氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定精甲霜靈在黃瓜和土壤中的殘留行為

何宗桃，肖成忠，鄧義才，鄧 軍

（1.張家界市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心，湖南張家界 427000；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品公共監(jiān)測中心，廣東廣州 510640）

精甲霜靈（metalaxyl-M）是甲霜靈兩個異構(gòu)體中的一個，是甲霜靈的高效體，化學(xué)名稱為N-（2-甲氧基乙?；?N-（2，6-二甲苯基）-D-丙氨酸甲酯。精甲霜靈是一種低毒廣譜的氨基甲酸酯類殺菌劑，具有藥效高、內(nèi)吸性強、雙向傳、殘效期長等特點，在同等防病效果的情況下，只需甲霜靈用量的一半。在土壤中降解速度比較快，提高了對使用者和環(huán)境的安全性，對果蔬、煙草、糧油等作物上由霜霉病菌、疫霉病菌、腐霉病菌所致的病害具有高效較好的防治效果，毒性急、效果快，但容易產(chǎn)生抗藥性，常與其他藥劑混配使用，如精甲霜靈氟嗎啉、精甲霜靈惡霉靈、精甲霜靈錳鋅等[1-4]。

目前，文獻(xiàn)中已有精甲霜靈在煙葉、西瓜、馬鈴薯、西紅柿、黃瓜等作物的殘留動態(tài)研究報道，未見精甲霜靈在黃瓜及土壤上的殘留行為的相關(guān)報道。對精甲霜靈殘留量的測定方法較多，有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法。本試驗提出了一種操作簡單，準(zhǔn)確度和精密度均符合殘留分析要求的精甲霜靈氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，分析了精甲霜靈在黃瓜和土壤中的殘留行為，以期為黃瓜中精甲霜靈殘留檢測提供技術(shù)參考，為甲霜靈在黃瓜上的安全使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

精甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)品（某企業(yè)提供）；乙腈：色譜純；丙酮：色譜純；無水MgSO4：分析純；NaCl：分析純。

氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（氣相系統(tǒng)：安捷倫7890B；質(zhì)譜系統(tǒng)：安捷倫5977）；搗碎機；電子天平；精密移液槍；高速離心機、氮吹儀以及其他實驗室常用儀器設(shè)備。

1.2 田間試驗設(shè)計

試驗于2014－2015年在廣東省廣州市、山東省濟南市、湖南省張家界市三地露天試驗地進(jìn)行。供試農(nóng)藥為15%精甲霜靈氟嗎啉可濕性粉劑。按農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則要求設(shè)計試驗小區(qū)，每小區(qū)面積20m2，各小區(qū)之間設(shè)隔離帶保護行，重復(fù)3次，另設(shè)不施藥對照區(qū)，用來采集空白對照樣品，采用手動噴霧器噴霧施藥，整個試驗階段禁用與精甲霜靈類似的農(nóng)藥。

1.2.1 消解動態(tài)試驗

黃瓜消解動態(tài)：采用1次施藥多次采樣方法進(jìn)行，并做標(biāo)記，施藥劑量為225 ga.i/hm2。在黃瓜生長到成熟個體一半大小時施藥，施藥后2h、1、3、5、7、10、14、21、28d用隨機方法在試驗小區(qū)內(nèi)不同位置采集確已著藥、生長正常、無病害的黃瓜果實（2kg以上）。

土壤消解動態(tài)：選一20m2無作物空白平整無植被土地，以225ga.i/hm2施藥濃度，按照當(dāng)?shù)攸S瓜園的每畝噴藥用水量換算出該小區(qū)的用藥量和用水量，進(jìn)行均勻噴霧。土壤取樣時間同黃瓜動態(tài)樣品，樣品采集12點，取土深度為0～10cm，取樣量不少于1kg。

