ELISA法對(duì)孕前、孕中婦女及新生兒維普創(chuàng)免疫水平研究

王朝元，尹玉瑩，魏天河，曾強(qiáng)，王鳴 ，王博

(1 中南民族大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，武漢430074；2 武漢武生醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司，武漢 430073；3 中國醫(yī)科大學(xué) 附屬盛京醫(yī)院，沈陽 110004)

“Vptrmm”為水痘(varicella)、百日咳 (pertussis)、破傷風(fēng) (tetanus)、風(fēng)疹(rubella)、麻疹(measles)和腮腺炎(mumps)六種傳染病的英文縮寫. Vptrmm簡稱“維普創(chuàng)”. 六種疾病均嚴(yán)重危害人類健康和生命安全，發(fā)病急、傳染性強(qiáng)，主要累及兒童，部分累及孕產(chǎn)婦，會(huì)造成新生兒出生體重過低、出生缺陷、早產(chǎn)、流產(chǎn)、死亡以及孕產(chǎn)婦死亡等嚴(yán)重后果. 目前，疫苗接種是控制上述傳染病最重要、最有效、最經(jīng)濟(jì)的手段，而抗體水平調(diào)查是評(píng)價(jià)預(yù)防接種效果最為科學(xué)、客觀、真實(shí)的指標(biāo)，同時(shí)也是衡量免疫實(shí)施策略是否有效的評(píng)價(jià)指標(biāo)[1]. 與接種率相比，接種疫苗后產(chǎn)生的血清學(xué)抗體水平調(diào)查更能客觀反映疫苗實(shí)際的保護(hù)能力[2].

我國從二十世紀(jì)60年代初引進(jìn)麻疹疫苗至今，已建立了完善的預(yù)防接種制度，除了對(duì)適齡兒童進(jìn)行預(yù)防接種外，還建立了成人預(yù)防接種門診以滿足成人的接種需求. 為保護(hù)自身健康及胎兒健康，部分育齡期婦女會(huì)選擇在生育前進(jìn)行相關(guān)疫苗的接種. 為了解孕前及孕期婦女“維普創(chuàng)”抗體水平及免疫屏障建立情況，為制定相應(yīng)的疫苗干預(yù)策略和措施提供科學(xué)的數(shù)據(jù)，本研究對(duì)在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院進(jìn)行孕前檢查和孕中產(chǎn)前檢查的婦女人群及新生兒進(jìn)行了“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體水平檢測(cè).

1 材料與方法

1.1 材料

血液采自到沈陽盛京醫(yī)院進(jìn)行孕前、產(chǎn)前育齡(19～46周歲)檢查的婦女及新生兒(1～30 d).

1.2 采樣方法

由經(jīng)過統(tǒng)一培訓(xùn)的專業(yè)人員抽取待檢對(duì)象3～5 mL靜脈血，分離血清，置-20 ℃凍存?zhèn)溆?

1.3 血清學(xué)檢測(cè)方法

所有標(biāo)本統(tǒng)一送至具備資質(zhì)的第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)(武漢武生醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司)檢測(cè). 采用武漢生命科技股份有限公司IgG抗體酶聯(lián)免疫試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作.

“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體水平定量檢測(cè)結(jié)果的判定按照表1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[3].

表1 維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體水平定量檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Standard for quantitative analysis of IgG level of Vptrmm

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2010軟件和SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn).

2 結(jié)果

2.1 待檢人群“維普創(chuàng)”抗體總陽性率和抗體滴度

共檢測(cè)血清樣本610人份，其中孕前婦女標(biāo)本138人份，孕中婦女標(biāo)本300人份，新生兒標(biāo)本172人份. VZV、PT、TT、RV、MV和MuV IgG抗體總陽性率分別為：75.08%(458/610)、57.38%(350/610)、43.28%(264/610)、79.51%(485/610)、90.66(553/610)和76.72%(468/610),以上IgG抗體中位數(shù)和GMC(幾何平均濃度)見表2.

表2 孕前、孕中婦女及新生兒“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體檢測(cè)結(jié)果Tab. 2 Detection results of IgG antibodies in pre-pregnant, pregnant women and newborns

2.2 不同人群“維普創(chuàng)”IgG抗體陽性率比較

138人份孕前婦女標(biāo)本中，VZV、PT、TT、RV、MV、MuV IgG抗體陽性率分別是83.33%、70.29%、44.20%、86.23%、97.10%和77.54%；300人份孕中婦女標(biāo)本中，VZV、PT、TT、RV、MV和MuV IgG抗體陽性率分別是83.67%、59.00%、47.33%、91.33%、95.67%和82.67%；172人份新生兒標(biāo)本中，VZV、PT、TT、RV、MV和MuV IgG抗體陽性率分別是53.49%、44.19%、35.47%、53.49%、76.74%和65.70%.

