醫(yī)學(xué)院校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心生物安全的綜合管理

朱裕華 張 琦 胡安康

（徐州醫(yī)科大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，江蘇徐州 221004）

隨著生命科學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展和不斷進(jìn)步，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)已經(jīng)成為一門獨(dú)立的應(yīng)用學(xué)科，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為科學(xué)研究的重要載體要求越來越高。我國1988年開始頒布《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》以來，又陸續(xù)發(fā)布了多部相關(guān)管理辦法和細(xì)則，從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理、質(zhì)量控制、從業(yè)人員等各方面加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行業(yè)的規(guī)范。醫(yī)學(xué)院校開展教學(xué)、科研需要大量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，也需要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心強(qiáng)有力的支撐。大規(guī)模使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)于生物安全的防控帶來了嚴(yán)峻的考驗(yàn)，如何科學(xué)、規(guī)范化管理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)成為高校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的難題。本文總結(jié)了各級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室和防控實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物安全方面的管理經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合我校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的一些管理理念和管理措施進(jìn)行了深入地探討。

1 SPF級(jí)屏障系統(tǒng)規(guī)范化管理

1.1 屏障設(shè)施管理

屏障系統(tǒng)設(shè)施正常運(yùn)轉(zhuǎn)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制的關(guān)鍵，也是生物安全防控的基石。SPF級(jí)屏障系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室是由通風(fēng)系統(tǒng)、空調(diào)系統(tǒng)、純水處理系統(tǒng)、照明系統(tǒng)、監(jiān)控系統(tǒng)和高壓消毒設(shè)備等共同組成的一個(gè)高級(jí)別動(dòng)物環(huán)境設(shè)施，李長雷等[1]在SFP級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)與管理中已詳細(xì)講解。

需要補(bǔ)充的是，徐州地處京津冀與長三角兩大污染地區(qū)的過渡地帶，地理位特殊，是江蘇PM2.5濃度水平最高的地級(jí)市[2]。因此，在通風(fēng)系統(tǒng)方面需要因地制宜，我校動(dòng)物中心在冬季供暖、霧霾嚴(yán)重時(shí)節(jié)，平均需要一個(gè)星期換一次初效過濾器，一個(gè)月更換一次中效過濾器才能保障屏障系統(tǒng)內(nèi)壓差維持在10～50Pa。

另外，徐州地區(qū)水質(zhì)較硬，在空調(diào)系統(tǒng)和加濕處理器前置必須加裝軟水處理裝置，否則整個(gè)空調(diào)和加濕系統(tǒng)很快積堿堵塞，甚至因長時(shí)間沉積而導(dǎo)致管道銹蝕。

1.2 實(shí)驗(yàn)人員的入室申請和管理

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上崗證考試和入室培訓(xùn)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上崗證考試，現(xiàn)稱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物培訓(xùn)記錄卡考試是由江蘇省科技廳動(dòng)物管理辦公室統(tǒng)一管理，我校每年組織兩次培訓(xùn)考試，要求所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員均需要通過相關(guān)考試，才可以進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，證件有效期為五年。

通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上崗證考試后，可申請進(jìn)入中心屏障系統(tǒng)進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，進(jìn)入前由中心老師進(jìn)行入室培訓(xùn)，包括人員走向、動(dòng)物走向、物品試劑走向，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的飼養(yǎng)間、檢疫室、手術(shù)室、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室、潔物間布局，動(dòng)物飲用水、內(nèi)線電話的分布，實(shí)驗(yàn)后防護(hù)服放置、廢棄物處理、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體處理等等。

1.2.2 倫理審查、屏障系統(tǒng)使用協(xié)議書和安全承諾書提交

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)設(shè)立在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，為了維護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利，規(guī)范實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員的職業(yè)行為，防止生物安全問題發(fā)生，教師、研究生在課題立項(xiàng)申請凡涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究，均需向動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)遞交倫理審查表，經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查通過后，方可立項(xiàng)、開題，進(jìn)入研究階段。進(jìn)入屏障系統(tǒng)前，向?qū)嶒?yàn)室老師遞交屏障系統(tǒng)使用協(xié)議書、安全承諾書。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源審核

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供貨商需通過統(tǒng)一、嚴(yán)格的招標(biāo)，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供貨商均系國內(nèi)、省內(nèi)知名的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物企業(yè)，且每兩年啟動(dòng)一次新的招標(biāo)程序以增補(bǔ)或淘汰實(shí)驗(yàn)動(dòng)物企業(yè)并且調(diào)整新的動(dòng)物價(jià)格。要求所有教師、學(xué)生動(dòng)物購買必須經(jīng)由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心統(tǒng)一訂購，不得擅自從非招標(biāo)的企業(yè)購買。由特殊渠道購買或贈(zèng)送的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，需要提供相應(yīng)的動(dòng)物質(zhì)量合格證，進(jìn)入屏障系統(tǒng)首先進(jìn)行隔離檢疫。

