結(jié)直腸癌中HSF1、c-Jun與DPD表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義

劉 柳，吳淑華，李揚(yáng)揚(yáng)，許曉陽，何 雙，溫菲菲，郭寧杰，賈真真

結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，目前以氟尿嘧啶為重要組份的聯(lián)合化療方案依然是臨床診療指南推薦的中晚期結(jié)直腸癌患者的一線治療方案[1]。有研究顯示，在結(jié)直腸癌的臨床治療中，5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)在抗腫瘤及明顯提高患者生存時(shí)間的同時(shí)也產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥與毒副作用，甚至導(dǎo)致化療過程的延遲與中斷[2-5]。隨著對(duì)腫瘤耐藥機(jī)制的深入分析，對(duì)5-FU起關(guān)鍵代謝作用的二氫嘧啶脫氫酶(dihydropyrimidine dehydrogenase, DPD)引起學(xué)者的關(guān)注[6-7]，調(diào)控DPD的表達(dá)可能成為逆轉(zhuǎn)5-FU耐藥的新思路。轉(zhuǎn)錄因子在蛋白質(zhì)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮重要作用。新近研究發(fā)現(xiàn)，熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(heat shock factor 1, HSF1)是一組結(jié)構(gòu)和功能具有廣泛同源性，并且普遍存在于真核生物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，HSF1不僅可啟動(dòng)熱休克蛋白家族基因的轉(zhuǎn)錄，同時(shí)也可啟動(dòng)非熱休克蛋白家族基因的轉(zhuǎn)錄。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化、Western blot和qRT-PCR法檢測(cè)結(jié)直腸癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun與DPD的表達(dá)，分析其相關(guān)性，探討四者與臨床病理特征的關(guān)系及臨床意義，為逆轉(zhuǎn)臨床5-FU耐藥提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1組織標(biāo)本 收集2013年1月～2014年12月濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科存檔的具有完整隨訪資料的結(jié)直腸癌標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)WHO(2019)消化系統(tǒng)腫瘤分類進(jìn)行，由兩位資深病理醫(yī)師采用雙盲法重新閱片診斷為原發(fā)性結(jié)直腸癌。所有病例均為首次手術(shù)治療，術(shù)前均未行任何放、化療，術(shù)后應(yīng)用FOLFOX方案化療。本實(shí)驗(yàn)收集結(jié)直腸癌138例，其中男性77例，女性61例；年齡32～89歲，平均67歲；腫瘤直徑<5 cm者58例，≥5 cm者80例；組織類型：管狀腺癌95例，管狀-黏液腺癌14例，黏液腺癌29例；分化程度：高分化19例，中分化83例，低分化36例；浸潤(rùn)深度：累及黏膜及黏膜下層11例，侵犯肌層48例，侵及或浸透外膜者79例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者67例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者71例。每年進(jìn)行電話或門診隨訪，隨訪截至2019年12月或患者死亡，失訪者不予入組。

1.1.2新鮮標(biāo)本 收集2018年1～12月濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科接收新鮮的結(jié)直腸癌標(biāo)本16例，取癌旁正常腸黏膜組織作對(duì)照，所有組織一部分即時(shí)液氮凍存，一部分置入10%中性福爾馬林中固定。

1.1.3試劑 兔抗人HSF1(ab61382)、c-Jun(ab31419)、p-c-Jun(ab30620，Ser63磷酸化位點(diǎn))及DPD(ab134922)抗體，均購自Abcam公司；羊抗兔/鼠Ⅱ抗(ab5878)購自福州邁新公司，免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋公司。Western blot實(shí)驗(yàn)所需試劑購自上海碧云天公司。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)中RNAiso、RT試劑盒及PCR試劑盒，均購自Takara公司；特異性引物序列由Takara公司合成。