1.2.2 最終殘留試驗

設(shè)兩個施藥劑量，分別為低劑量（150ga.i/hm2）和高劑量（225ga.i/hm2），施藥次數(shù)為2次和3次，施藥時間為黃瓜生長到成熟個體一半大小時，施藥間隔期7d，每個處理重復(fù)3次，并做標(biāo)記。于末次施藥后1、2、3、5d采集黃瓜和土壤樣品（取土深度為0-15cm）。

1.2.3 黃瓜果實和土壤樣品預(yù)處理

黃瓜樣品：將黃瓜取出果柄，切碎、混勻，四分法留樣250g，于-20℃保存?zhèn)溆?。土壤樣品：去除石塊、雜草及根莖等，過1mm孔徑分樣篩，混勻，四分法留樣250g，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 測定方法

1.3.1 黃瓜樣品前處理

準(zhǔn)確稱取均質(zhì)后的樣本10g于離心管中，加入乙腈10ml，渦旋震蕩1min，然后加入1.0g NaCl和4.0g無水MgSO4渦旋1min，3800r/min離心5min，取上層清液1ml于5ml離心管中，氮吹儀吹干，用丙酮定容至1ml，過0.22μm濾膜到自動進(jìn)樣瓶中，待測。

1.3.2 土壤樣品前處理

準(zhǔn)確稱取搗碎的土壤樣本5g于離心管中，加入乙腈10ml，渦旋震蕩1min，然后加入1g NaCl和2g MgSO4渦旋1min，3800r/min離心5min。取上層清液1ml于5ml離心管中，氮吹儀吹干，用丙酮定容至1ml，過0.22μm濾膜到自動進(jìn)樣瓶中，待測。

1.4 分析測定

色譜條件：色譜柱：HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.250mm ×0.25μm）；載氣：高純氦氣（純度不小于99.999%），恒流模式，流速 1ml/min；進(jìn)樣口溫度230℃；進(jìn)樣量1μl；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。柱溫升溫程序：柱初始溫度120℃，保持1min，以30℃/min升至 210℃，以5℃/min升至240℃，保持2min。后運行280℃，1 min。質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（EI）；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；傳輸線溫度280℃；采集模式：全掃描和選擇離子檢測；溶劑延遲4min；全掃描范圍m/z 50～500；選擇定量離子m/z 160，選擇定性離子m/z 160、234、249；進(jìn)樣量：1μl。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置和標(biāo)準(zhǔn)曲線的配置

準(zhǔn)確稱取精甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解配置成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別用空白黃瓜提取液和空白土壤提取液準(zhǔn)確配成0.05，0.10，0.50，1，2mg/L系列的黃瓜和土壤基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜/質(zhì)譜條件下進(jìn)樣測定，以精甲霜靈基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度（x）與監(jiān)測離子峰面積（y）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 添加回收率試驗

取未施用過精甲霜靈的黃瓜和土壤進(jìn)行添加回收率試驗，添加水平為0.05、0.50、1.00mg/kg，每檔重復(fù)5次。

表1 精甲霜靈的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 精甲霜靈在黃瓜及土壤中的添加色譜圖

表2 精甲霜靈在黃瓜及土壤中的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)據(jù)（n=5）

表3 黃瓜中精甲霜靈的消解動態(tài)

表4 土壤中精甲霜靈的消解動態(tài)

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性范圍、回收率、精密度及檢出限

結(jié)果表明：在0.05～2mg/L范圍內(nèi)，精甲霜靈基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和測得的相應(yīng)峰面積呈良好的線性關(guān)系（見表1），其黃瓜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=67061x-439.7，相關(guān)系數(shù)為：R2=0.999；土壤基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=51059x+1379，相關(guān)系數(shù)為：R2=0.996。在0.05-1.00mg/kg添加水平下，精甲霜靈在黃瓜和土壤中的平均添加回收率分別為94.58%-105.52%和82.55%-100.97%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在5.1-8.6和4.2-6.4（見表2和圖1）。精甲霜靈在上述儀器條件下的保留時間為6.81min，在黃瓜和土壤中的最小檢出量均為0.05μg，最低檢測濃度均為0.05mg/kg，靈敏度和準(zhǔn)確度符合農(nóng)藥殘留準(zhǔn)則的要求。