1.2.4 記錄登記表的審查

制定各項(xiàng)登記記錄本，實(shí)驗(yàn)人員需要做好記錄，包括實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)出登記表，動(dòng)物進(jìn)出登記表，試劑物品進(jìn)出登記表，籠位變更登記表，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容記錄卡掛牌，動(dòng)物安樂死登記表。實(shí)驗(yàn)人員原始記錄的登記是對(duì)生物安全防控的數(shù)據(jù)積累，登記內(nèi)容有人員進(jìn)出時(shí)間記錄，有動(dòng)物品種、來源和去向的記錄，有實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的記錄，所有的記錄保障了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有跡可查，這是防控生物安全的重要數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1.3 中心人員加強(qiáng)管理意識(shí)

1.3.1 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和獸醫(yī)的管理

屏障系統(tǒng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室管理老師和獸醫(yī)的責(zé)任意識(shí)和管理水平是決定整個(gè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重要因素。管理內(nèi)容包括查看整個(gè)系統(tǒng)的溫控、濕度、壓差，實(shí)驗(yàn)人員的各項(xiàng)記錄是否及時(shí)登記，動(dòng)物是否有異常疾病和死亡，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)解決。對(duì)于違規(guī)的實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)肅處理，根據(jù)情節(jié)的嚴(yán)重分為：警告、嚴(yán)重警告、?？ń搿⑷∠n題組入室資格，并對(duì)造成的相關(guān)損失要求賠償。

1.3.2 飼養(yǎng)人員的管理

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)人員的整體素質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制起決定因素。中心每個(gè)月對(duì)飼養(yǎng)員進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理培訓(xùn)，要求飼養(yǎng)人員嚴(yán)格遵守規(guī)章制度，熟練掌握飼養(yǎng)動(dòng)物的基本技術(shù)，每天對(duì)屏障系統(tǒng)內(nèi)籠架、墻面、地面進(jìn)行消毒。同時(shí)要求飼養(yǎng)人員做好室內(nèi)的消毒記錄，動(dòng)物出現(xiàn)死亡及時(shí)聯(lián)系獸醫(yī)人員進(jìn)行檢查。

1.3.3 清潔人員管理

籠器具清潔人員需要高度的責(zé)任心，實(shí)驗(yàn)室每天會(huì)在不同時(shí)間段更換大量的墊料籠盒，要求籠盒清潔人員及時(shí)清洗，如發(fā)現(xiàn)動(dòng)物尸體立即送至冰柜。清洗籠盒需將墊料傾倒干凈，籠盒在消毒池內(nèi)浸泡30分鐘以上，然后用高壓水槍或刷子徹底清洗，不留殘?jiān)Ｇ逑赐昊\盒自然晾干，運(yùn)至消毒前室消毒備用。

實(shí)驗(yàn)服的清洗同樣需要及時(shí)，尤其在實(shí)驗(yàn)服集中更換的時(shí)期，如不能夠按時(shí)清洗、消毒會(huì)造成實(shí)驗(yàn)服積壓，沒有工作服更換的情況。清洗烘干后的工作服疊放整齊，送至消毒前室高壓消毒備用。

屏障系統(tǒng)室外走道、墻壁、地面，需要清潔人員每天及時(shí)噴霧、擦拭、拖地消毒，不留灰塵和污物，保障屏障系統(tǒng)外的干凈整潔。

1.3.4 高壓消毒人員管理

脈動(dòng)真空滅菌器是高校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心必備的消毒設(shè)備，負(fù)責(zé)所有動(dòng)物籠器具和各類物品的消毒滅菌工作，要求所有高壓消毒人員需持有特種設(shè)備操作證上崗。滅菌時(shí)，消毒員不得擅自離崗，要堅(jiān)守崗位，密切觀察滅菌器的壓力，時(shí)間和溫度，保證滅菌器的滅菌性能。

人員要嚴(yán)格掌握滅菌程序，加強(qiáng)脈動(dòng)真空滅菌器的清潔及保養(yǎng)工作，并保持物品間、消毒前室清潔整齊。要熟練掌握各類物品滅菌的溫度、壓力和時(shí)間，要經(jīng)常檢查高壓滅菌器的功能。壓力容器在運(yùn)行過程中，如果突然發(fā)生故障，嚴(yán)重威脅設(shè)備和人身安全時(shí)，操作人員應(yīng)立即采取緊急措施（迅速切斷電源），停止容器運(yùn)行，并及時(shí)報(bào)告、聯(lián)系維修工程師。

