血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合檢測對早期結(jié)直腸癌的診斷價值

楊章元，周正菊

(荊州市第一人民醫(yī)院檢驗科,湖北荊州 434000)

結(jié)直腸癌的預(yù)后取決于確診時的疾病階段，在早期時確診，患者5年生存率達90%，當(dāng)確診時已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的患者5年生存率不到10%[1]。結(jié)直腸癌的早期診斷并不容易，因為常規(guī)的體格檢查不能提供靈活的結(jié)腸鏡檢查[2]。另外，柔性結(jié)腸鏡檢查是侵入性的，體驗感差[3]。血清腫瘤標(biāo)志物糖類抗原(CA)19-9和癌胚抗原(CEA)可用于檢測結(jié)直腸癌，但特異度較低[4]。因此，迫切需要找到快速和高度靈敏的結(jié)直腸癌篩查的最佳標(biāo)志物。WANG等[5]發(fā)現(xiàn)血清外泌體中miR-125a-3p是早期結(jié)直腸癌的潛在標(biāo)志物。HOSSEINI等[6]發(fā)現(xiàn)，miR-192和miR-223可作為新型非侵入性生物標(biāo)志物用于結(jié)直腸癌患者的早期發(fā)現(xiàn)和風(fēng)險評估。但是，對于血清外泌體miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合診斷早期結(jié)直腸癌的診斷效能相關(guān)研究鮮見報道?；诖耍狙芯恐荚谔接懷逋饷隗w中miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合檢測對早期結(jié)直腸癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2018年10月至2020年3月本院收治的早期結(jié)直腸癌患者120例作為腫瘤組，其中男63例，女57例；平均年齡(51.34±22.50)歲。選取結(jié)直腸良性疾病患者120例作為良性組，其中男59例，女61例；平均年齡(53.51±20.06)歲。本研究納入的早期結(jié)直腸癌患者均按照《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2017年版)》[7]明確診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)過相應(yīng)的藥物治療者；(2)心、肝、腎功能嚴(yán)重受損者；(3)長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；(4)精神疾病者；(5)同時患有其他癌癥者。良性組包括結(jié)腸慢運輸型便秘40例，直腸肛管周圍膿腫31例，脾曲綜合征28例，乙狀結(jié)腸冗長癥21例。納入2018年10月至2020年3月本院接受體檢的體檢健康者120例作為對照組，其中男60例，女60例；平均年齡(55.03±21.47)歲。各組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲本院倫理委員會批準(zhǔn)，且受試者均簽署知情同意書。

1.2血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的測定 采集早期結(jié)直腸癌患者、結(jié)直腸良性疾病患者和體檢健康者的肘前靜脈血15 mL。通過北京普利萊基因技術(shù)有限公司的體液外泌體提取試劑(貨號：C1273-10)抽取血清外泌體。通過北京百靈克生物科技有限責(zé)任公司的RNA小量提取試劑盒(貨號：R2052)抽取外泌體中的總RNA。通過廣州市齊云生物技術(shù)有限公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號：205111)進行cDNA第一鏈的合成。通過北京伊諾凱科技有限公司的SYBR(貨號:S5193-20RXN-20RXN)進行實時熒光定量PCR。

2 結(jié) 果

2.13組受試者血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相對表達量 血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相對表達量在腫瘤組、良性組和對照組中比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組受試者血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相對表達量

2.2腫瘤組與良性組血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的診斷價值 miR-125a-3p的AUC為0.91(95%CI：0.873 1～0.954 4)，miR-125a-3p的截斷值為1.601時，其診斷靈敏度為92%，特異度為92%；miR-192的AUC為0.90(95%CI：0.860 7～0.949 6)，miR-192的截斷值為0.851 2時，其診斷靈敏度為92%，特異度為91%；miR-223的AUC為0.91(95%CI：0.864 7～0.951 4)，miR-223的截斷值為1.134時，其診斷靈敏度為91%，特異度為92%。

