腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型的影響

胡還甫，阮 斌，鄒 進(jìn)，李習(xí)平

（岳陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，老年健康養(yǎng)護(hù)岳陽市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，岳陽 414000）

腫痛巴布膏系民間驗(yàn)方，由血三七、血當(dāng)歸、八里麻、續(xù)斷加工做成巴布膏，具有舒筋活血，消腫止痛的功效，常用于治療閉合性軟組織損傷?，F(xiàn)將其對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型的影響實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品

1.1.1 受試品 腫痛巴布膏，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要制成3 種規(guī)格，分別為 12.96 g 生藥/片，6.48 g 生藥/片，3.24 g 生藥/片，批號(hào)：20180301，有效期至 2019 年9月，由湖南省中醫(yī)藥科技發(fā)展總公司提供。

1.1.2 陽性對(duì)照藥 扶他林軟膏，由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：X8109，有效期至2019年8月29日。適應(yīng)癥：用于緩解肌肉，軟組織和關(guān)節(jié)中度疼痛。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠72只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量 180.7～217.7g，動(dòng)物合格證號(hào)：No.43004700007877，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004。

1.3 主要試劑 前列腺素E2（PGE2）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（美國RB公司，批號(hào)：201802，有效期至2019年8月）。

1.4 主要儀器 MR-96A酶標(biāo)儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；DK-600B電熱恒溫水槽（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；S10型手提式高速分散器（上海新芝）；軟組織打擊器（自制）；DL-5M型多管低速冷凍離心機(jī)（長沙平凡儀器儀表有限公司）；AR-109型電子天平（康市艾瑞貿(mào)易有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模與分組 SD大鼠按性別體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，每組12只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、腫痛巴布膏低（0.35 g生藥/只）、中（0.70 g生藥/只）、高（1.40g生藥/只）劑量組和扶他林軟膏組（0.20g/只）。造模前給大鼠右腿脫毛，用2%戊巴比妥鈉按40 mg/kg劑量腹腔注射將大鼠麻醉，固定于軟組織打擊器上，右腿外展固定，于右小腿中部外側(cè)軟組織標(biāo)記定位，將打擊錘拉至約16 cm高度，松開打擊錘，自由落下，連擊7下。打擊后肉眼即見皮膚腫脹、瘀血，以無皮膚破裂為標(biāo)準(zhǔn)，造模當(dāng)天開始給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥7 d，模型對(duì)照組給予空白基質(zhì)[1-2]?？瞻讓?duì)照組大鼠只接受脫毛和麻醉，給藥期間不給藥但進(jìn)行包扎處理。造模前和造模后1 h以及給藥期間每天測(cè)定損傷標(biāo)記處的周長；分別于給藥后2、4、7 d給藥后1 h每組各取4只大鼠處死，進(jìn)行損傷癥狀指數(shù)評(píng)分，測(cè)定損傷組織中PGE2的含量，進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)檢查[3-4]。

2.2 檢測(cè)指標(biāo)

2.2.1 小腿周長的測(cè)定 造模前和造模后1 h以及給藥期間每天測(cè)定損傷標(biāo)記處的周長。

2.2.2 損傷癥狀指數(shù) 每組大鼠分別在造模后2、4、7 d 各取 4 只大鼠，采血后二氧化碳（CO2）麻醉處死，觀察傷肢腫脹和瘀斑等癥狀表現(xiàn)，并分級(jí)評(píng)分。1）皮下瘀血：多量塊狀計(jì)2分，少量點(diǎn)狀計(jì)1分，無瘀血者計(jì)0分。2）肌肉腫脹：明顯腫脹計(jì)2分，稍有腫脹計(jì)1分，無腫脹者計(jì)0分。3）皮膚顏色：紫暗色深計(jì)2分，暗紅色淺計(jì)1分，色澤正常計(jì)0分。計(jì)算每只動(dòng)物的總評(píng)分[5]。

2.2.3 PGE2含量測(cè)定 取打擊中心部位肌肉組織，生理鹽水漂洗干凈，濾紙吸干水分，稱取肌肉組織約0.5 g，加入9倍體積冰生理鹽水后，于高速分散器中粉碎，以2 500 r/min 4℃離心15 min，離心半徑為225 mm，收集上清液，采用PGE2 ELISA試劑盒檢測(cè)各組標(biāo)本PGE2含量[6-8]。

