中藥材木蓮皮(柴厚樸)的薄層色譜鑒別方法考察

熊 敏，楊 鑫，吳蘭云

(貴州省黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，貴州 黔東南州 556000)

本品為木蘭科植物桂南木蓮ManglietiachingiiDandy的干燥樹皮。木蘭科(Magnoliaceae)植物是被子植物中最原始的類群之一，全球共有 18屬335種大部分為喬木或灌木凹。其中我國自然分布的有14屬約165種，廣泛分布于18°30′～41°20′N，95°40′～126°30′E之間的22個(gè)省(區(qū))，種類之多分布之廣均居世界各國之首。全世界約40種分布于亞洲東南部的熱帶和亞熱帶地區(qū)，為亞洲的特有屬。我國約產(chǎn)28種，占全屬總種數(shù)的70% ，自然分布于長江流域以南的南部和西南部地區(qū)海拔為800 ～2000 m的山谷和山坡中下部空氣濕度較大土壤濕潤、深厚、肥沃、pH值為5.5～ 7.0的紅黃壤雜木林中。

木蓮屬(ManglietiaBlume)發(fā)表于1823年，是木蘭科中最為原始的類群[1]，分布于亞洲熱帶和亞熱帶，以亞熱帶為主。該屬除落葉木蓮(ManglietiadeciduaQYZheng)[2]為落葉喬木外，其余皆為常綠喬木。在木蓮屬植物中，各種類之間很多性狀非常接近，有些種類不憑借花和果的性狀很難區(qū)分。而在木蘭科分類中，木蓮屬與木蘭屬的系統(tǒng)學(xué)關(guān)系一直是爭論的焦點(diǎn)，Canright[3]、Keng[4]、Nooteboom[5]等認(rèn)為應(yīng)該將木蓮屬并入木蘭屬，但也有不少證據(jù)支持木蓮屬單獨(dú)成屬。

中藥大辭典轉(zhuǎn)載《江蘇天目山植物志》，本品木蓮果實(shí)(或根皮、樹皮)具有通便、止咳的功用，主治實(shí)火便秘和老年干咳[6]。木蓮皮，又名柴厚樸，為木蘭科木蓮屬植物桂南木蓮ManglietiachingiiDandy的干燥樹皮。廣西民間有代厚樸供藥用的歷史，稱之為“山厚樸”、“土厚樸”[7]。《中華本草2》中記載的柴厚樸為木蘭科植物四川木蓮的樹皮[8]。夏初剝?nèi)淦?、發(fā)汗至內(nèi)表面呈棕褐色或黃褐色時(shí)，取出(根皮或枝皮直接干燥)，蒸透、干燥。具有止咳，通便的功效。用于實(shí)火便秘，老年干咳[9]。原標(biāo)準(zhǔn)無薄層鑒別項(xiàng)，根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研木蓮皮所含成分為厚樸酚，故以厚樸酚作為對(duì)照品按《中國藥典2015年版》(一部)厚樸項(xiàng)下的薄層鑒別對(duì)其進(jìn)行薄層鑒別。按照國家藥典委員會(huì)《中藥分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則實(shí)施細(xì)則》的相關(guān)要求進(jìn)行以下方法學(xué)耐用性考察。

1 儀器和材料

儀器：1)卡瑪LINOMATAT5半自動(dòng)點(diǎn)樣器：2)KQ - 500DA型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

薄層板：1)青島海洋化工廠分廠硅膠H板(批號(hào)20160208)；2)青島海洋化工廠分廠硅膠G板(批號(hào)20160208)；3)天津思利達(dá)科技有限公司硅膠GF254板(批號(hào)：130515)；4)天津思利達(dá)硅膠GF254板(批號(hào)20160208)；5)青島勝海精細(xì)化工有限公司硅膠GF254(批號(hào)：20181112)。

