一起犬細(xì)小病毒病的診斷

鐘遠(yuǎn)宣，尹麗萍

（1.廣西平樂縣大發(fā)瑤族鄉(xiāng)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西 平樂 542403；2.廣西平樂縣動物疫病預(yù)防控制中心 廣西 平樂）

犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus，CPV)引起的一種急性傳染病，是危害犬類的最主要的烈性傳染病之一。健康犬經(jīng)消化道感染病毒后，病毒主要攻擊兩種細(xì)胞，一種是腸上皮細(xì)胞，一種是心肌細(xì)胞，臨床上分別表現(xiàn)胃腸道癥狀和心肌炎癥狀，心肌炎以幼犬多見，這兩種類型均對養(yǎng)犬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前有部分養(yǎng)犬場對該病重視不夠，對犬細(xì)小病毒的免疫預(yù)防工作處于真空狀態(tài)，容易引起犬場暴發(fā)細(xì)小病毒病，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

2019年5 月，桂林市所轄某養(yǎng)殖戶所養(yǎng)147頭7月齡犬有部分表現(xiàn)食欲異常，據(jù)畜主介紹發(fā)病初期精神沉郁，厭食，偶見發(fā)熱，排軟便或輕微嘔吐，3d后發(fā)展成為頻繁嘔吐和劇烈腹瀉。起初糞便呈灰色，黃色或乳白色，帶果凍狀粘液，其后排出惡臭的醬油樣或番茄汁樣血便。第5天病犬表現(xiàn)出脫水，消瘦，眼窩深陷，被毛凌亂，皮膚無彈性，耳鼻，四肢發(fā)涼，精神高度沉郁，休克，死亡。發(fā)病第6天，死亡病犬34只。

1 臨床癥狀

部分病犬病初食欲減退，體溫高達(dá)40.5℃，食欲不振的次天有些病犬出現(xiàn)嘔吐，嘔吐物呈黃色液體并有少量白色泡沫，個別出現(xiàn)排惡臭紅色混有黏液的稀薄糞便，糞便帶有腥臭味，第3天病犬站立不穩(wěn)，四肢無力，皮膚干燥，缺乏彈性，消瘦較快。

2 病理變化

對急性死亡的11只病犬進(jìn)行解剖發(fā)現(xiàn)有部分犬只心臟呈現(xiàn)灰黃色并有明顯腫大，表面有出血斑，觸摸心臟質(zhì)地柔軟；肝臟呈現(xiàn)黃褐色并有局部性壞死，包膜緊張；胃黏膜壞死并有少量黏液，小腸壁較正常的厚，腸腔內(nèi)有紫紅色粥樣內(nèi)容物并有血液塊。

3 實(shí)驗室診斷

3.1 血凝試驗(HA) （1）采集26只病死犬的肝臟、脾臟收集于26個無菌培養(yǎng)皿保存內(nèi)待用，在經(jīng)過消毒處理過的勻漿機(jī)放入與肝臟、脾臟相同體積的生理鹽水進(jìn)行勻漿，將經(jīng)過處理的勻漿回收到離心管中，置于離心機(jī)中3000g離心15min，收集上清液待檢。（2）在96孔“V”型微量反應(yīng)板從左至右每孔加100μl生理鹽水。（3）用移液槍取50μl處理過的待檢上清液加入96孔“V”型微量反應(yīng)板左側(cè)的第一孔，混合均勻后，吸50μl至第二孔，繼續(xù)混勻后，吸50μl至第3孔，依次倍比稀釋，至第11孔，吸棄50μl，12孔作為對照。（4）在96孔“V”型微量反應(yīng)板從左至右依次在每個孔內(nèi)加入50μl，1%豬紅細(xì)胞懸液置于微量混合器上振蕩，以便豬紅血球與病毒充分混合均勻，然后將“V”型微量反應(yīng)板置于37℃恒溫箱中保溫30min，取出觀察結(jié)果。（5）根據(jù)觀察發(fā)現(xiàn)“V”型微量反應(yīng)板100%紅血球凝集出現(xiàn)在第9孔即血凝試驗HA血凝價為1:512。

3.2 血凝抑制試驗(HI) （1）依據(jù)血凝試驗結(jié)果，配成4個血凝單位病毒即1:128。（2）在96孔“V”型微量反應(yīng)板第1-10孔各加入50μl生理鹽水，第11、12孔分別加入50μl，4單位CPV細(xì)胞病毒培養(yǎng)液和抗犬細(xì)小病毒陽性血清對照。（3）在第1孔加入50μl犬細(xì)小病毒陽性血清，混合均勻，吸50μl至第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，吸棄50μl。（4）在第1孔至11孔各加50μl，4單位待測病毒液，第12孔加50μl血清，混合均勻，置于37℃溫箱反應(yīng)30min。（5）結(jié)果判定：26份檢測樣品的HI抗體滴度＞1:1024

4 結(jié)果分析

（1）結(jié)合臨床癥狀、解剖病理變化及實(shí)驗室血凝抑制試驗結(jié)果，該養(yǎng)犬場的發(fā)病犬只感染犬細(xì)小病毒，診斷為犬細(xì)小病毒病。（2）通過對養(yǎng)殖場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，該起犬細(xì)小病毒病發(fā)生的主要原因是由于養(yǎng)殖場主沒有對所飼養(yǎng)的犬只進(jìn)行過犬細(xì)小病毒疫苗免疫。（3）犬細(xì)小病毒病是由細(xì)小病毒引起的急性傳染性疫病，預(yù)防該病的主要手段是要預(yù)防為主，對出生50日齡的健康犬只用犬五聯(lián)苗進(jìn)行免疫接種，初次免疫后的第14天應(yīng)再次加強(qiáng)免疫注射一次犬五聯(lián)疫苗，以便使犬只產(chǎn)生可靠的免疫效果。（4）對發(fā)病犬只及時隔離治療，用犬細(xì)小病毒高免血清進(jìn)行靜脈注射，對欄舍及活動場用燒堿進(jìn)行全面消毒，殺滅病犬排出的病毒。