補陽還五湯對力竭大鼠胃腸功能的影響及其機(jī)制研究

尹瑞欣1 馬騰1 吳曉光2

（1承德醫(yī)學(xué)院公共體育部，河北 承德 067000；2承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，河北 承德 067000）

使運動員的運動潛能發(fā)揮到極致是現(xiàn)代競技體育的要義[1]，運動潛能的挖掘離不開長期超負(fù)荷的訓(xùn)練，受此影響大多數(shù)的運動員長期都處于高強(qiáng)度的運動負(fù)荷之下，但是有報道[2]指出：超負(fù)荷運動會使運動員出現(xiàn)一系列的不良狀態(tài)（如：胃腸功能紊亂等等），并不能提高運動員的運動成績，故尋找合適的方法緩解運動員的疲勞狀態(tài)意義重大。中醫(yī)文化在我國傳承2000余年，認(rèn)為運動性的疲勞與脾虛有關(guān)，脾氣不足使人體運化水谷的能力下降、肢體缺乏生化滋養(yǎng)以致失養(yǎng)、氣體瘀滯阻塞而使胃腸矢氣；補陽還五湯是常見益氣方劑，主治氣虛血瘀之癥，有學(xué)者[3-4]認(rèn)為此方能夠改善腦出血大鼠的預(yù)后，但是有關(guān)補陽還五湯能夠治療運動疲勞而引發(fā)的胃腸功能紊亂鮮有報道，本次研究將求證補陽還五湯對運功性疲勞大鼠胃腸功能的影響，并探討其作用機(jī)制。

一、材料與方法

（一）實驗動物

清潔級SD大鼠48只，北京維通利華有限公司提供（許可證號：SCXK (京)2016-0011）。實驗動物自研究開始飼養(yǎng)于承德醫(yī)學(xué)院動物中心，室內(nèi)溫度21-24℃，濕度40-55%，空氣流通，每日清潔。所有動物在實驗期間均自由飲食水。

（二）實驗儀器與試劑

小動物實驗跑臺（XR-PT-10A），離心機(jī)（L3-800R），UV300/X紫外可見分光光度計，實驗所用試劑盒由武漢博士德生物有限公司提供。

（三）藥劑來源及煎制方法

補陽還五湯（生黃芪120g，當(dāng)歸尾6g，赤芍5g，紅花、川穹、桃仁、地龍各3g）所有藥材均購于同仁堂承德分公司，以水煎制成藥湯。

（四）實驗方法

1.模型的建立、分組、給藥

實驗動物首先在承德醫(yī)學(xué)院動物中心適應(yīng)性喂養(yǎng)1W，以體重為依據(jù)為每只大鼠編訂號碼，再依據(jù)隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)將48只大鼠分為3組，分別為對照組、模型組、給藥組。對照組大鼠不做任何運動，模型組與給藥組大鼠構(gòu)建力竭大鼠模型，將大鼠置于沒有坡度的電動跑臺上，適應(yīng)性訓(xùn)練5min，然后控制跑臺速度在25-30m/min，使大鼠在跑臺上運動至力竭。力竭標(biāo)準(zhǔn)為：大鼠在跑臺上的運動姿勢由蹬地式轉(zhuǎn)換為伏地式，且大鼠在跑臺的末端已無力運動，此時給予光或聲音等刺激也無法使大鼠恢復(fù)運動狀態(tài)，所有大鼠每日進(jìn)行運動，模型構(gòu)建時長為3w。模型構(gòu)建期間，給藥組大鼠在力竭實驗之前灌胃補陽還五湯，劑量50.2 g/kg模型組大鼠灌胃等劑量生理鹽水。

2.標(biāo)本的采集

3W后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，手術(shù)剪剪開大鼠皮毛暴露大鼠腹腔，尋找腹主動脈取血，真空采血管采集血液3ml，上下?lián)u晃使肝素與血液充分混勻，2000r/min離心，收集血漿保存于-40℃冰箱，待行胃動素（MTL）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）活性以及血管活性腸肽（VIP） 活性檢測。

血液標(biāo)本采集完畢，暴露大鼠胸腔，灌注針以心尖為插入點，經(jīng)左心室入升主動脈，剪開右心耳，打開恒流機(jī)，生理鹽水沖洗血液，待肝臟漂洗至無色，更換甲醛灌注，甲醛灌注先快后慢，大鼠灌注起始時劇烈抽搐，灌注結(jié)束時尾部豎起，四肢僵硬視為灌注成功。灌注成功后剪取大鼠胃腸組織，包埋成組織蠟塊，石蠟切片機(jī)制作成厚5um的切片待行HE染色。

3.HE染色觀察大鼠胃腸組織形態(tài)學(xué)改變

切片依次經(jīng)二甲苯透明、梯度酒精脫水、蘇木精漂染核、鹽酸-酒精分化、伊紅漂染細(xì)胞質(zhì)、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。光鏡下觀察大鼠胃腸組織的形態(tài)學(xué)變化。

