血清miR-141聯(lián)合PSA、NTx檢測(cè)對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

李紹武，李志霞，肖 華，卓 芬，黃娟娟

(海南省第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南三亞 572000)

前列腺癌(PCa)是一種發(fā)生在前列腺上皮的惡性腫瘤，其中前列腺腺癌占95%以上，隨年齡增長(zhǎng)，尤其55歲以后男性發(fā)病率逐漸升高，在男性惡性腫瘤發(fā)病率中排第6位，嚴(yán)重威脅男性健康[1-2]。PCa發(fā)病隱匿，早期無(wú)明顯癥狀，常以骨轉(zhuǎn)移為最早、最常見就診病因，PCa合并骨轉(zhuǎn)移可引起骨痛、脊髓壓迫、病理性骨折等骨相關(guān)事件，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量及預(yù)后[3-5]，因此，早期診斷PCa骨轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。目前，臨床常用前列腺特異性抗原(PSA)篩查診斷高危人群，但對(duì)于早期PCa患者存在一定局限，良性前列腺增生、前列腺炎患者血清PSA水平亦可升高，易造成假陽(yáng)性，且不能區(qū)分侵略性及非侵略性癌癥。骨組織代謝十分活躍，Ⅰ型膠原氨基末端肽(NTx)是骨組織特異性溶解終產(chǎn)物，是目前理想評(píng)價(jià)早期轉(zhuǎn)移性骨腫瘤的靈敏、特異性指標(biāo)[6]。微小RNA(miRNA)與多種癌癥發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，血清miRNA作為疾病診斷標(biāo)志物成為近來(lái)研究的熱點(diǎn)，其中miR-141可抑制PCa細(xì)胞的增殖和遷移，并通過靶向RUNX1誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與PCa發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7]。因此，本研究擬探討血清miR-141聯(lián)合PSA、NTx對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值，以期為臨床PCa骨轉(zhuǎn)移早期診斷提供新的參考價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年3月至2019年6月本院收治的136例PCa患者，根據(jù)Gleason評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行病理分級(jí)，低分化51例，中分化63例，高分化22例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合轉(zhuǎn)移性PCa診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，且均經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)確診；(2)年齡51～85歲；(3)臨床資料完整；(4)血液標(biāo)本采集前未接受任何治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)有嚴(yán)重感染、內(nèi)分泌及血液系統(tǒng)疾病或傳染性疾?。?3)近期服用激素等藥物。根據(jù)CT及MRI檢查結(jié)果將PCa患者分為兩組，骨轉(zhuǎn)移組62例，平均年齡(77.21±5.64)歲；非骨轉(zhuǎn)移組74例，平均年齡(72.94±3.28)歲。另匹配本院體檢健康者80例作為對(duì)照組，平均年齡(73.46±5.68)歲。收集患者治療前和健康者清晨空腹外周靜脈血血清標(biāo)本(-80 ℃冰箱保存)及年齡、病理分級(jí)等相關(guān)資料，所有資料收集均取得患者及其家屬知情同意并簽字確認(rèn)。本研究已通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2血清miR-141水平檢測(cè) 采用Trizol提取血清總RNA，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其濃度及純度。反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。采用?shí)時(shí)定量PCR(qPCR)擴(kuò)增miR-141。miR-141上游引物序列(5′-3′)為：ACCCAGTGCGATTTGTCA，下游引物序列(5′-3′)為：ACTGTACTGGAAGATGGACC。內(nèi)參U6上游引物序列(5′-3′)為：GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT，下游引物序列(5′-3′)為：CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。反應(yīng)條件：95 ℃，30 s；95 ℃，5 s；60 ℃，34 s，40個(gè)循環(huán)。具體操作參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。采用2-ΔΔCt法分析miR-141相對(duì)表達(dá)水平。

1.3血清PSA、NTx水平檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清PSA、NTx水平，ELISA試劑盒購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)分別為ab188388、ab109414，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.13組血清miR-141、PSA、NTx水平比較 骨轉(zhuǎn)移組血清miR-141、PSA及NTx水平高于非骨轉(zhuǎn)移組和對(duì)照組，非骨轉(zhuǎn)移組高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清miR-141、PSA、NTx水平比較

2.2血清miR-141、PSA及NTx對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值 以血清miR-141、PSA及NTx水平為檢驗(yàn)變量，以是否發(fā)生骨轉(zhuǎn)移為狀態(tài)變量(非骨轉(zhuǎn)移=0，骨轉(zhuǎn)移=1)繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，miR-141、PSA、NTx單獨(dú)檢測(cè)診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的AUC分別為0.840、0.763、0.820，截?cái)嘀捣謩e為2.152、31.769 ng/mL、195.46 mg/L，靈敏度分別為80.61%、64.52%、51.61%，特異度分別為83.78%、100.00%、100.00%。見表2、圖1。

圖1 血清miR-141、PSA及NTx單獨(dú)診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的ROC曲線

2.3血清miR-141聯(lián)合PSA、NTx對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值 將PSA、NTx通過Logistic回歸模型建立方程，二者聯(lián)合檢測(cè)診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的AUC為0.830，靈敏度、特異度分別為64.52%、100.00%。將miR-141、PSA、NTx通過Logistic回歸模型建立方程，三者聯(lián)合診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的AUC為0.946，靈敏度、特異度分別為85.48%、97.30%。見表2、圖2。

表2 血清miR-141、PSA及NTx對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

圖2 PSA、NTx聯(lián)合及miR-141、PSA、NTx三者聯(lián)合診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的ROC曲線