2.2 精甲霜靈在黃瓜上的消解動態(tài)

2014-2015年，在廣東省廣州市、山東省濟南市、湖南省張家界市兩年三地的消解試驗結(jié)果（見表3）顯示：2014年，施藥2h后，精甲霜靈在三地黃瓜上的原始沉積量分別為＜LOQ、0.15、0.13mg/kg；消解動態(tài)方程及半衰期分別為：y= 0.159e-0.144x（濟南，2014），在濟南的半衰期為4.8天，2014年在廣州和張家界無法擬合消解方程。2015年，施藥2h后，精甲霜靈在三地的原始沉積量分別為0.10、0.082、0.098mg/kg；消解方程及半衰期分別為：y=0.046e-0.083x，半衰期為8.3天（廣州，2015年），y=0.0871e-0.086x，半衰期為8.0天（濟南，2015年），y=0.0646e-0.066x，半衰期為10.5天（張家界，2015年）。

2.3 精甲霜靈在土壤上的消解動態(tài)

2014－2015年，在廣東省廣州市、山東省濟南市、湖南省張家界市兩年三地土壤上的消解試驗結(jié)果（見表4）顯示：2014年，施藥2h后，精甲霜靈在三地土壤上的原始沉積量分別為＜LOQ、0.37、0.51mg/kg；消解動態(tài)方程及半衰期分別為：y = 0.337e-0.036x（濟南，2014），半衰期為19.2天、y = 0.396e-0.097x，半衰期為7.1天，2014年在廣州擬合消解方程。2015年，施藥2h后，精甲霜靈在三地的原始沉積量分別為0.519、0.178、0.062mg/kg；消解方程及半衰期分別為：y = 0.3004e-0.092x，半衰期為7.5天（廣州，2015年）、y = 0.1877e-0.047x，半衰期為14.7天（濟南，2015年）、y= 0.0646e-0.066x，半衰期為14.7天（張家界，2015年）。

2.4 精甲霜靈在黃瓜和土壤中的最終殘留量

2014－2015年，在廣東省廣州市、山東省濟南市、湖南省張家界市兩年三地的黃瓜和土壤上的的最終殘留檢測結(jié)果（見表4）表明：15%精甲霜靈氟嗎啉可濕性粉劑以低劑量（150ga.i/hm2）和高劑量（225ga.i/hm2）施藥2次和3次，精甲霜靈的殘留量與施藥濃度、施藥次數(shù)基本上呈正相關(guān)，施藥濃度越高、次數(shù)越多，殘留量越高；精甲霜靈的殘留量與采收間隔期呈負(fù)相關(guān)，采收時間距最后一次施藥時間越長，殘留量越低（見表5）。

3 結(jié)論

本研究采用精甲霜靈在黃瓜和土壤中殘留量的前處理和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上的檢測方法，并進(jìn)行了15%精甲霜靈氟嗎啉可濕性粉劑在黃瓜和土壤中的消解動態(tài)和最終殘留試驗。消解動態(tài)結(jié)果表明：精甲霜靈在黃瓜和土壤中的半衰期分別為4.8-10.5d和7.5-19.2d。最終殘留量檢測結(jié)果顯示：15%精甲霜靈氟嗎啉可濕性粉劑用于防治黃瓜霜霉病，施藥劑量不超過225ga.i/hm2，最多施藥3次，安全間隔期為5天，收獲的黃瓜中精甲霜靈的最大殘留量為0.17mg/kg，符合我國制定精甲霜靈在黃瓜上的最大殘留限量值為0.5mg/kg（GB 2763-2016）。合理使用建議：15%精甲霜靈氟嗎啉可濕性粉劑防治黃瓜霜霉病，按照推薦劑量150-225 ga.i/hm2，施藥2次，施藥間隔7d，最后一次施藥距采收間隔期為5d。