2.2.4 組織形態(tài)學(xué)檢查 截下已經(jīng)切除少量肌肉的整支右腿，置10%甲醛溶液內(nèi)浸泡。切取傷部組織樣本（包括皮膚、皮下組織、肌肉），經(jīng)常規(guī)脫水、包埋、蘇木精-伊紅（HE）染色后，光鏡下觀察，指標(biāo)包括創(chuàng)傷局部皮下組織、肌肉組織等病理表現(xiàn)。

2.3 劑量設(shè)計(jì) 腫痛巴布膏臨床擬用量：每日39 g生藥，根據(jù)體表面積法換算成大鼠等效劑量為3.51 g生藥/kg。本實(shí)驗(yàn)以腫痛巴布膏大鼠等效劑量作為中劑量，另設(shè)低、高劑量，分別為等效劑量的1/2、2 倍，即 1.76 g、7.02 g 生藥/kg。又腫痛巴布膏含量為 12.96 g、6.48 g 生藥/片和 3.24 g 生藥/片，每片面積為7 cm×10 cm，故根據(jù)上述大鼠劑量設(shè)計(jì)，可得具體劑量設(shè)計(jì)見表1，扶他林軟膏組的劑量參照文獻(xiàn)[2，4]。

表1 實(shí)驗(yàn)分組和劑量設(shè)計(jì)Tab.1 Experimental grouping and dose design

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，如符合正態(tài)性和方差齊性，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法；如不符合則多組間比較采用 Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 腫痛巴布膏對(duì)大鼠軟組織損傷模型小腿周長的影響 造模前各組的周長無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，造模后，與空白對(duì)照組比較，其它各組周長顯著增加（P＜0.01），提示大鼠閉合性軟組織腫脹。與模型對(duì)照組比較，給藥第2天腫痛巴布膏低、中、高劑量對(duì)周長無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏中、高劑量能顯著減小模型大鼠小腿的周長（P＜0.05或P＜0.01），提示腫痛巴布膏具有消腫作用。陽性藥扶他林軟膏第4天和第7天能顯著減少大鼠的周長（P＜0.05）。見表 2。

3.2 腫痛巴布膏對(duì)大鼠軟組織損傷模型損傷癥狀指數(shù)的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組損傷癥狀指數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示大鼠閉合性軟組織損傷模型成功。與模型對(duì)照組比較，給藥第2天腫痛巴布膏低、中、高劑量對(duì)損傷癥狀指數(shù)無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏中、高劑量能顯著降低模型大鼠的損傷癥狀指數(shù)（P＜0.05）。陽性藥扶他林軟膏第4天和第7天能顯著減少大鼠的損傷癥狀指數(shù)（P＜0.05）。見表 3。

3.3 腫痛巴布膏對(duì)大鼠軟組織損傷模型腿部肌肉組織勻漿中PGE2含量的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組炎癥因子PGE2的含量顯著增加（P＜0.05）。與模型對(duì)照組比較，給藥第2天腫痛巴布膏低、中、高劑量對(duì)PGE2的含量無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏高劑量能顯著降低模型大鼠的PGE2的含量（P＜0.05）。陽性藥扶他林軟膏第2天、第4天和第7天能顯著降低大鼠的PGE2的含量（P＜0.01 或 P＜0.05）。見表 4。

表2 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型小腿周長的影響（±s）Tab.2Effect of Zhongtong Cataplasms on calf circumference of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表2 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型小腿周長的影響（±s）Tab.2Effect of Zhongtong Cataplasms on calf circumference of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對(duì)照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白對(duì)照組模型對(duì)照組扶他林軟膏組腫痛巴布膏低劑量組腫痛巴布膏中劑量組腫痛巴布膏高劑量組動(dòng)物數(shù)1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2劑量（g生藥/只） 周長（c m）造模前 造模后1 h 第2天 第4天 第7天-5.0±0.1 5.0±0.1 5.1±0.1 5.2±0.2 5.2±0.2-5.0±0.2 6.0±0.2** 6.3±0.2** 6.0±0.3** 5.4±0.1*0.2 0 4.9±0.1 5.9±0.3** 6.1±0.2 5.6±0.4## 5.1±0.1##0.3 5 5.0±0.3 6.0±0.3** 6.2±0.3 5.8±0.2 5.3±0.1 0.7 0 4.9±0.1 5.9±0.4** 6.2±0.2 5.6±0.3# 5.2±0.1#1.4 0 5.0±0.3 6.0±0.4** 6.2±0.3 5.6±0.3# 5.1±0.2##

