老年高血壓合并IGT患者血清CRP和NF-κB蛋白水平的變化

盧躍 陳群 夏奇奐 杜斌 (浙江省榮軍醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，浙江 嘉興 314000)

原發(fā)性高血壓可合并多種代謝紊亂，如糖代謝異常、血脂異常及高尿酸血癥等，其中以糖耐量減低(IGT)常見〔1,2〕。臨床調(diào)查顯示，原發(fā)性高血壓患者30%～50%伴不同程度IGT，若不采取及時(shí)有效的診斷和治療可進(jìn)展為糖尿病，且明顯增加各種心血管疾病發(fā)生率和病死率〔3,4〕。炎癥在高血壓發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中的作用越來越明顯，其中C反應(yīng)蛋白(CRP)是主要的促炎細(xì)胞因子之一〔5〕。核因子(NF)-кB屬于活躍性較高的轉(zhuǎn)錄因子，在多種炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子基因的表達(dá)調(diào)控中均有積極參與作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是人體正常生命活動(dòng)中的必要因子〔6〕。本研究旨在探討老年高血壓合并IGT患者血清CRP和NF-κB蛋白水平的變化。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇浙江省榮軍醫(yī)院于2018年1～12月收治的老年原發(fā)性高血壓患者55例，其中單純高血壓28例(單純組)，高血壓合并IGT患者27例(合并組)。依據(jù)《中國高血壓防治指南2010》中關(guān)于原發(fā)性高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)制定IGT診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合高血壓和IGT診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡60～80歲；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①高血壓急癥、繼發(fā)性高血壓及應(yīng)激性高血糖；②合并心、肺、肝、腎嚴(yán)重異常者；③自身免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病及造血系統(tǒng)疾病者；④精神疾病者。單純組男15例，女13例；年齡61～80歲，平均(68.03±4.72)歲；病程3～23年，平均(12.83±3.45)年。合并組男12例，女15例；年齡62～79歲，平均(69.32±5.16)歲；高血壓病程3～21年，平均(13.02±3.61)年。另選擇我院同期健康體檢者25例為正常組，其中男13例，女12例；年齡60～80歲，平均(68.73±5.14)歲。各組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2血壓監(jiān)測(cè)方法及診斷標(biāo)準(zhǔn) 選擇臺(tái)式水銀柱血壓計(jì)對(duì)右肱動(dòng)脈血壓進(jìn)行測(cè)量，依據(jù)Korotkoff 5期法計(jì)算血壓讀數(shù)的3次平均值作為最終數(shù)據(jù)，收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg，可確診為高血壓。

1.3血糖檢測(cè)及葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT) 受試者晨起空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取受試者靜脈血進(jìn)行血糖測(cè)定，記錄空腹血糖值。然后口服75 g葡萄糖靜待2 h 后，再次抽取靜脈血測(cè)定血糖，記錄餐后2 h血糖值。其中以空腹血糖≥7.0 mmol/L或OGTT 2 h血糖≥11.1 mmol/L確診為糖尿?。黄渲幸钥崭寡?5.6 mmol/L且OGTT 2 h血糖<7.8 mmol/L為正常；其中以空腹血糖<5.6 mmol/L且7.8≤OGTT 2 h血糖≤11.0 mmol/L為糖耐量減低。

1.4免疫組化法測(cè)定NF-κB表達(dá) 取受試者外周靜脈血3 ml，取乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝的外周血，采用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后，取有核細(xì)胞2×105個(gè)進(jìn)行細(xì)胞固定和穿透，重懸于200 μl細(xì)胞穿透液體中，加入NF-κB(美國Santa Cruz公司)抗體，以免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)NF-κB表達(dá)，由同一病理科人員嚴(yán)格依據(jù)北京中杉金橋生物公司免疫組織化學(xué)SP法試劑盒檢測(cè)，以已知抗體陽性標(biāo)本作為陽性對(duì)照，且以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.5血清CRP水平測(cè)定 取受試者外周靜脈血3 ml，以離心半徑10 cm、2 500 r/min離心10 min，取上清液，采用免疫散射比濁法測(cè)定血清CRP水平，檢測(cè)儀器為美國德靈BN Ⅱ型全自動(dòng)特定蛋白分析儀及配套試劑。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組收縮壓、舒張壓、空腹血糖和餐后2 h血糖比較 單純組和合并組收縮壓和舒張壓顯著高于正常組(P<0.05)；而單純組和合并組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。合并組餐后2 h血糖顯著高于單純組和正常組(P<0.05)；而單純組和正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各組空腹血糖比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組收縮壓、舒張壓、空腹血糖和餐后2 h血糖變化比較

