T 細(xì)胞淋巴瘤的流式細(xì)胞免疫表型特征研究進(jìn)展

黃容，婁世鋒

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院血液內(nèi)科，重慶)

0 引言

T 細(xì)胞淋巴瘤(T-cell lymphoma，TCL)是一種來(lái)源于T 淋巴細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病，T 細(xì)胞淋巴瘤約占非霍奇金淋巴瘤10%～15%。2016 年世界衛(wèi)生組織(WHO)將T 細(xì)胞淋巴瘤分為不同的病理亞型：T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞淋巴瘤/白血病。大致分為兩類：前T 細(xì)胞腫瘤和成熟T 細(xì)胞淋巴瘤，可原發(fā)于淋巴結(jié)、結(jié)外組織或皮膚。T 細(xì)胞淋巴瘤的免疫表型診斷依賴于其T 細(xì)胞表面抗原的丟失或異常，這些變化往往十分微弱，流式細(xì)胞免疫表型檢測(cè)以其快捷、敏感、特異等優(yōu)點(diǎn)可以把這種用免疫組織化學(xué)染色很難體現(xiàn)的變化體現(xiàn)出來(lái)，現(xiàn)流式細(xì)胞免疫表型檢測(cè)已成為T 細(xì)胞淋巴瘤的診斷檢查的重要組成部分，本文旨在對(duì)主要T 細(xì)胞淋巴瘤的流式細(xì)胞免疫表型特征作一綜述。

1 前T 細(xì)胞腫瘤

1.1 T 淋巴母細(xì)胞白血病/淋巴瘤(T Lymphoblastic leukemia/lymphoma，T-ALL/LBL)

T-ALL/LBL 是一種定向于T 細(xì)胞系的淋巴母細(xì)胞惡性腫瘤，好發(fā)于青少年男性，常表現(xiàn)為原發(fā)胸腺、淋巴結(jié)和結(jié)外部位受累(T-LBL)，或累及骨髓和外周血(T-ALL)，具有高度侵襲性。T-ALL/LBL 中的淋巴母細(xì)胞CD3，CD99，TdT，CD7 和其他T 細(xì)胞標(biāo)志物(CD1a，CD2，CD4，CD5，CD8)，CD34，CD10，CD4/CD8呈陽(yáng)性表達(dá)；CD19，CD20，HLA-DR，CD22，CD25 陰性[1]。T-ALL/LBL 可能顯示其他標(biāo)志物異常表達(dá)，例如B 細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物CD79a 和髓樣標(biāo)志物CD13 和CD33[2]。CD117、CD135 也可能呈陽(yáng)性[3]。通過(guò)免疫表型分析可將T-ALL/LBL 的亞型分為pro-T，pre-T，皮質(zhì)T 和髓質(zhì)T。pro-T 和pre-T 呈CD4 和CD8 雙陰性，而皮質(zhì)T 共表達(dá)CD4 和CD8，髓質(zhì)T 顯示一種或多種其他標(biāo)記的表達(dá)[1]。

1.2 早期T 細(xì)胞前體急性淋巴細(xì)胞白血病(Early T-Cell precursor acute lymphoblastic leukemia，ETP-ALL)

ETP-ALL 是T 細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病的小亞型，占兒童T-ALL 病例的10%-13%，成人病例的5%-10%[4]。大多數(shù)ETPALL 病例共有明顯不成熟的T 細(xì)胞免疫表型：胞質(zhì)CD3 和CD7陽(yáng)性，缺乏CD1a 和CD8 表達(dá)(陽(yáng)性淋巴母細(xì)胞＜5%)，缺乏或弱CD5 表達(dá)(陽(yáng)性淋巴母細(xì)胞＜75%)，以及表達(dá)一種或多種髓樣或干細(xì)胞標(biāo)記物(陽(yáng)性淋巴母細(xì)胞≥25%)：CD117，CD34，HLADR，CD13，CD33，CD11b 或CD65[5]。CD2，CD4 可以呈陽(yáng)性或陰性。據(jù)報(bào)道，在前體淋巴腫瘤中，CD123 的表達(dá)在ETP-ALL 中似乎是相對(duì)特異性的[6]。