1.2 方法

1.2.1免疫組化 采用免疫組化EnVision法染色：將切片脫蠟至水，高壓熱修復(fù)抗原，3%H2O2去除內(nèi)源性過氧化物酶，加一抗HSF1(1 ∶450)、c-Jun(1 ∶150)、p-c-Jun(1 ∶200)及DPD(1 ∶300)抗體4 ℃過夜，PBS水洗后加二抗37 ℃孵育30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，1%鹽酸乙醇分化，脫水透明，中性樹膠封固。用已知HSF1蛋白陽性的正常睪丸組織、c-Jun及p-c-Jun蛋白陽性的乳腺癌組織、DPD蛋白陽性的肝癌組織作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2Western blot法 冰上提取組織蛋白，經(jīng)BCA法蛋白定量后上樣，SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)膜并封閉，一抗HSF1(1 ∶5 000)、c-Jun(1 ∶1 000)、p-c-Jun(1 ∶1 000)及DPD(1 ∶2 000)4 ℃過夜，TBST洗去一抗后二抗(羊抗兔IgG，1 ∶1 000)孵育2 h，ECL曝光，用Quantity One軟件分析目的蛋白和GAPDH的吸光度值，以目的蛋白與GAPDH吸光度值的比值作為目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3qRT-PCR檢測(cè) 按照Trizol試劑盒說明書提取組織RNA并檢測(cè)其濃度，在37 ℃ 15 min、85 ℃ 5 s條件下將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR反應(yīng)采用SYBR Green相對(duì)定量PCR法，按照試劑盒說明書配置25 μL體系反應(yīng)液，在CFX96T RT-PCR Detection System C1000上進(jìn)行擴(kuò)增(表1)。反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s GOTO 39(合計(jì)40個(gè)循環(huán))，95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s。采用ΔΔCt法檢測(cè)，樣品相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt表示，ΔΔCt=結(jié)直腸癌ΔCt-正常結(jié)直腸黏膜組織ΔCt，ΔCt=目的基因Ct值-GAPDH Ct值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取其平均值。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 結(jié)果判讀

1.3.1HSF1、c-Jun、p-c-Jun判讀標(biāo)準(zhǔn) 三種蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，以呈棕黃色為陽性，在低倍鏡下觀察10個(gè)獨(dú)立視野，選取5個(gè)陽性細(xì)胞數(shù)最多的視野，根據(jù)陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行判斷。(1)按陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；(2)按陽性細(xì)胞百分率計(jì)分：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將兩項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相乘作為最終結(jié)果，≥4分為陽性，<4分為陰性。

1.3.2DPD判讀標(biāo)準(zhǔn) DPD主要表達(dá)于胞膜或胞質(zhì)，在低倍鏡下觀察10個(gè)獨(dú)立視野，選取5個(gè)陽性細(xì)胞數(shù)最多的視野，采用Image Pro 6.0軟件進(jìn)行半定量分析，檢測(cè)視野陽性區(qū)域的積分光密度(IOD)值，取其平均值。統(tǒng)計(jì)所有視野的IOD值，總平均值為127.52±4.11，低于總平均值的判讀為陰性，高于總平均值則為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間比較及蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性采用χ2檢驗(yàn)；蛋白表達(dá)的相關(guān)性用Spearman相關(guān)性分析；生存分析采用Kaplan-Meier法，并以Log-rank法檢驗(yàn)；采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素生存分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌與正常黏膜中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達(dá)免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示：HSF1、c-Jun、p-c-Jun主要表達(dá)于細(xì)胞核中，DPD主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，其在結(jié)直腸癌組織中的陽性率分別為62.3%、71.0%、52.9%、67.4%，均高于正常黏膜組織(P<0.05，表2，圖1)。Western blot結(jié)果顯示：HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)均高于正常結(jié)直腸黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2)。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：HSF1、c-Jun及DPD在結(jié)直腸癌組織中的相對(duì)表達(dá)量高于正常黏膜組織，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3)。

圖1 A.HSF1在正常結(jié)直腸黏膜組織中呈陰性，EnVision法；B.HSF1在結(jié)直腸癌中呈陽性，EnVision法；C.c-Jun在正常結(jié)直腸黏膜中呈陰性，EnVision法；D.c-Jun在結(jié)直腸癌中呈陽性，EnVision法；E.p-c-Jun在正常結(jié)直腸黏膜組織中呈陰性，EnVision法；F.p-c-Jun在結(jié)直腸癌中呈陽性，EnVision法；G.DPD在正常黏膜組織中呈陰性，EnVision法；H.DPD在結(jié)直腸癌組織中呈陽性，EnVision法

圖2 Western blot法檢測(cè)HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD在結(jié)直腸癌和正常黏膜組織中的表達(dá)：A.電泳圖；B.直方圖，N.正常結(jié)直腸黏膜組織，T.結(jié)直腸癌組織

圖3 qRT-PCR檢測(cè)HSF1、c-Jun及DPD mRNA在結(jié)直腸癌和正常黏膜組織中的表達(dá)