試劑：甲苯、甲醇均為分析純。

藥材：所有實(shí)驗(yàn)樣品均由本中心課題組采樣組的人采集。樣本來自于貴州不同地區(qū)野外采集的3個(gè)藥材樣品，見表1。

表1 供試品來源表Tab.1 Sources of test samples

2 方法

2.1 供試品溶液的制備

取木蓮皮粉末1 g，加石油醚(60～90℃)20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1 mL使溶解，作為供試品。

2.2 對(duì)照品的制備

原標(biāo)準(zhǔn)無薄層鑒別項(xiàng)，根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研木蓮皮所含成分為厚樸分，故以厚樸酚作為對(duì)照品，取厚樸酚對(duì)照品適量，加乙醇配制成1 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3 木蓮皮不同薄層板的考察

薄層色譜鑒別按照《中國藥典2015年版》(一部)厚樸項(xiàng)下的薄層鑒別對(duì)其進(jìn)行薄層鑒別，分別吸取榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮、厚樸酚對(duì)照、榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮溶液各5 μL，分別點(diǎn)于3個(gè)不同廠家薄層板上，溫度：10℃，濕度：82%，以甲苯∶甲醇(17∶1)為展開劑，展開、取出、晾干，置紫外光(254 nm)下檢視，見圖1青島海洋化工廠分廠硅膠H板(批號(hào)20160208)；見圖2青島海洋化工廠分廠硅膠G板(批號(hào)20160208)；見圖3天津思利達(dá)科技有限公司硅膠GF254板(批號(hào)：130515)。進(jìn)行了硅膠G板、硅膠GF254板、硅膠H板的考察，結(jié)果硅膠GF254較好。

圖1 青島海洋H板Fig.1 Qingdao Ocean H Plate

圖2 青島海洋G板 圖3 天津思利達(dá)GF254Fig.2 Qingdao Ocean G Plate Fig.3 Tianjin Silida GF254

2.4 展開系統(tǒng)的優(yōu)選

根據(jù)木蓮皮的化學(xué)成分研究，且為了獲得最佳的展開效果，試驗(yàn)了多種展開系統(tǒng)： A石油醚(60～90℃)∶丙酮∶乙酸乙酯(12∶1∶3)、B石油醚(60～90℃)∶環(huán)己烷∶丙酮∶乙酸乙酯(6∶6∶1∶3)、C石油醚(60～90℃)∶環(huán)己烷∶丙酮∶乙酸乙酯(4∶8∶1∶3)、D石油醚(60～90℃)∶環(huán)己烷∶丙酮∶乙酸丁酯(3∶9∶1∶2)、E甲苯∶甲醇(17∶1)。按照2015版<《中國藥典》四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮、厚樸酚對(duì)照、榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮溶液各5 μL，點(diǎn)于天津思利達(dá)科技有限公司硅膠GF254板(批號(hào)：130515)上，在溫度：10℃，濕度：82%，分別以A、B、C、D、E展開系統(tǒng)為展開劑，展開、取出、晾干。置紫外光(254nm)下檢視。結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果，最終確定展開系統(tǒng)為E：甲苯∶甲醇(17∶1)為展開劑 ， 在此條件下色譜圖斑點(diǎn)清晰、分離度較好、Rf重復(fù)性好。詳見圖4-圖8。

2.5 不同提取溶劑考察

按照2015版《中國藥典》四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，稱取3份木蓮皮粉末各1 g，分別甲醇超聲30 min、乙醇超聲30 min、石油醚(60～90℃)超聲30 min，在溫度7℃，濕度90%，以甲苯∶甲醇(17∶1)為展開劑，分別點(diǎn)于硅膠GF254板(天津思利達(dá)科技有限公司硅膠GF254板(批號(hào)：130515))上，展開、取出、晾干，在紫外燈254nm條件下觀察，結(jié)果見圖9(1.甲醇超聲30 min；2.厚樸酚對(duì)照品；3.乙醇超聲30 min；4.石油醚(60～90℃)超聲30 min)，結(jié)果甲醇、乙醇提取的供試品，展開后除三個(gè)主斑點(diǎn)外，原點(diǎn)殘留雜質(zhì)較多，主斑點(diǎn)與原點(diǎn)之間有未分離的雜質(zhì)帶，而石油醚(60～90℃)提取的供試品只有三個(gè)主斑點(diǎn)，原點(diǎn)和其他位置未見明顯的雜質(zhì)，建議以石油醚(60～90℃)超聲提取列為正文。