2 成熟T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞瘤

2.1 T-幼淋細(xì)胞白血病(T-cell prolymphocytic leukemia，T-PLL)

T-PLL 是一種罕見(jiàn)的侵襲性T 細(xì)胞腫瘤，其特征是小到中等大小的前淋巴細(xì)胞的血液，骨髓，淋巴結(jié)，脾臟和肝臟受累。T-PLL表現(xiàn)出成熟的胸腺后T 細(xì)胞免疫表型(TdT，CD1a，CD51，CD21，CD71)。大多數(shù)表現(xiàn)為CD4+/CD8-，大約25%的病例呈CD4+/CD8+，僅少數(shù)病例呈CD4-/CD8+。CD52 通常呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。細(xì)胞質(zhì)CD3 始終存在，但膜表達(dá)可能為弱陽(yáng)性或陰性。自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞質(zhì)顆粒標(biāo)記物始終是陰性的。通常CD7 表達(dá)很強(qiáng)，而CD25 可能為陰性[7]。此外，近年來(lái)Xueyan Chen 等[8]研究中已檢測(cè)到T-PLL 病例中出現(xiàn)包括一種或多種泛T 細(xì)胞抗原的異常表達(dá)，CD45 的罕見(jiàn)損失和髓樣標(biāo)記物CD117 的罕見(jiàn)異常表達(dá)。

2.2 T-大顆粒淋巴細(xì)胞白血病(T-large granular lymphocytic leukemia，T-LGLL)

T-LGLL 是一種慢性淋巴細(xì)胞增生性疾病，通常伴隨著緩慢的臨床過(guò)程，其特征在于具有細(xì)胞毒性表型(CD3，CD8 和CD57)的T-大顆粒淋巴細(xì)胞(T-LGL)的克隆擴(kuò)增[9]。從表型上看，T-LGL保留了正常細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞的許多表型和功能特性。80%-90%的T-LGLL 患者顯示表型CD3+CD8+CD57+CD56-CD28-。很少遇到罕見(jiàn)的變體，可以在有或沒(méi)有CD8 共表達(dá)的情況下表達(dá)CD4+[10]。存在至少一種泛T 細(xì)胞抗原的異常表達(dá)，通常CD5 或CD7 表達(dá)降低或缺失的表達(dá)形式是一項(xiàng)近乎普遍的發(fā)現(xiàn)[11]。在許多病例中亦檢測(cè)到CD16，CD56 和CD94 等NK 細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)[12-14]。

2.3 肝脾T 細(xì)胞淋巴瘤(hepatosplenic T cell lymphoma，HSTCL)

HSTCL 是臨床較罕見(jiàn)的一種外周T 細(xì)胞淋巴瘤(peripheral T celllymphoma，PTCL)，其主要臨床表現(xiàn)為肝脾顯著增大，而相關(guān)淋巴結(jié)很少累及。HSTCL 的流式細(xì)胞免疫表型通常CD2，CD3，CD7 呈陽(yáng)性，而CD1a，CD5，CD10，TdT 呈陰性。且通常大多數(shù)情況是CD4-和CD8-，少數(shù)病例呈CD8+。CD56 在三分之二的病例中表達(dá)，而CD57 通常為陰性[15]。經(jīng)常表達(dá)一種或多種NK 細(xì)胞相關(guān)抗原(CD16，CD56 和CD57)。經(jīng)常表達(dá)與激活相關(guān)但不嚴(yán)格限于T 細(xì)胞的其他分子，例如CD11b，CD11c，CD38，CD43 等[16]。通常HSTCL 病例中B 細(xì)胞抗原呈陰性，但近期Hemani Jain 等[17]報(bào)道了罕見(jiàn)的表達(dá)B 淋巴細(xì)胞標(biāo)志物CD19 陽(yáng)性的HSTCL。

