蘭嶼肉桂組織培養(yǎng)技術(shù)初探

陳海霞

摘 要 蘭嶼肉桂既是優(yōu)美的盆栽觀葉植物，也是重要的園林綠化植物。試驗(yàn)以蘭嶼肉桂的帶芽莖段為外植體，研究了不同外源激素配比對(duì)蘭嶼肉桂組織培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：帶芽莖段誘導(dǎo)腋芽較適宜的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1 +NAA 0.10 mg·L-1，誘導(dǎo)率為87.5%;適宜的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA?0.10 mg·L-1，增殖系數(shù)為3.15。

關(guān)鍵詞 蘭嶼肉桂;組織培養(yǎng);外植體

中圖分類號(hào)：S573.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.30.072蘭嶼肉桂（Cinnamomum kotoense Kanehira et Sasaki）

又名紅頭嶼肉桂、大葉肉桂、臺(tái)灣肉桂、平安樹，為樟科樟屬的常綠喬木，主要分布于我國臺(tái)灣地區(qū)南部（蘭嶼）[1]，在我國南方廣泛栽培。蘭嶼肉桂樹型端莊，葉色亮綠，全株能散發(fā)清新香氣，凈化空氣，有益于人身心健康，既是理想的室內(nèi)盆栽觀葉植物，又是重要的城市綠化景觀植物，具有十分廣闊的市場(chǎng)前景。蘭嶼肉桂傳統(tǒng)的繁殖方法是采用播種育苗[2]，關(guān)于其組織培養(yǎng)的研究還未見報(bào)道。利用現(xiàn)代植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可加快種苗繁育速度，實(shí)現(xiàn)種苗的工廠化生產(chǎn)，給經(jīng)營者帶來豐厚的經(jīng)濟(jì)效益。本研究以蘭嶼肉桂的莖段為外植體，探討了不同外源激素配比對(duì)其離體培養(yǎng)的影響，填補(bǔ)了蘭嶼肉桂組織培養(yǎng)研究的空白，對(duì)蘭嶼肉桂工廠化育苗具有一定意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)與材料

試驗(yàn)在咸寧市園林科學(xué)研究所進(jìn)行，供試材料來自咸寧職業(yè)技術(shù)學(xué)院園藝實(shí)訓(xùn)基地生長(zhǎng)健壯的蘭嶼肉桂植株。從采樣前60 d開始，每7 d對(duì)植株噴施噁霉靈的500倍液1次。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的處理

選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的嫩枝為外植體，去除葉片，先用洗潔凈溶液浸泡10～20 min，再在流水下沖洗

30 min，放置在干凈的燒杯中備用。在超凈工作臺(tái)上將預(yù)處理好的外植體先用75%的酒精浸泡30 s，無菌水漂洗3次;再用0.1%的升汞浸泡10 min，無菌水漂洗7～8次[3]。然后將外植體放在無菌濾紙上吸干表面水分，切割成1.5 cm左右?guī)а康那o段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

1.2.2 外植體的誘導(dǎo)

誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA

（0.5 mg·L-1、1.0 mg·L-1、1.5 mg·L-1）、NAA（0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.15 mg·L-1），共設(shè)計(jì)9個(gè)處理，試驗(yàn)不同濃度的6-BA和NAA組合對(duì)蘭嶼肉桂誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響。接種45 d后，統(tǒng)計(jì)腋芽誘導(dǎo)率。每個(gè)處理的培養(yǎng)基中均添加30 g·L-1的蔗糖、7 g·L-1的瓊脂和2 g·L-1的活性炭。

1.2.2 增殖培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)成功的無菌苗切割成2.0 cm左右?guī)а康那o段，接種到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA（1.0 mg·L-1、1.5 mg·L-1、2.0 mg·L-1）、NAA（0.10 mg·L-1、0.15 mg·L-1、0.20 mg·L-1），共設(shè)計(jì)9個(gè)處理，每個(gè)處理的培養(yǎng)基中均添加30 g·L-1的蔗糖、7 g·L-1的瓊脂、2 g·L-1的活性炭。繼代培養(yǎng)45 d后，統(tǒng)計(jì)增殖芽數(shù)，計(jì)算增殖系數(shù)。

1.3 培養(yǎng)條件

所有培養(yǎng)基pH值均為5.8。培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照強(qiáng)度1 000～2 000 lx，光照時(shí)間13 h·d-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)蘭嶼肉桂誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)中，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素對(duì)側(cè)芽的萌發(fā)生長(zhǎng)起著非常重要的作用。由表1可知，蘭嶼肉桂莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)中，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著6-BA濃度的增大，外植體誘導(dǎo)率上升。當(dāng)6-BA濃度為1.5 mg·L-1、NAA濃度為0.10 mg·L-1時(shí)效果最好，誘導(dǎo)率達(dá)87.5%，明顯高于其他處理。因此，蘭嶼肉桂莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)較適宜的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)蘭嶼肉桂增殖培養(yǎng)的影響

適宜的外源激素配比可以促進(jìn)中間繁殖體系的增殖，提高芽的增殖速度。由表2可知，在添加有不同激素配比的培養(yǎng)基中，增殖情況有一定的差異。在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，當(dāng)NAA濃度不變時(shí)，隨著6-BA濃度的增大，增殖系數(shù)呈先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)6-BA濃度為1.5 mg·L-1、NAA濃度為0.10 mg·L-1時(shí)，增殖系數(shù)最大為3.15，明顯高于其他激素配比。因此，蘭嶼肉桂適宜的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1。

3 結(jié)論

外源激素是培養(yǎng)基中的關(guān)鍵物質(zhì)，對(duì)植物組織培養(yǎng)起著決定性作用。對(duì)于不同的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)目的，不同種類、濃度和配比的外源激素的效果存在很大差異。本研究以蘭嶼肉桂的莖段為外植體，研究不同濃度的6-BA和NAA配比對(duì)其莖段培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)均可成功操作;得到較適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1，誘導(dǎo)率為87.5%;繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1，增殖系數(shù)為3.15。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國植物志第31卷[M].北京：科學(xué)出版社，1982.

[2] 劉文，曾曉輝，鄧美紅，等.蘭嶼肉桂露地種植技術(shù)規(guī)程[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（28）：154-156.

[3] 劉穎嘉，韓藝花，叢中笑，等.肉桂組織快繁技術(shù)——外植體消毒及褐化控制的研究[J].現(xiàn)代園藝，2014

（11）：15-16.

（責(zé)任編輯：趙中正）