4.各生化指標(biāo)的檢測

MTL與VIP活性的檢測應(yīng)用放射免疫法，NO的檢測應(yīng)用硝酸還原酶法，NOS的檢測應(yīng)用分光光度法。

（五）統(tǒng)計學(xué)分析

二、結(jié)果

（一）HE染色下各組大鼠胃腸組織的形態(tài)學(xué)觀察

光鏡下觀察正常組大鼠胃腸粘膜細(xì)胞排列均勻，細(xì)胞層數(shù)較厚，粘膜表面未見充血水腫，未見潰瘍灶；模型組胃腸粘膜細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞層數(shù)較薄，大量細(xì)胞脫落，粘膜表面有散發(fā)潰瘍灶；補陽還五湯組胃腸粘膜細(xì)胞排列規(guī)則，表面細(xì)胞脫落減少，充血水腫現(xiàn)象明顯減輕。

（二）各組大鼠MTL、SS 含量與VIP 活性的比較

與對照組大鼠比較，模型組與給藥組大鼠的MTL、NO 含量與VIP 活性上升；與模型組比較，給藥組大鼠的MTL、NO 含量與VIP、NOS活性下降，差異均有意義（P〈0.05）。（詳見表1）

表1 各組大鼠MTL、NO 含量與VIP 活性的比較

三、討論

運動性疲勞也就是運動員在日常的備賽訓(xùn)練中為了提升運動潛能而進(jìn)行超過機(jī)體承受能力的運動負(fù)荷時出現(xiàn)的短暫的運動能力下降的現(xiàn)象，可分為軀體疲勞、心理疲勞、內(nèi)臟疲勞等，胃腸功能的紊亂則屬于內(nèi)臟疲勞范疇。目前，中醫(yī)對于運動性疲勞的機(jī)制研究還未明確，但是大多數(shù)學(xué)者的認(rèn)識都基于共同的一點：氣血的陰陽、臟腑功能的失調(diào)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生復(fù)雜生理變化誘發(fā)了運動性疲勞[5]。運動性疲勞的主要表現(xiàn)為四肢的無力感，屬中醫(yī)學(xué)的“勞倦”范疇；脾是后天之本，脾主四肢，長久的勞倦損傷脾臟。脾主運化，負(fù)責(zé)將胃腸消化吸收的營養(yǎng)運往周身各處以滋養(yǎng)經(jīng)絡(luò)、肌肉、臟腑等等，運動性疲勞損傷脾臟以后失去運化水谷的作用，則會出現(xiàn)納差、腹瀉、腹脹等胃腸表現(xiàn)；脾主升清，“生清”即為脾臟吸收胃腸水谷營養(yǎng)化為氣血以向上供給頭目、心肺、百骸，運動性疲勞導(dǎo)致的脾虛將弱化這一功能，出現(xiàn)泄瀉、消瘦、腹脹的胃腸表現(xiàn)以及精神不振、眩暈等癥狀；故緩解運動性疲勞引發(fā)的胃腸功能失調(diào)應(yīng)從“益氣、活血”為突破口。補陽還五湯是補氣、活血、通絡(luò)的名方，本方中獨重的黃芪[6]能夠通過促進(jìn)蛋白的合成以增加體內(nèi)的血紅蛋白含量增強(qiáng)人體的氧氣運輸能力、減少機(jī)體氧自由基的生成降低脂質(zhì)的過氧化能力、增加糖原的生成調(diào)節(jié)人體的能量代謝等多種機(jī)制增強(qiáng)運動能力；此外，方劑中的當(dāng)歸、地龍通絡(luò)，赤芍、川芎、桃仁、紅花協(xié)同當(dāng)歸尾可活血，故具有治療運動性疲勞引起的胃腸功能失調(diào)的可能性。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為運動性疲勞所誘發(fā)的胃腸功能變化主要與為胃腸運動功能的下降與多種情志因素影響下的消化功能受抑有關(guān)[7]。胃動素[8]是mo細(xì)胞分泌的消化間期（主要作用于復(fù)合運動）激素，能夠加快清除胃腸的消化物以促進(jìn)胃腸的排空速度；血管活性腸(VIP)在人體內(nèi)具有雙重身份，既是一種胃腸激素調(diào)節(jié)消化功能，又是一種神經(jīng)肽類物質(zhì)調(diào)節(jié)血管舒縮，其對胃腸的作用則是抑制消化功能；NOS是NO的前體成分，可促進(jìn)L-精氨酸向NO的轉(zhuǎn)化，NO則可作為一種神經(jīng)遞質(zhì)作用于細(xì)胞膜。在胃腸組織中，VIP[9]作用的發(fā)揮要借助細(xì)胞表面的Gi蛋白，與其結(jié)合后依托鈣離子/鈣調(diào)素（CaM）促進(jìn)NO的生成，發(fā)揮松弛胃部平滑肌延緩消化的作用。在本項研究中，與模型組比較，MTL、NO 含量與VIP、NOS活性下降，提示我們補陽還五湯能夠改善運動型疲勞大鼠胃腸功能下降，其機(jī)制可能與補陽還五湯減少了VIP的生成，進(jìn)而抑制了VIP/NO通路緩解了胃腸平滑肌的松弛狀態(tài)促進(jìn)了胃內(nèi)容的消化。