2 動(dòng)物觀察室的監(jiān)督管理

2.1 動(dòng)物觀察室規(guī)定

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察室是臨時(shí)存放動(dòng)物的場所，原則上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不得飼養(yǎng)超過一周，各實(shí)驗(yàn)室不得私自外購動(dòng)物，所有動(dòng)物均由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心統(tǒng)一訂購，要求企業(yè)以空調(diào)車運(yùn)輸，包裝盒有高效濾膜窗口，同時(shí)包裝封口完整，保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源清晰。

要求環(huán)境設(shè)施和動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施需要達(dá)到江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)。觀察室環(huán)境需清潔干凈、排風(fēng)通暢、光照合理，飼養(yǎng)籠盒必須是獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)（IVC），且有專人定期檢查通排風(fēng)系統(tǒng)、空調(diào)系統(tǒng)等，定期清掃、消毒并記錄。

2.2 實(shí)驗(yàn)室人員要求

近年來，隨著我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科研活動(dòng)的日益增加，生物安全事故亦有明顯增多現(xiàn)象，原因是多方面的，如實(shí)驗(yàn)室責(zé)任人不明確，管理機(jī)制不健全，檢查督查不到位，應(yīng)急處理制度不完備。因此，要求各實(shí)驗(yàn)室的動(dòng)物觀察室要求明確第一責(zé)任人，明確各實(shí)驗(yàn)室管理老師，嚴(yán)格管理課題組和研究生進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)人員按照屏障系統(tǒng)要求登記所有的出入記錄、動(dòng)物進(jìn)出記錄、籠位變更記錄、消毒記錄、安樂死記錄。飼養(yǎng)室籠盒、墊料、水瓶及時(shí)更換、清洗、高壓滅菌消毒。實(shí)驗(yàn)人員做好個(gè)人防護(hù)，實(shí)驗(yàn)時(shí)穿戴好口罩手套和工作服，實(shí)驗(yàn)過程遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理要求，愛護(hù)動(dòng)物，禁止虐待、戲逗動(dòng)物，避免對(duì)動(dòng)物造成的不適和痛苦。

2.3 巡檢獸醫(yī)檢查

實(shí)驗(yàn)室所有涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的課題，需經(jīng)過巡檢獸醫(yī)核實(shí)，并由主管獸醫(yī)進(jìn)行倫理道德審查并制定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案，方可在動(dòng)物觀察室臨時(shí)飼養(yǎng)動(dòng)物。

巡檢獸醫(yī)每天對(duì)各動(dòng)物觀察室進(jìn)行檢查，檢查內(nèi)容包括倫理審查、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)密度、動(dòng)物是否有非正常死亡、動(dòng)物尸體處理等，并制定每周檢疫消毒方案，實(shí)驗(yàn)室協(xié)助完成相關(guān)工作。主管獸醫(yī)督導(dǎo)巡檢獸醫(yī)工作，完善消毒檢疫方案，每周出檢查報(bào)告提交至各個(gè)實(shí)驗(yàn)室。

3 普通級(jí)動(dòng)物的防控管理

3.1 嚴(yán)控動(dòng)物來源

我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理要求嚙齒類的大、小鼠需達(dá)到清潔級(jí)、SPF級(jí)，但是其他動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境達(dá)不到此類級(jí)別，如豚鼠、兔、犬、羊、豬和猴等均為普通級(jí)動(dòng)物。小動(dòng)物集約化的飼養(yǎng)管理、監(jiān)測，動(dòng)物來源明確是能夠控制病原微生物的，而犬、羊、豬和猴等大動(dòng)物存在一定的人畜共患病，應(yīng)當(dāng)杜絕從農(nóng)戶或農(nóng)貿(mào)市場采購直接用于科研實(shí)驗(yàn)。我校大動(dòng)物采購均是通過公開招標(biāo)方式，要求相關(guān)企業(yè)提供季度檢測報(bào)告，質(zhì)量合格證、生產(chǎn)許可證等。