2.4 成熟NK 細(xì)胞腫瘤(Mature NK-cell neoplasms)

成熟NK 細(xì)胞腫瘤性疾病包括結(jié)外 NK-/T- 細(xì)胞淋巴瘤，鼻型(ENK/TL-NT)，侵襲性NK 細(xì)胞白血病(ANKL)和 NK 細(xì)胞的慢性淋巴組織增生性疾病(CLPD-NK)。

ENK/TL-NT 是一種主要與愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒(EBV)有關(guān)的結(jié)外淋巴瘤。ENK/TL-NT 腫瘤細(xì)胞通常表達(dá)細(xì)胞質(zhì)CD3，CD56，通常表面抗原CD3，CD4 和CD5 呈陰性[18]。CD38 是在大多數(shù)ENK/TL-NT 患者中表達(dá)[19]。在部分病例中可見(jiàn)CD52 的表達(dá)。CD30 在ENKTL 中頻繁表達(dá)，代表治療靶點(diǎn)[20,21]。

ANKL 是一種罕見(jiàn)的大顆粒淋巴細(xì)胞白血病，具有侵襲性的臨床過(guò)程。其免疫表型通常為CD2+，sCD3-，CD3ε+，CD16+和CD56+，缺乏髓樣和B 細(xì)胞標(biāo)記[22]。分別有29.7%和78.4%的患者缺乏CD7 和CD8，幾乎一半的患者表現(xiàn)出較強(qiáng)的CD45 表達(dá)，且HLA-DR 在大多數(shù)患者中強(qiáng)烈表達(dá)[23]。

CLPD-NK 發(fā)生在老年人身上，通常表現(xiàn)出長(zhǎng)期無(wú)痛的過(guò)程。CLPD-NK 的免疫表型特征是CD3-，CD16+，CD56+，并具有可變的CD57 表達(dá)[24]。CD2 和CD7 存在于病例的子集中，偶爾可以檢測(cè)到CD8。腫瘤性NK 細(xì)胞通常與CD45/SSC 門控上的正常淋巴細(xì)胞重疊[25]。還可能出現(xiàn)CD16 的喪失和CD5 的異常共表達(dá)。

2.5 伴濾泡輔助T 細(xì)胞表型的淋巴結(jié)外周T 細(xì)胞淋巴瘤(Nodal peripheral T-cell lymphomas with T follicular helper phenotype，NPTCL-TFH)

NPTCL-TFH 包括血管免疫母細(xì)胞性T 細(xì)胞淋巴瘤(AITCL)、濾泡性T 細(xì)胞淋巴瘤和其他伴FTH 表型的結(jié)內(nèi)外周T 細(xì)胞淋巴瘤(PTCL)。這幾種淋巴瘤有很多相似的基因改變，并且至少表達(dá)2-3 個(gè)濾泡輔助T 細(xì)胞(TFH)相關(guān)的抗原(CD279，CD10，BCL6，CXCL13，ICOS，SAP 和CCR5)[26]。AITCL 患者經(jīng)常存在表面抗原CD3，CD5 和CD7 異常丟失或表達(dá)降低。CD10 的異常表達(dá)在68%的病例中觀察到，并且通常是異質(zhì)性的[27]。據(jù)報(bào)道，在高達(dá)三分之一的病例中觀察到CD30 的表達(dá)[28]。CD21 和CD23 突出了濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞的特征性增殖。幾乎所有AITCL 病例都存在少量但截然不同的sCD3-/CD4+T 細(xì)胞群，其外周血中的CD10 表達(dá)不同。sCD3-/CD4+T 細(xì)胞對(duì)AITCL 的診斷具有較高的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(94%)[29]。

2.6 成人T 細(xì)胞白血病/淋巴瘤(Adult T-cell leukemia/lymphoma，ATLL)

