，導(dǎo)致無(wú)法盡早診斷肺炎支原體感染，導(dǎo)致臨床早期快速鑒別診斷受限［6-7］。而CAT、ELISA 為目前臨床診斷肺炎支原體感染常用的兩種方法，具有檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單特點(diǎn)，但臨床對(duì)于哪種方法更適合在臨床推廣尚存在一定爭(zhēng)議［8］。本研究結(jié)果顯示，ELISA診斷肺炎支原體感染的準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于CAT，且經(jīng)一致性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，ELISA 診斷肺炎支原體感染與痰培養(yǎng)的一致性?xún)?yōu)于CAT，提示ELISA 可作為臨床診斷早期肺炎支原體感染的首選方式，以提高診斷準(zhǔn)確度，降低漏診、誤診率。

綜上所述，ELISA 檢測(cè)診斷早期肺炎支原體感染具有較高的臨床價(jià)值，可為臨床早期治療提供可靠的參考依據(jù)。