表3 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型損傷癥狀指數(shù)的影響（±s）Tab.3 Effect of Zhongtong Cataplasms on symptomatic index of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表3 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型損傷癥狀指數(shù)的影響（±s）Tab.3 Effect of Zhongtong Cataplasms on symptomatic index of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 損傷癥狀指數(shù)第2天 第4天 第7天空白對(duì)照組 0 0 0模型對(duì)照組 5.5±0.6*5.0±1.2*1.8±0.5*扶他林軟膏組 5.8±0.5 2.2±0.5#0.2±0.5#腫痛巴布膏低劑量組 5.8±0.5 3.8±0.5 1.5±0.6腫痛巴布膏中劑量組 5.5±1.0 3.0±0.8#0.8±0.5#腫痛巴布膏高劑量組 5.8±0.5 2.5±0.6#0.2±0.5#動(dòng)物數(shù)劑量（g生藥/只）4 4 4 4 4 4- -0.2 0 0.3 5 0.7 0 1.4 0

3.4 腫痛巴布膏對(duì)大鼠軟組織損傷模型病理表現(xiàn)的影響

3.4.1 對(duì)皮下組織病理表現(xiàn)的影響 空白對(duì)照組的皮下組織一直無病理變化；模型對(duì)照組，造模后第2天，皮下組織可見大量紅細(xì)胞，炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，皮下組織可見少量紅細(xì)胞，炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，皮下組織血管充血、出血，間質(zhì)輕度水腫，炎癥程度進(jìn)一步減輕。

腫痛巴布膏低劑量組，給藥后第2天，與模型組情況相似；第4天，可見少量散在紅細(xì)胞，纖維組織增生，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，可見大量紅細(xì)胞，間質(zhì)輕度水腫，炎癥程度進(jìn)一步減輕。

腫痛巴布膏中劑量組，給藥后第2天，可見大量紅細(xì)胞，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天可見少量散在紅細(xì)胞，纖維組織增生，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，纖維組織增生，間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度進(jìn)一步減輕。

腫痛巴布膏高劑量組，給藥后第2天，可見少量紅細(xì)胞，間質(zhì)中少量炎癥細(xì)胞，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，間質(zhì)中少量散在紅細(xì)胞，散在炎癥細(xì)胞，炎癥程度明顯減輕；第7天，皮下組織輕度水腫，間質(zhì)中少量炎性細(xì)胞，炎癥基本恢復(fù)。

扶他林軟膏組，給藥后第2天，可見少量散在紅細(xì)胞，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，可見少量散在紅細(xì)胞，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度明顯減輕；第7天，血管輕度充血，間質(zhì)少量散在炎性細(xì)胞，炎癥程度進(jìn)一步減輕，已經(jīng)基本恢復(fù)。見圖1。

3.4.2 對(duì)肌肉組織病理表現(xiàn)的影響 空白對(duì)照組的肌肉組織一直無病理變化；模型對(duì)照組，造模后第2天，肌肉組織中肌細(xì)胞變性壞死，血管出血，間質(zhì)中大量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，肌細(xì)胞變性，血管出血，間質(zhì)中大量炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，肌細(xì)胞變性，血管出血，間質(zhì)中大量炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度進(jìn)一步減輕。

腫痛巴布膏低劑量組，給藥后第2天，少量肌細(xì)胞變性壞死，間質(zhì)輕度水腫，炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，間質(zhì)輕度水腫，炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，間質(zhì)輕度水腫，炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度進(jìn)一步減輕。

腫痛巴布膏中劑量組，給藥后第2天，少量肌細(xì)胞變性壞死，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤，炎癥程度進(jìn)一步減輕。