3.2 加強(qiáng)動(dòng)物安全意識(shí)教育

近年來發(fā)生的各類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人畜共患病均是由于實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范或安全防范意識(shí)不足引起的，對(duì)于普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的科研實(shí)驗(yàn)尤其要加強(qiáng)安全意識(shí)教育，防止生物安全事故的發(fā)生。學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物認(rèn)知的缺陷，要求教師在教學(xué)、科研過程中嚴(yán)格要求，實(shí)驗(yàn)過程中戴好口罩手套、穿好工作服，做好各項(xiàng)防護(hù)措施。實(shí)驗(yàn)注意正確的保定方式，防止動(dòng)物咬傷，如出現(xiàn)意外情況及時(shí)消毒處理并上報(bào)巡檢獸醫(yī)和相關(guān)老師。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心主管獸醫(yī)定期向教師、學(xué)生宣傳和講解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見的生物安全與控制措施[3，4]，要求感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必須在相應(yīng)級(jí)別生物安全設(shè)施內(nèi)進(jìn)行。使用過的廢棄物、墊料、動(dòng)物尸體等及時(shí)帶離觀察室，做好分類回收，不得隨意丟棄。

4 動(dòng)物尸體、廢水、廢氣、廢棄墊料處理

我國2014年修訂的環(huán)境保護(hù)法，明確要求對(duì)動(dòng)物尸體、污水和廢棄物進(jìn)行科學(xué)規(guī)范的處置，防止污染環(huán)境。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體可分為感染性和非感染性，動(dòng)物尸體必須分袋包裝，感染性動(dòng)物尸體要求包裝袋封口注明感染物，所有動(dòng)物尸體送至固定的冰柜或冷庫。我校與相關(guān)動(dòng)物無害化處理公司簽訂合同，要求公司及時(shí)將動(dòng)物尸體運(yùn)走并做無害化處理。移交動(dòng)物尸體須填報(bào)“動(dòng)物交接登記表”，注明動(dòng)物種類、數(shù)量、有何污染等。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物籠盒洗刷的污水不得與生活污水同一管道排放，污水首先過濾后進(jìn)入集水池，通過二氧化氯發(fā)生器消毒處理過濾后方可匯入城市污水管網(wǎng)。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排放的刺鼻氣體是不可避免的，如不做處理會(huì)影響周圍居民和學(xué)生的生活學(xué)習(xí)環(huán)境。目前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物廢氣處理主要在室外排風(fēng)口安裝洗滌塔和生物滴濾器等裝置，氣體達(dá)標(biāo)后方可排放至大氣中。

廢棄墊料是動(dòng)物中心每天必出的污染源，要求中心清潔人員及時(shí)清理，將墊料傾倒至大號(hào)廢棄物垃圾袋，堆放至固定垃圾箱內(nèi)，不得與生活垃圾放置同一處。同時(shí)，要求垃圾處理人員每天及時(shí)拖運(yùn)，并做相應(yīng)無害化處理。

5 生物安全應(yīng)急預(yù)案

各實(shí)驗(yàn)室行政主管為生物安全第一負(fù)責(zé)人，各實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物觀察室至少配備一名生物安全信息員，負(fù)責(zé)上報(bào)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物安全突發(fā)事件信息，參與處理實(shí)驗(yàn)物突發(fā)生物安全事件。

針對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)生物安全突發(fā)事件，制定相應(yīng)的應(yīng)急處理程序，逐級(jí)匯報(bào)、處理。要求應(yīng)急預(yù)案制度上墻，巡檢獸醫(yī)、主管獸醫(yī)、實(shí)驗(yàn)室相關(guān)負(fù)責(zé)人、校實(shí)驗(yàn)室安全管理科聯(lián)系方式上墻。

6 結(jié)語

醫(yī)學(xué)院校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物安全體系的建立是一個(gè)綜合管理的過程，需要校領(lǐng)導(dǎo)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心、實(shí)驗(yàn)室安全管理科、各個(gè)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、老師和學(xué)生共同配合。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心作為管理體系的主體，從中心屏障系統(tǒng)、各實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物留觀室、普通級(jí)動(dòng)物房等管理方面出發(fā)，建立完整的屏障系統(tǒng)管理制度、動(dòng)物留觀室管理制度、倫理審查制度、巡檢獸醫(yī)管理制度、動(dòng)物與廢棄物無害化處理制度、生物安全應(yīng)急預(yù)案，把醫(yī)學(xué)院校的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心建設(shè)成安全、環(huán)保、規(guī)范的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。

當(dāng)前各個(gè)醫(yī)學(xué)院校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心都存在管理困難的問題，希望政府相關(guān)部門和高校積極探索生物安全管理辦法[5]，形成完善的、統(tǒng)一的管理規(guī)章制度，減少或避免生物安全事件的發(fā)生，不斷推進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物事業(yè)的發(fā)展，為生命科學(xué)的研究提供優(yōu)良的環(huán)境。