2.3腫瘤組與對照組血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的診斷價值 miR-125a-3p的AUC為0.96(95%CI：0.928 7～0.987 1)，miR-125a-3p的截斷值為1.140時，其診斷靈敏度為99%，特異度為92%；miR-192的AUC為0.95(95%CI：0.918 9～0.985 4)，miR-192的截斷值為0.530 7時，其診斷靈敏度為99%，特異度為93%；miR-223的AUC為0.98(95%CI：0.955 4～0.998 9)，miR-223的截斷值為0.552 8時，其診斷靈敏度為97%，特異度為94%。

2.4血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合檢測診斷早期結(jié)直腸癌 患早期結(jié)直腸癌者為真陽性，未患早期結(jié)直腸癌者為真陰性，以miR-125a-3p的截斷值為1.601、miR-192的截斷值為0.851、miR-223的截斷值為1.134為診斷界限，三者均滿足則為聯(lián)合診斷陽性，反之則為聯(lián)合診斷陰性。血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合檢測對早期結(jié)直腸癌的診斷靈敏度為95%(114/120)，特異度為92%(221/240)，準(zhǔn)確度為93%(335/360)。見表2。

表2 血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合檢測診斷早期結(jié)直腸癌(n)

3 討 論

結(jié)直腸癌是全球范圍內(nèi)與癌癥死亡相關(guān)的主要原因之一[1]。診斷病理狀況的系統(tǒng)方法可能有助于結(jié)直腸癌早期患者的檢出，從而降低病死率。糞便潛血試驗和柔性乙狀結(jié)腸鏡檢查可在一定程度上降低結(jié)直腸癌的病死率[8]。但是，這些技術(shù)具有固有的局限性。糞便潛血試驗的檢測靈敏度相當(dāng)?shù)停嵝砸覡罱Y(jié)腸鏡檢查對患者是侵入性的，讓患者感到非常不舒服。CA19-9和CEA作為腫瘤標(biāo)志物，已被廣泛用于檢測多種癌癥，包括結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌和胃癌[9]。但是，這些標(biāo)志物對結(jié)直腸癌檢測的靈敏度較低，尤其是在疾病的早期階段。因此，需要找到用于結(jié)直腸癌的特異性診斷標(biāo)志物，以便快速、非侵入性和高度靈敏地篩選出患者。在本研究中，對受試者血清外泌體中總RNA進行提取，通過實時熒光定量PCR法和ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223聯(lián)合檢測診斷早期結(jié)直腸癌的靈敏度為95%，特異度為92%，準(zhǔn)確度為93%。

血清中的外泌體是多囊體與細胞膜融合后釋放到細胞外環(huán)境中的小膜囊泡(30～100 nm)[10]。據(jù)報道，外泌體含有從親本細胞中選擇性富集的蛋白質(zhì)和RNA(特別是小的非編碼RNA)[11]。外泌體外膜可防止RNA在體內(nèi)循環(huán)時被降解，因此，外泌體RNA有可能被用作癌癥的預(yù)后和預(yù)測性生物標(biāo)志物[12]。研究者逐漸發(fā)現(xiàn)血漿中的許多外泌體RNA可作為各種腫瘤類型的診斷、預(yù)后甚至是治療性的生物標(biāo)志物[13-14]。在本研究中，腫瘤組、良性組和對照組血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相對表達量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤組與良性組血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223診斷的靈敏度分別為92%、92%、91%，特異度分別為92%、91%、92%。腫瘤組與對照組血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223診斷的靈敏度分別為99%、99%、97%，特異度分別為92%、93%、94%。因此，血清中的miRNA，尤其是包裹有外泌體的miRNA，可能有助于結(jié)直腸癌的診斷。據(jù)報道，與外泌體無關(guān)的血清或血漿miRNA對核糖核酸酶A的治療顯示出不同的穩(wěn)定性[15]。這表明外泌體miRNA更適合作為診斷性生物標(biāo)志物，因為它們在血清或血漿中的穩(wěn)定性較高。

綜上所述，血清外泌體中miR-125a-3p、miR-192、miR-223檢測可作為診斷早期結(jié)直腸癌的潛在標(biāo)志物。