如表3所示，孕前婦女與孕中婦女PT IgG抗體陽性率顯著性差異(P<0.05)，VZV、TT、RV、MV和MuV IgG抗體陽性率無顯著性差異(P>0.05). 表4顯示，孕前婦女與新生兒VZV、PT、RV、MV和MuV IgG抗體陽性率顯著性差異(P<0.05)，TT IgG抗體陽性率無顯著性差異(P>0.05). 孕中婦女與新生兒VZV、PT、TT、RV、MV和MuV IgG抗體陽性率均有顯著性差異(P<0.05)(表5).

表3 孕前與孕中婦女“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體陽性率比較Tab.3 Comparison of positive rates of IgG antibodies between pre-pregnant and pregnant women

表4 孕前婦女與新生兒“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體陽性率比較Tab.4 Comparison of positive rate of IgG antibodies between pre-pregnant women and newborns

表5 孕中婦女與新生兒“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體陽性率比較Tab.5 Comparison of positive rate of IgG antibodies between pregnant women and newborns

2.3 不同人群“維普創(chuàng)”IgG抗體水平比較

根據(jù)上述IgG抗體檢測(cè)項(xiàng)判定標(biāo)準(zhǔn)，此次檢測(cè)人群“維普創(chuàng)”六項(xiàng)抗體除VZV IgG抗體以中、高水平分布為主外，其他均以低、中抗體水平分布. 且TT IgG抗體在本研究檢測(cè)人群中未檢測(cè)到高水平，RV IgG抗體在孕中婦女和新生兒中未檢測(cè)到高水平，MuV IgG抗體在孕前婦女未檢測(cè)到高水平(表6).

表6 孕前婦女、孕中婦女和新生兒“維普創(chuàng)”六項(xiàng)IgG抗體水平比較Tab.6 Comparison of IgG antibody level for"Vptrmm" in pre-pregnant,pregnant women and newborns

3 討論

水痘是由VZV引起的急性傳染性疾病，病毒能通過飛沫和接觸傳播，發(fā)病以2～10歲兒童多見. 但近幾年，成人水痘患者的數(shù)量有增加的趨勢(shì)[4]，隨著成年人水痘發(fā)病率的增高，育齡期婦女的發(fā)病率也相應(yīng)增加. 本研究結(jié)果顯示，被檢人群育齡期婦女(孕前婦女及孕中婦女共檢查438人，366人為陽性)VZV抗體陽性率為83.56%(低于長春孕婦的88.52%的陽性率[5])，即16.44%的育齡期婦女為易感人群. 建議育齡期婦女在妊娠前進(jìn)行水痘病毒VZV抗體水平的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)抗體陰性后，及時(shí)補(bǔ)種水痘減毒活疫苗，以保護(hù)自身及新生兒免于發(fā)病，提高出生人口質(zhì)量.

20世紀(jì)80年代，我國百日咳發(fā)病水平控制在低點(diǎn)后，陸續(xù)出現(xiàn)百日咳發(fā)病反彈的報(bào)道，研究學(xué)者將該現(xiàn)象稱為“百日咳再現(xiàn)”(pertussis re-emerge)[6-7]. 美國自20世紀(jì)80年代以來，百日咳發(fā)病率也逐年上升，2010年高達(dá)27000例，是1976年的26倍[8]. 本研究顯示，被檢人群中育齡期婦女PT IgG抗體陽性率僅為62.56%(274/438)，且多以低水平抗體為主，難以起到免疫保護(hù)作用. 對(duì)孕前和孕中婦女PT抗體陽性率對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，孕期婦女PT IgG抗體陽性率明顯低于孕前婦女，提示孕期婦女不能通過高水平的母?jìng)骺贵w為嬰兒提供足夠的免疫保護(hù). 因此，建議對(duì)育齡期婦女進(jìn)行百日咳疫苗接種，以預(yù)防嬰兒和成人發(fā)病.