ATLL 是一種與人T 細(xì)胞白血病病毒-1(HTLV-1)感染直接相關(guān)、發(fā)生于成人的特殊類型的罕見(jiàn)T 細(xì)胞淋巴增生性腫瘤，其病變主要發(fā)生在外周血淋巴細(xì)胞，亦可侵及骨髓。ATLL 表達(dá)T 細(xì)胞淋巴細(xì)胞標(biāo)記CD2，CD4，CD5，CD45RO，CD29，通常對(duì)CD7，CD8 和CD26 呈陰性，并顯示CD3 表達(dá)降低。淋巴細(xì)胞激活標(biāo)記CD25 始終存在[30]。盡管CD25 表達(dá)不是ATLL 獨(dú)有的，但其在其他T 細(xì)胞腫瘤上的存在通常更易變且強(qiáng)度更低。大多數(shù)ATLL 病例是CD4+/CD8-，但也可能遇到罕見(jiàn)的免疫表型變異(CD4 陰性，CD8 陽(yáng)性，雙陽(yáng)性或雙陰性變異)[31-33]。亦可見(jiàn)罕見(jiàn)NK 細(xì)胞標(biāo)志物CD56 在ATLL 中表達(dá)[34]。

2.7 間變性大細(xì)胞淋巴瘤(anaplastic large-cell lymphoma，ALCL)

ALCL 亦稱ki-1 淋巴瘤，是臨床上具有侵襲性且在病理上不同的淋巴樣腫瘤，臨床常有皮膚侵犯，伴或不伴淋巴結(jié)及其他結(jié)外部位病變。當(dāng)前，在2016 年WHO 分類中公認(rèn)有四個(gè)不同的ALCL 實(shí)體：間變性淋巴瘤激酶(ALK)(+)，ALK(-)，原發(fā)性皮膚ALCL 和與乳房植入物相關(guān)ALCL。ALCL 細(xì)胞主要呈現(xiàn)T 細(xì)胞或裸細(xì)胞表型，前者為主，CD30 在大部分ALCL 病例的腫瘤性細(xì)胞呈彌漫強(qiáng)陽(yáng)表達(dá)，但也早已存在CD30 陰性或弱陽(yáng)性的病例報(bào)道。ALCL 通常缺乏一種或多種泛T 細(xì)胞抗原的表達(dá)，包括CD3，CD5，CD7 和CD8。CD2 和CD4 是最常表達(dá)的T 細(xì)胞抗原[35]。B 細(xì)胞標(biāo)志抗原CD20，CD19，CD79α 等在ALCL 不表達(dá)[36]。且ALCL 通常CD15 抗原呈陰性，偶爾表達(dá)諸如CD13，CD33 和CD68 等髓樣標(biāo)志物，但其表達(dá)常見(jiàn)于ALK+ALCL，在ALK-中較少見(jiàn)[37]。

3 結(jié)語(yǔ)

目前WHO 淋巴造血系統(tǒng)腫瘤分類是集臨床生物學(xué)行為、病理組織學(xué)形態(tài)、免疫表型以及細(xì)胞遺傳學(xué)改變?yōu)橐惑w的綜合因素分類體系。傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)對(duì)診斷和判斷TCL 的病情具有局限性，尤其是對(duì)于臨床無(wú)法獲得活檢標(biāo)本、單純淋巴細(xì)胞增多或者淋巴結(jié)腫大病理未能確診的TCL 患者，流式細(xì)胞儀可以準(zhǔn)確判斷異?？寺?，通過(guò)發(fā)掘和詮釋流式圖上一些細(xì)胞群免疫表型的重要信息，對(duì)TCL 細(xì)胞的免疫表型研究，是TCL 診斷、分析、微小殘留病監(jiān)測(cè)、預(yù)后評(píng)估以及個(gè)體化治療中不可缺少的檢測(cè)手段。