圖4 展開劑A 圖5 展開劑BFig.4 Developer A Fig.5 Developer B

圖6 展開劑C 圖7 展開劑DFig.6 Developer C Fig.7 Developer D

圖8 展開劑E圖9 不同提取溶劑考察 Fig.8 Developer E Fig.9 Investigation ofdifferent extraction solvents

2.6 不同溫濕度的考察

按照2015版<《中國藥典》四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，稱取榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮粉末1 g，以甲苯∶甲醇(17∶1)提取，分別吸取榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮、厚樸酚對(duì)照、榕江縣平陽鎮(zhèn)木蓮皮溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板(天津思利達(dá)科技有限公司硅膠GF254板(批號(hào)130515))上，在紫外燈254 nm條件下觀察，結(jié)果a：低溫5℃與較低濕32%條件下，供試品分離度較好，見圖10；b：中溫20℃與較高濕58%條件下，供試品分離度較好，見圖11；c：高溫40℃與低濕32%條件下，供試品分離度較好，見圖12；d：高溫40℃與高濕88%條件下，供試品分離度較好，見圖13。

圖10 a溫濕度 圖11 b溫濕度Fig.10 Temperature and Fig.11 Temperature and humidity a humidity b

圖12 c溫濕度 圖13 d溫濕度Fig.12 Temperature and Fig.13 Temperature and humidity c humidity d

2.7 不同生產(chǎn)廠家薄層硅膠GF254的考察

按照2015版<《中國藥典》四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別稱取雷山永樂、都勻三都和榕江平陽木蓮皮粉末各1 g，用甲苯：甲醇(17∶1)提取，在溫度9℃，濕度90%條件下，分別吸取雷山永樂、厚樸酚對(duì)照品、都勻三都和榕江平陽木蓮皮點(diǎn)于天津思利達(dá)硅膠GF254板(批號(hào)20160208)上，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，見圖14；點(diǎn)于青島勝海精細(xì)化工有限公司硅膠GF254板(批號(hào)：20181112)上，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，見圖15；點(diǎn)于青島海洋化工膠GF254板(批號(hào)20160208)上，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，見圖16。

圖14 天津思利達(dá) Fig.14 Tianjin Silida

圖15 青島勝海 圖16 青島海洋Fig.15 Qingdao Shenghai Fig.16 Qingdao Ocean

3 結(jié)果

1)進(jìn)行了3種薄層板的考察，結(jié)果硅膠GF254較好；

2)進(jìn)行了5種不同展開劑的考察，最終確定E：甲苯∶甲醇(17∶1)為展開劑 ， 在此條件下色譜圖斑點(diǎn)清晰、分離度較好、Rf重復(fù)性好；

3)對(duì)3種提取方法進(jìn)行考察，在得到的薄層色譜信息相同情況下，選擇簡單、方便及快速的超聲提取法；

4)分別以3種溶劑進(jìn)行考察，結(jié)果石油醚(60～90℃)提取的供試品只有三個(gè)主斑點(diǎn)，原點(diǎn)和其他位置未見明顯的雜質(zhì)，建議以石油醚(60～90℃)超聲提取列為正文；

5)分別以4種溫濕度進(jìn)行考察，結(jié)果供試品分離度都較好；

6)分別用天津思利達(dá)硅膠GF254板(批號(hào)20160208)、青島勝海精細(xì)化工有限公司硅膠GF254板(批號(hào)：20181112)、青島海洋化工膠GF254板(批號(hào)20160208)，結(jié)果斑點(diǎn)清晰度均較好。