2.4Logistic回歸分析血清miR-141、PSA及NTx與PCa骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系 以是否發(fā)生骨轉(zhuǎn)移為因變量(非骨轉(zhuǎn)移=0，骨轉(zhuǎn)移=1)，以PCa患者血清miR-141、PSA及NTx水平為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，血清miR-141、PSA及NTx水平升高均是PCa骨轉(zhuǎn)移發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表3 Logistic回歸分析血清miR-141、PSA及NTx水平與PCa骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討 論

PSA與PCa轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，但與PCa骨轉(zhuǎn)移狀態(tài)無(wú)直接相關(guān)，盡管PSA是診斷PCa的血清學(xué)生物標(biāo)志物，但它并不總是與疾病的嚴(yán)重程度一致。有研究顯示，PSA聯(lián)合影像學(xué)檢查可提高PCa骨轉(zhuǎn)移的早期診斷效能[9]。但因骨組織代謝活躍，X射線檢測(cè)骨轉(zhuǎn)移需持續(xù)觀察1～3個(gè)月，全身核素骨顯像檢查雖靈敏度高，但特異度低，且存在放射性，診斷較滯后，均具有一定局限性，因此，急需尋找靈敏度、特異度高且便捷的血清學(xué)指標(biāo)[10]。另有研究報(bào)道，血清PSA聯(lián)合尿NTx和血清Ⅰ型膠原羧基末端肽(CTx)檢測(cè)對(duì)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者早期診斷、療效監(jiān)測(cè)及判斷骨相關(guān)事件發(fā)生具有重要意義[11]。雖然有研究發(fā)現(xiàn)，血清miR-141可作為非侵入性診斷PCa的潛在標(biāo)志物，但需要聯(lián)合其他指標(biāo)增加診斷準(zhǔn)確性[12]，目前關(guān)于miR-141、PSA及NTx三者聯(lián)合診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的研究很少，因此，本研究探討血清miR-141聯(lián)合PSA、NTx對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值，以期為臨床PCa骨轉(zhuǎn)移診斷提供新方案。

研究報(bào)道，PCa患者血清中miR-141水平明顯高于對(duì)照組，且與總PSA水平呈正相關(guān)[13]，還可通過調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞活性促進(jìn)前列腺癌成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)移[14]。而另有研究結(jié)果顯示，miR-141在PCa組織中水平較低，其水平升高可通過靶向抑制RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抑制PCa細(xì)胞增殖、遷移，并抑制其凋亡[7]。本研究結(jié)果顯示，與健康者比較，PCa患者血清miR-141水平明顯升高，其中與非骨轉(zhuǎn)移組比較，骨轉(zhuǎn)移組血清miR-141、PSA水平明顯升高，與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果不完全一致，推測(cè)其原因可能與研究對(duì)象選取及PCa發(fā)展階段不同有關(guān)，提示血清miR-141、PSA水平升高可能與PCa發(fā)生及骨轉(zhuǎn)移有關(guān)。膠原蛋白簡(jiǎn)稱膠原，是一種含糖蛋白質(zhì)，共有4種類型，主要分布于結(jié)締組織，其中骨組織主要含Ⅰ型膠原，由兩端非三股螺旋區(qū)部分及中間連續(xù)三重體螺旋區(qū)構(gòu)成，其中兩端非三股螺旋區(qū)部分為末端肽，由氨基構(gòu)成的稱NTx，由羧基構(gòu)成的稱之為CTx。PCa骨轉(zhuǎn)移多數(shù)表現(xiàn)為成骨型，少數(shù)表現(xiàn)為溶骨性，而兩個(gè)過程一定條件下可相互轉(zhuǎn)化，溶骨發(fā)生時(shí)可產(chǎn)生NTx及CTx，NTx是近來(lái)發(fā)現(xiàn)的骨轉(zhuǎn)移標(biāo)志物，對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移早期診斷具有重要價(jià)值[15]。本研究結(jié)果顯示，與健康者比較，PCa患者血清NTx水平明顯升高，其中與非骨轉(zhuǎn)移組比較，骨轉(zhuǎn)移組血清NTx水平明顯升高，提示NTx水平升高可能與PCa骨轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-141、PSA及NTx單獨(dú)檢測(cè)診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的AUC分別為0.840、0.763、0.820，當(dāng)截?cái)嘀捣謩e為2.152、31.769 ng/mL、195.46 mg/L，靈敏度分別為80.61%、64.52%、51.61%，特異度分別為83.78%、100.00%、100.00%。PSA、NTx二者聯(lián)合檢測(cè)診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的AUC為0.830，靈敏度、特異度分別為64.52%、100.00%。三者聯(lián)合診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的AUC為0.946，靈敏度、特異度分別為85.48%、97.30%。提示，血清miR-141聯(lián)合PSA、NTx診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的效能最佳，可能更具有臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究進(jìn)一步分析血清miR-141、PSA及NTx與PCa骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，三者水平升高均是PCa骨轉(zhuǎn)移發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示監(jiān)測(cè)血清miR-141、PSA及NTx水平可能對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移診斷及病情進(jìn)展評(píng)估具有一定參考價(jià)值。

4 結(jié) 論

綜上所述，血清miR-141、PSA、NTx水平升高與PCa骨轉(zhuǎn)移有關(guān)，三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PCa骨轉(zhuǎn)移早期診斷及病情評(píng)估的臨床應(yīng)用價(jià)值更高。但本研究尚存在一定局限性，關(guān)于血清miR-141、PSA、NTx診斷PCa骨轉(zhuǎn)移的最佳截?cái)嘀导皩?duì)PCa骨轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入探究。