表2 結(jié)直腸癌和正常黏膜組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達(dá)[n(%)]

2.2 結(jié)直腸癌中DPD蛋白表達(dá)與c-Jun、p-c-Jun、HSF1表達(dá)的相關(guān)性根據(jù)DPD的免疫組化染色結(jié)果，將138例結(jié)直腸癌組織分為DPD陽性組和DPD陰性組，分析HSF1、c-Jun、p-c-Jun與DPD蛋白表達(dá)的相關(guān)性。組間比較顯示：DPD陽性組中HSF1、p-c-Jun的表達(dá)均高于陰性組，差異有顯著性(P<0.05)；而c-Jun的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示：結(jié)直腸癌中DPD與p-c-Jun、HSF1的表達(dá)均呈正相關(guān)(P<0.05)；DPD與c-Jun蛋白表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05，表3)；HSF1與p-c-Jun的表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05，表4)。

表3 結(jié)直腸癌中DPD與c-Jun、p-c-Jun及HSF1表達(dá)的相關(guān)性

表4 結(jié)直腸癌中HSF1與p-c-Jun表達(dá)的相關(guān)性

2.3 HSF1與p-c-Jun不同分組中DPD蛋白的表達(dá)根據(jù)HSF1與p-c-Jun的免疫組化表達(dá)將其分為4個(gè)亞組，分別為HSF1+/p-c-Jun+、HSF1+/p-c-Jun-、HSF1-/p-c-Jun+、HSF1-/p-c-Jun-。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化及Western blot法檢測(cè)不同分組中DPD蛋白表達(dá)，并進(jìn)行組間兩兩比較，分析組間DPD表達(dá)的差異性。本組結(jié)果顯示，HSF1+/p-c-Jun+組中DPD陽性率高于其他三組，而HSF1-/p-c-Jun-組中DPD的表達(dá)低于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，在HSF1+/p-c-Jun-組中DPD的表達(dá)則高于HSF1-/p-c-Jun+組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表5，圖4)。

表5 HSF1與p-c-Jun不同分組中DPD蛋白的表達(dá)[n(%)]

圖4 Western blot法檢測(cè)HSF1和p-c-Jun不同分組中DPD蛋白表達(dá)：A.電泳圖；B.直方圖

2.4 結(jié)直腸癌中c-Jun、p-c-Jun、HSF1及DPD的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性結(jié)直腸癌中HSF1蛋白表達(dá)與浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)；p-c-Jun蛋白表達(dá)與分化程度具有相關(guān)性(P<0.05，表6)。DPD蛋白表達(dá)與組織學(xué)類型及浸潤(rùn)深度密切相關(guān)，DPD在黏液腺癌及伴黏液腺癌成分的管狀腺癌中的表達(dá)高于管狀腺癌，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表6)。

表6 結(jié)直腸癌中c-Jun、p-c-Jun、HSF1及DPD的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

2.5 生存分析138例結(jié)直腸癌患者中位生存時(shí)間為65.2個(gè)月，平均5年生存率為63.4%。Kaplan-Meier分析顯示HSF1、DPD及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與結(jié)直腸癌患者預(yù)后密切相關(guān)(P<0.05)。HSF1、DPD陽性患者的5年生存率分別為23.3%和29.0%，低于HSF1、DPD陰性患者的5年生存率(78.8%、75.6%)；HSF1與p-c-Jun均陰性患者的預(yù)后較好，其5年生存率為85.2%，而HSF1、p-c-Jun均陽性患者的5年生存率為20.8%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖5)。Cox回歸模型分析顯示HSF1、DPD及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05，表7)。

圖5 結(jié)直腸癌患者預(yù)后生存曲線：A.HSF1預(yù)后生存曲線；B.DPD預(yù)后生存曲線；C.HSF1和p-c-Jun不同分組預(yù)后生存曲線；D.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)后生存曲線