人群中TT抗體水平達(dá)到保護(hù)水平的人數(shù)若超過總?cè)藬?shù)的70%，可以有效控制該疾病流行[9]. 本次研究的438例育齡婦女中，203人為陽性，TT抗體的陽性率為46.35%(203/438),高于河北省報(bào)道的30.72%[10]，但育齡期婦女中仍有53.65%存在發(fā)病風(fēng)險(xiǎn). 而且在被檢人群中，沒有檢測(cè)到TT高水平抗體，抗體陽性者中大部分人抗體水平都在低水平. 有研究表明，接種破傷風(fēng)類毒素是預(yù)防破傷風(fēng)最經(jīng)濟(jì)、最有效的方法[11]，因此，給育齡婦女接種破傷風(fēng)疫苗勢(shì)在必行，因?yàn)榧訌?qiáng)孕期婦女預(yù)防接種是提高自身抗體及胎兒母?jìng)骺贵w水平的根本措施. 同時(shí)，有必要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)育齡期婦女TT抗體水平的監(jiān)測(cè)，制定育齡期婦女可行性免疫程序，從而使健康人群總體抗體水平維持在較高水平，降低發(fā)病率.

風(fēng)疹本身的危害并不可怕，可怕的是孕期婦女感染風(fēng)疹后所帶來的危害----先天性風(fēng)疹綜合征(Congenital rubella syndrome, CRS). 因此在育齡期婦女中開展風(fēng)疹病毒的血清學(xué)監(jiān)測(cè)尤為重要. 本研究結(jié)果中，438名育齡人群RV IgG 抗體陽性率為 89.73%(393/438)，基本達(dá)到相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的80%～100%的陽轉(zhuǎn)率水平[12]，但仍有10.22% 的易感者. 同時(shí)，必須注意到在被檢人群中，RV IgG抗體陽性者中大部分人抗體水平較低. 目前風(fēng)疹及CRS的預(yù)防主要以預(yù)防接種為主. 因此，為降低風(fēng)疹及CRS 發(fā)病帶來的危害，建議在育齡期婦女中開展RV抗體水平監(jiān)測(cè)，提早對(duì)RV抗體陰性者進(jìn)行疫苗接種，積極開展孕產(chǎn)婦及新生兒的RV IgG的檢測(cè)，對(duì)可疑母嬰進(jìn)行連續(xù)追蹤監(jiān)測(cè)，提早制定相應(yīng)的防治方案.

研究中438名育齡人群中，血清MV IgG抗體陽性率96.12%(421/438)，與國內(nèi)相關(guān)研究報(bào)道基本一致，已達(dá)到全國消除麻疹>95%的抗體保護(hù)率水平[13]，但抗體滴度以中低水平為主. 麻疹疫苗提供的免疫保護(hù)持續(xù)時(shí)間并不固定，與自然感染麻疹病毒產(chǎn)生的免疫力相比，持續(xù)時(shí)間較短. 疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平會(huì)隨著時(shí)間推移而衰減，此過程不易被察覺. 母?jìng)骺贵w的保護(hù)力主要和母親體內(nèi)麻疹抗體水平、胎盤的運(yùn)輸效率以及新生兒體內(nèi)麻疹抗體的衰減速度有關(guān)[14]，這種抗體一般在嬰兒6～9月齡的時(shí)候消失. 耿勝競(jìng)等[15]對(duì)孕產(chǎn)婦和其所生新生兒麻疹抗體水平相關(guān)性進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，孕婦的麻疹抗體陽性率和抗體滴度及其所娩新生兒的麻疹抗體陽性率和抗體含量高度正相關(guān). 本研究結(jié)果提示，加強(qiáng)育齡期人群的麻疹疫苗預(yù)防接種工作，從而控制這一人群本身發(fā)病，還能使新生兒的麻疹抗體處于較高水平，可以維持免疫保護(hù)作用至初免月齡，從而有效降低8月齡以下嬰兒發(fā)病.

全國2008～2010年腮腺炎病例的流行病學(xué)分析顯示，腮腺炎的發(fā)病年齡主要集中在3～14 歲，腮腺炎的發(fā)病年齡有后延的趨勢(shì)，直接威脅到育齡期婦女. 本次研究結(jié)果顯示，育齡期婦女腮腺炎抗體陽性率為81.05%(355/438)，明顯高于湖北省(61.80%)和深圳市(75.1%)的抗體陽性率水平，但低于長春市(82.1%)[16]. 令人擔(dān)憂的是，雖然抗體陽性率維持在較高水平，但均以中、低抗體水平為主. 因此，為控制腮腺炎的爆發(fā)流行，保護(hù)孕期婦女及新生兒健康，加強(qiáng)對(duì)育齡期婦女的血清抗體水平檢測(cè)，對(duì)抗體水平檢測(cè)結(jié)果陰性者進(jìn)行孕前腮腺炎疫苗接種尤其重要.