2.2各組NF-κB陽性表達(dá)率比較 單純組和合并組NF-κB陽性表達(dá)率〔(25.72±8.12)%、(38.28±11.03)%〕顯著高于正常組〔(11.17±3.62)%〕，合并組顯著高于單純組(P<0.05)，3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=69.886，P<0.05)。見圖1。

圖1 NF-κB陽性表達(dá)(免疫組化，×200)

2.3各組血清CRP水平比較 單純組和合并組血清CRP水平〔(8.64±2.13)、(13.81±3.92)mg/L〕顯著高于正常組〔(3.14±0.98)mg/L〕，合并組顯著高于單純組(P<0.05)。3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=104.87，P<0.05)。

2.4相關(guān)性分析 高血壓合并IGT患者餐后2 h血糖與NF-κB和CRP呈線性正相關(guān)(r=0.785、0.714，均P<0.05)；NF-κB與CRP呈線性正相關(guān)(r=0.723,P<0.05)。

3 討 論

近年來關(guān)于糖尿病發(fā)病的炎癥學(xué)說越來越受到重視，并認(rèn)為糖尿病是全身慢性低度炎癥性疾病及自然免疫系統(tǒng)激活的炎癥性疾病。而其中糖尿病炎癥學(xué)說提出了關(guān)于糖尿病及IGT發(fā)病機(jī)制尤為重要。IGT是糖尿病的前期階段，而糖尿病轉(zhuǎn)化為大血管疾病的危險(xiǎn)性增加為其危害性表現(xiàn)。臨床調(diào)查顯示，原發(fā)性高血壓約50%患者會(huì)伴不同程度胰島素抵抗，而其中胰島素抵抗示機(jī)體對(duì)胰島素處理葡萄糖能力下降，且OGTT能夠發(fā)現(xiàn)糖耐量減低〔7〕。近年來研究發(fā)現(xiàn)，亞臨床慢性炎癥反應(yīng)可能是糖耐量減低及胰島素抵抗發(fā)生的重要因素〔8〕。

NF-κB主要是由兩個(gè)亞基組成的一種DNA結(jié)合蛋白，許多刺激因子如LPS、病毒蛋白、氧自由基、紫外線輻射及炎癥細(xì)胞因子等均可使NF-κB發(fā)生磷酸化而處于一種活化狀態(tài)〔9〕。而其中活化的NF-κB二聚體轉(zhuǎn)入胞核，與DNA的κB反應(yīng)元件結(jié)合，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附因子、免疫受體、腫瘤壞死因子、集落刺激因子及白細(xì)胞介素等靶基因的表達(dá)，且與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖和炎癥反應(yīng)等相關(guān)〔10〕。NF-κB主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞和外周血單個(gè)細(xì)胞核，主要參與多種細(xì)胞因子及細(xì)胞介質(zhì)基因的表達(dá)調(diào)控和介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。NF-κB被激活后能夠與具有κB序列的基因結(jié)合，從而調(diào)控相應(yīng)基因的表達(dá)，進(jìn)一步參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡及免疫調(diào)節(jié)和炎癥等過程〔11〕。CRP與白細(xì)胞介素-6和腫瘤壞死因子-α共同作用可引起胰島素抵抗，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、內(nèi)皮功能紊亂、血糖升高及脂質(zhì)代謝紊亂〔12～14〕。CRP可能導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加重而減輕組織細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性〔15，16〕。IGT狀態(tài)下低度炎癥機(jī)制尚未完全闡明。IGT狀態(tài)下主要以胰島素抵抗為中心的多種代謝異常可導(dǎo)致氧化應(yīng)激增加，引發(fā)一系列促炎反應(yīng)，促使CRP增加〔17，18〕。

綜上，老年原發(fā)性高血壓合并IGT患者NF-κB和CRP表達(dá)上升，且與餐后2 h血糖呈線性正相關(guān)，NF-κB與CRP呈線性正相關(guān)。