表7 結(jié)直腸癌患者預(yù)后Cox多因素生存分析

3 討論

目前，結(jié)直腸癌的治療以手術(shù)切除為主，對(duì)于術(shù)后和失去手術(shù)機(jī)會(huì)的結(jié)直腸癌患者，化療依然是治療的重要手段。目前，5-FU依然是Ⅲ期結(jié)直腸癌和部分具有高危因素結(jié)直腸癌患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。由此可見，控制5-FU的代謝狀態(tài)及藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)于確保臨床療效具有重要意義。參與5-FU代謝的酶主要有DPD、TS、TP等[8-9]，其中DPD作為5-FU代謝的起始和限速酶在眾多5-FU代謝酶中倍受關(guān)注。DPD是由2個(gè)相同亞基與相對(duì)分子質(zhì)量為10.5×104的分子組成的高二聚體酶，主要分布在肝臟、外周血單核細(xì)胞，炎性組織及正常組織中也有適量分布。DPD作為5-FU代謝的關(guān)鍵酶，其表達(dá)上調(diào)可加速5-FU在肝臟中的分解代謝，減少腫瘤藥物濃度，從而降低抗癌效果[10-11]。文獻(xiàn)報(bào)道，口腔癌、尿路上皮癌等多種腫瘤中均存在DPD異常表達(dá)，其表達(dá)增高可降低腫瘤細(xì)胞對(duì)5-FU的反應(yīng)度，反之腫瘤組織對(duì)5-FU的敏感性提高[12-13]。有研究顯示，結(jié)直腸癌中DPD高表達(dá)可降低5-FU的化療敏感性，應(yīng)用DPD抑制劑可提高5-FU的治療效果[14-15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌中DPD mRNA及蛋白表達(dá)水平均高于正常結(jié)直腸常黏膜組，與其他學(xué)者的研究結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)顯示，DPD與患者的生存密切相關(guān)，并且在黏液腺癌中高表達(dá)。作者認(rèn)為，結(jié)直腸癌中存在DPD的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平異常，導(dǎo)致其蛋白升高，影響腫瘤對(duì)5-FU的敏感性，產(chǎn)生化療抵抗，在一定程度上影響臨床療效及患者預(yù)后。由此可見，深入分析結(jié)直腸癌中DPD的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)變化規(guī)律及其調(diào)控機(jī)制，對(duì)臨床個(gè)性化治療具有重要意義，可成為逆轉(zhuǎn)耐藥的新思路。

DPD是由定位于染色體1p21-1p22區(qū)域的二氫嘧啶脫氫酶基因(dihydropyrimidine dehydrogenase gene, DPYD)編碼，包括23個(gè)外顯子，轉(zhuǎn)錄為含1 025個(gè)氨基酸的蛋白。研究表明，c-Jun、c-Fos、PU.1等多種轉(zhuǎn)錄因子均可參與DPYD啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄為DPD的過程[16]。Ukon等[17]在HSC42和293T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，由轉(zhuǎn)錄因子c-Jun參與組成的激活蛋白-1(activator protein-1, AP-1)在啟動(dòng)DPYD轉(zhuǎn)錄翻譯中發(fā)揮重要作用，激活A(yù)P-1可啟動(dòng)DPYD的轉(zhuǎn)錄。其主要通過高度保守的堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)形成同源或異源二聚體，與DNA結(jié)合參與多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)化、侵襲和耐藥等過程。然而，在結(jié)直腸癌中關(guān)于轉(zhuǎn)錄因子與DPD的關(guān)系以及與臨床藥物療效及預(yù)后的相關(guān)性尚缺乏深入分析。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌DPD陽性組中p-c-Jun表達(dá)高于DPD陰性組，而c-Jun表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；提示p-c-Jun有可能參與結(jié)直腸癌中DPYD的啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，增加DPD的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DPD與p-c-Jun的表達(dá)并不完全同步，在一部分DPD陽性病例中p-c-Jun呈陰性，這與以往其他報(bào)道不同。我們推測(cè)c-Jun對(duì)DPD的啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄并非全部，可能有更多的轉(zhuǎn)錄因子參與其中。因此，進(jìn)一步揭示DPD的轉(zhuǎn)錄機(jī)制，對(duì)于提高結(jié)直腸癌患者的療效具有重要臨床意義。新近研究發(fā)現(xiàn)，由c-Jun參與組成的AP-1蛋白不僅可通過bZIP蛋白形成同源或異源二聚體，還可與非bZIP蛋白以特定序列與其特定基因的啟動(dòng)子結(jié)合，如核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB[18]、CREB結(jié)合蛋白[19]和HSF1[20]等，從而擴(kuò)大AP-1家族蛋白的組合多樣性和調(diào)控的基因范圍，進(jìn)而發(fā)揮激活或抑制作用。