表4 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型腿部組織勻漿中PGE2含量的影響（±s）Tab.4 Effect of Zhongtong Cataplasms on the content of PGE2 in the homogenate of leg tissue of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表4 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型腿部組織勻漿中PGE2含量的影響（±s）Tab.4 Effect of Zhongtong Cataplasms on the content of PGE2 in the homogenate of leg tissue of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對(duì)照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白對(duì)照組模型對(duì)照組扶他林軟膏組腫痛巴布膏低劑量組腫痛巴布膏中劑量組腫痛巴布膏高劑量組動(dòng)物數(shù)劑量（g生藥/只）4 4 4 4 4 4 4 1 7.6±5 8.5 4 1 9.9±6 2.9 4 4 1.1± 6 8.1-7 9 0.7±2 9.1* 6 6 8.9±4 5.2* 5 9 1.7± 3 4.7*0.2 0 6 4 2.6±5 8.9## 5 1 3.0±9 2.0## 4 5 1.5± 5 4.1#0.3 5 7 3 2.9±3 6.2 6 3 4.7±7 2.6 5 1 1.6±1 1 7.4 0.7 0 7 1 6.8±5 2.4 5 6 6.7±8 1.6 4 8 9.1± 7 7.0 1.4 0 7 1 5.6±7 5.7 5 5 1.4±7 3.9# 4 5 5.3± 8 0.6#P G E 2含量（n g/L）第2天 第4天 第7天-

圖1 皮下組織病理切片圖（HE，×200）Fig.1 Subcutaneous histopathological section（HE，×200）

腫痛巴布膏高劑量組，給藥后第2天，間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，無明顯病理變化，炎癥程度明顯有所減輕；第7天，無明顯病理變化，炎癥基本恢復(fù)。

扶他林軟膏組，給藥后第2天，少量肌細(xì)胞變性壞死，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，炎癥程度最為嚴(yán)重；第4天，無明顯病理變化，炎癥程度明顯減輕；第7天，肌肉組織無明顯病理變化，炎癥程度進(jìn)一步減輕，已經(jīng)基本恢復(fù)。見圖2。

3.5 腫痛巴布膏對(duì)大鼠軟組織損傷模型病理評(píng)分的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組病理評(píng)分顯著增加（P＜0.05）。與模型對(duì)照組比較，給藥第 2 天腫痛巴布膏低、中、高劑量對(duì)病理評(píng)分無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏高劑量能顯著降低模型大鼠的病理評(píng)分（P＜0.05），陽性藥扶他林軟膏第2天、第4天和第7天能顯著降低大鼠的病理評(píng)分（P＜0.01 或 P＜0.05）。見表 5。

圖2 肌肉組織病理切片圖（HE，×200）Fig.2 Pathological section of muscle tissue（HE，×200）

表5 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型病理評(píng)分的影響（±s）Tab.5 Effect of Zhongtong Cataplasms on pathological score of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表5 腫痛巴布膏對(duì)大鼠閉合性軟組織損傷模型病理評(píng)分的影響（±s）Tab.5 Effect of Zhongtong Cataplasms on pathological score of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別動(dòng)物數(shù)劑量（g生藥/只）空白對(duì)照組模型對(duì)照組扶他林軟膏組腫痛巴布膏低劑量組腫痛巴布膏中劑量組腫痛巴布膏高劑量組4 4 4 4 4 4病理評(píng)分（分）第2天 第4天 第7天- 1.5±1.0 1.8±1.5 1.8±1.5- 1 8.5±3.3*1 2.5±1.3*9.0±1.8**0.2 0 1 5.0±2.2#1 0.0±0.8##4.8±1.0##0.3 5 1 8.2±2.2 1 1.8±0.5 8.2±1.9 0.7 0 1 7.0±1.4 1 1.8±0.5 7.5±1.3 1.4 0 1 6.2±1.3 1 0.8±1.0#5.5±0.6#

4 結(jié)論

上述結(jié)果表明，腫痛巴布膏中、高劑量能顯著減小閉合性軟組織損傷模型大鼠腫脹小腿的周長和減少損傷癥候指數(shù)，腫痛巴布膏高劑量能顯著減少閉合性軟組織損傷模型大鼠的PGE2的含量和改善組織形態(tài)學(xué)，腫痛巴布膏對(duì)閉合性軟組織損傷模型大鼠具有明顯的改善作用。