喉癌及癌前病變中hPOT1的表達及其與HP感染的相關(guān)研究

楊艷青 張麗萍 張立榮 朱 文

（黑龍江省哈爾濱市第四醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150026）

喉癌的發(fā)生是一個多因素綜合作用的結(jié)果，如常見喉癌發(fā)生的危險因素有吸煙、飲酒、食管反流、生物學因素等。近幾年有報道：HP感染增加喉癌的發(fā)病風險，二者的關(guān)系較為密切[1]。最初發(fā)現(xiàn)hPOT1基因組織是一種癌癥基因是美國的兩名學者，這種癌基因在出現(xiàn)之后會存留于真核細胞內(nèi)，因此有被稱為“看家基因”，能夠非常優(yōu)秀的支持端粒功能同時使患者體內(nèi)的染色體更佳穩(wěn)定，促進細胞加速生長與衍生，以上作用皆反映了此因子的重要性[2-6]。至目前為止，對于喉部癌癥和癌前病變的臨床研究中，HP感染和人端粒保護蛋白表達情況調(diào)查相對較少見。本研究通過免疫組化檢測喉癌及癌前病變組織中hPOT1的表達及HP的感染情況，探討喉癌及癌前病變中hPOT1的表達及與HP感染的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有標本均來自本院病理科存檔蠟塊（2015—2018年）。HE切片經(jīng)鏡下病理檢查證實為喉乳頭狀瘤、喉角化癥、喉鱗狀上皮不典型增生、喉鱗狀細胞癌，其中喉乳頭狀瘤、喉角化癥、不典型增生均視為喉癌前病變；喉鱗狀細胞癌視為喉癌。共100個樣本（手術(shù)前均未進行治療），其中喉癌前病變、喉癌各50例。喉不典型增生HE切片見圖1，喉鱗狀細胞癌HE切片見圖2。

1.2 試劑 檢測鼠抗hPOT1單抗所使用的儀器為美國進口產(chǎn)品，需使用的各種試劑盒與抗體提供商為江蘇衡州生物技術(shù)有限公司提供，包含免抗HP、試劑盒——免疫化學組織SP與DAB。

1.3 方法 蠟塊切3～4 μm厚白片，免疫組化采用SP法，按說明書步驟操作。

圖1 喉不典型增生（HE×20）

圖2 喉鱗狀細胞癌（HE×20）

1.4 結(jié)果判定 細胞核與胞質(zhì)是為顯示人端粒保護蛋白顯色的主要定位所在，顆粒狀，除特殊情況外多半顯示為棕黃色。數(shù)據(jù)計算標準：在顯示器上隨機定位五點，記錄下對應視野對其進行評分，標準為染色程度和陽性細胞比率顯示。其中，染色陽性細胞評分中0分：≤5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：≥51%。染色程度分級標準如下。0分：99%以上不著色；1分：顏色輕且淺黃色；2分：表現(xiàn)正黃色；3分：棕褐色。將兩組患者的基線評分險相乘，若結(jié)果高于4分，表示患者為癌癥陽性，若再0≤X≤3分，表示為陰性。

HP判定標準：幽門螺桿菌菌體呈棕黃色表達。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 hPOT1表達及HP感染情況 喉癌前病變、喉癌患者hPOT1表達陽性率分別為38%、86%，經(jīng)χ2檢驗有統(tǒng)計學意義，χ2=24.448，P=0.000。喉癌患者的hPOT1表達陽性率明顯高于喉癌前病變患者。見表1。hPOT1表達及HP感染情況見圖3、圖4。

圖3 喉不典型增生HP感染（×20）

圖4 喉乳頭狀瘤HP感染（×20）

喉癌前病變、喉癌患者HP感染陽性率分別為66%、24%，經(jīng)χ2檢驗有統(tǒng)計學意義，χ2=17.818，P=0.000。喉癌前病變患者的HP感染陽性率明顯高于喉癌患者。見表1。

2.2 HP陽性組和HP陰性組患者中hPOT1蛋白表達的變化 喉癌前病變HP陰性組、陽性組患者hPOT1蛋白表達的陽性率分別為11.76%、51.51%，HP陽性組高于HP陰性組，經(jīng)χ2檢驗有統(tǒng)計學意義，χ2=7.525，P=0.006。見表2。HP陽性組和HP陰性組患者中hPOT1蛋白表達的變化見圖5、圖6。

圖5 喉不典型增生hpot1陽性表達胞質(zhì)（×20）

圖6 喉鱗狀細胞癌hpot1陽性表達胞質(zhì)（×20）

喉癌HP陰性組、陽性組患者hPOT1蛋白表達的陽性率分別為84.21%、91.66%，HP陽性組高于HP陰性組，經(jīng)χ2檢驗沒有統(tǒng)計學意義，χ2=0.421，P＞0.05（P=0.516）。見表2。

表1 喉癌前病變、喉癌患者hPOT1蛋白表達及HP感染情況

表2 HP陽性組和HP陰性組患者中hPOT1蛋白表達的變化

3 討論

喉癌是頭頸部科室中發(fā)病率最高的惡性腫瘤疾病之一，在全身所有惡性腫瘤中占比為5.7%～7.6%，鱗狀細胞癌則是其病理類型。對于喉癌臨床中的致病因素目前仍未完全明確，其中長期吸煙與酗酒、人類乳頭狀瘤病毒、性激素以及放射性損傷等可能與喉癌的發(fā)病相關(guān)，近來有研究表明：HP感染可能是喉癌發(fā)生發(fā)展的危險因素之一[7-10]。喉癌的發(fā)生發(fā)展是一個長時間、多階段的過程。hPOT1屬于端粒單鏈結(jié)合蛋白，它也許在調(diào)控端粒的長度、保護末端和分裂細胞過程中能起作用，DNA的損傷結(jié)果致使端粒功能重度失活，阻礙了轉(zhuǎn)細胞的正常生長機制，這也是導致腫瘤疾病得以不斷增殖的原因之一[11-13]。但是，有關(guān)喉癌的發(fā)生機制與發(fā)展研究有關(guān)報道仍舊較少。

本研究選擇免疫組化法進行檢測，結(jié)果顯示：喉癌前病變、喉癌患者HP感染陽性率分別為66%、24%，經(jīng)χ2檢驗，二者感染情況有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果提示：喉癌前病變患者中HP感染陽性率高于喉癌，HP感染可能在喉癌的早期事件中發(fā)揮一定的作用，但在喉癌組織中HP感染陽性率反而低于癌前病變，原因可能是由于喉癌組織中的環(huán)境改變了，而這種改變后的環(huán)境不適合HP的存活，最終導致在喉癌組織中HP的表達降低，具體機制還有待于今后更深入的研究。本研究結(jié)果進一步提示：HP感染可能是喉癌的致病因素之一，可能參與喉癌的發(fā)生。本研究結(jié)果與Titiz等[14]文獻報道相符合。盡量根除HP感染可能會降低癌前病變的發(fā)生[14-18]，進而降低喉癌的出現(xiàn)。所以，為控制喉癌發(fā)生可通過盡早清除HP感染完成，對限制疾病發(fā)生具有重要意義。