HSF是一類能與HSE結(jié)合并調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白表達(dá)的反式細(xì)胞因子，可在外界刺激或病理狀態(tài)下被激活，繼而誘導(dǎo)熱休克蛋白的表達(dá)。本課題組前期研究表明[20]，HSF1在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，HSF1不僅可啟動(dòng)熱休克蛋白基因家族的轉(zhuǎn)錄，同時(shí)也可啟動(dòng)非熱休克蛋白的轉(zhuǎn)錄，如多藥耐藥基因MDR1的轉(zhuǎn)錄。Sawai等[21]研究發(fā)現(xiàn)，c-Jun、c-Fos啟動(dòng)子中均存在熱休克反應(yīng)元件HSE。在HaLe細(xì)胞中，經(jīng)熱刺激激活的HSF1可與c-Jun中的HSE結(jié)合，啟動(dòng)c-Jun轉(zhuǎn)錄翻譯。Ciato等[22]在Cushing病的研究中發(fā)現(xiàn)，HSF1在抑制劑KRIBB11參與下通過與c-Jun、c-Fos啟動(dòng)子中的熱休克反應(yīng)元件HSE結(jié)合，抑制POMC啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，從而減少促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH分泌。然而，在結(jié)直腸癌中有關(guān)HSF1與c-Jun的關(guān)系鮮見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)結(jié)直腸癌中HSF1、p-c-Jun同時(shí)陽性時(shí)，DPD陽性率顯著高于其他組；當(dāng)HSF1、p-c-Jun同時(shí)陰性時(shí)，DPD陽性率顯著低于其他組，且HSF1陽性組DPD的表達(dá)高于p-c-Jun陽性組；提示HSF1、p-c-Jun均與DPD的表達(dá)有關(guān)，且HSF1有可能直接調(diào)控DPD的表達(dá)。我們推測(cè)作為重要的轉(zhuǎn)錄因子HSF1可以與任何存在熱休克反應(yīng)元件的基因結(jié)合，啟動(dòng)其轉(zhuǎn)錄過程。由于c-Jun啟動(dòng)子中存在熱休克反應(yīng)元件，兩者可能以AP-1家族蛋白組合的形式啟動(dòng)DPD轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)其高表達(dá)。HSF1對(duì)DPD的影響是否通過DPYD上的熱休克反應(yīng)元件來完成，還需進(jìn)一步分析。

影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的因素眾多[23-24]，本實(shí)驗(yàn)對(duì)HSF1、p-c-Jun、DPD的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：HSF1蛋白表達(dá)水平與浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；p-c-Jun蛋白表達(dá)水平與分化程度有相關(guān)性；DPD蛋白表達(dá)水平與組織學(xué)類型及浸潤(rùn)深度密切相關(guān)。Kaplan-Meier分析表明，HSF1、DPD及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與結(jié)直腸癌患者預(yù)后密切相關(guān)。Cox多因素生存分析顯示，HSF1、DPD及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。我們推測(cè)作為生物學(xué)功能廣泛的轉(zhuǎn)錄因子，HSF1與c-Jun可以同源或異源聚體的形式，啟動(dòng)多種基因的轉(zhuǎn)錄過程，不僅參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展，并且在5-FU起始和限速酶DPD的啟動(dòng)與轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮重要作用，從而影響了結(jié)直腸癌的生物學(xué)行為以及5-FU的療效。

綜上所述，HSF1、c-Jun、p-c-Jun、DPD在結(jié)直腸癌中高表達(dá)，HSF1可能通過與磷酸化修飾的轉(zhuǎn)錄因子p-c-Jun結(jié)合，形成新的異源二聚體進(jìn)而啟動(dòng)DPYD轉(zhuǎn)錄和翻譯，也可能自身以同源聚體形式啟動(dòng)DPD的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致結(jié)直腸癌中DPD升高，引起5-FU的耐藥。HSF1、p-c-Jun、DPD表達(dá)分別與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等多種臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，對(duì)結(jié)直腸癌化療方案的選擇以及判斷腫瘤預(yù)后的個(gè)體差異均具有重要意義。然而，本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)HSF1、c-Jun、p-c-Jun和DPD蛋白表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義進(jìn)行初步探討，還需增加樣本量進(jìn)一步分析，并深入開展分子機(jī)制的分析，為臨床個(gè)性化用藥的選擇及逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌耐藥提供可靠依據(jù)。