蜂王漿藥理作用研究進(jìn)展

闞默，王繼鳳，明思彤，劉曉冉，張壯，楊擎，李晶，李娜

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117）

蜂王漿（Royal Jelly,RJ）最初僅被作為一種營養(yǎng)物質(zhì)供給蜜蜂食用，但近年來蜂王漿中復(fù)雜且豐富的活性物質(zhì)引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注[1-3]。自1852年美國的朗斯特羅什第1 次把蜂王漿樣品提交給一位化學(xué)家進(jìn)行分析，至今許多學(xué)者對蜂王漿的化學(xué)成分及營養(yǎng)價(jià)值尤其是藥理和生理作用方面進(jìn)行了廣泛而深入的研究[4]。大量有關(guān)蜂王漿的藥效實(shí)驗(yàn)研究表明，蜂王漿不僅具有營養(yǎng)功能，而且具有一定的藥理作用[5-6]。本文對近幾年蜂王漿及其活性成分在藥理作用方面的研究進(jìn)行綜述。

RJ 是蜜蜂巢中培育幼蟲的青年工蜂（保姆蜂）咽頭腺的分泌物[7-8]，是專供蜜蜂小幼蟲和蜂王食用的漿狀物質(zhì)，它對于蜂王的生長發(fā)育至關(guān)重要[9-10]。RJ 成分復(fù)雜，具有葡萄糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素、天冬氨酸、磷化合物、固醇、凝膠、核酸、微量成分和乙酰膽堿等多種物質(zhì)[11-13]。RJ一般含水量為65%～68%，蛋白質(zhì)為11%～14%，碳水化合物為15%～17%，脂類為6%，其他物質(zhì)為3%[14-16]。中醫(yī)理論認(rèn)為RJ 具有健腦益智、延年益壽、滋補(bǔ)強(qiáng)壯以及益肝健脾等功效[17-18]，主治病后虛弱、小兒營養(yǎng)不良、老年體衰、白細(xì)胞減少癥、遷延性及慢性肝炎、十二指腸潰瘍、支氣管哮喘、糖尿病、血液病、精神病、子宮功能性出血、月經(jīng)不調(diào)、功能性不孕癥及禿發(fā)等疾病[19-21]；現(xiàn)代藥理作用表明RJ 具有抗菌、促進(jìn)傷口愈合、抗氧化、抗衰老、抗癌、抗炎、調(diào)節(jié)免疫功能、抗高血脂、抗高血壓、肝腎保護(hù)和調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)等作用[22-24]。

1 蜂王漿的藥理作用

1.1 抗氧化、衰老作用

Farnam Azad 等[25]研究RJ 對尼古?。∟IC）誘發(fā)的睪丸損傷的影響。結(jié)果表明RJ 處理后，組織MDA含量下降，CAT 水平顯著增加。與NIC 組相比，RJ 給藥組中Bcl-2 的表達(dá)水平顯著升高，而p53 和Caspase-3 蛋白的表達(dá)水平顯著降低。結(jié)果證實(shí)RJ 可有效保護(hù)睪丸免受NIC 引起的氧化損害，起到了對凋亡途徑的預(yù)防和增殖活性的改善。

Wenjing Qiu 等[26]將酶處理的蜂王漿（ERJ）與膠原蛋白混合制備的肽（CP），在體外顯示出更強(qiáng)的抗氧化活性。果蠅用作動(dòng)物模型以研究ERJ-CP 在體內(nèi)的抗衰老作用。ERJ-CP明顯延長了用過氧化氫和百草枯處理過的果蠅的平均壽命，降低果蠅中的丙二醛（MDA）和蛋白質(zhì)羰基（PCO）含量。ERJ-CP 可以上調(diào)總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）和下調(diào)MDA 和PCO的含量。結(jié)果表明，ERJ-CP 在抗氧化和抗衰老方面均起保護(hù)作用。

Nobuaki Okumura 等[27]認(rèn)為衰老與運(yùn)動(dòng)障礙有關(guān)，運(yùn)動(dòng)障礙會降低生活質(zhì)量（QOL）。RJ 用作膳食補(bǔ)充劑，已顯示出多種健康益處，具有在老化過程中改善QOL的潛力。在這項(xiàng)研究中，發(fā)現(xiàn)未經(jīng)酶處理的RJ（NRJ）和經(jīng)酶處理的RJ（ERJ）對老化過程的影響主要集中在運(yùn)動(dòng)功能，通過使用遺傳異質(zhì)（HET）小鼠模型，檢測4個(gè)不同的物理性測試（握力、金屬絲懸掛、單杠和旋轉(zhuǎn)腳架），結(jié)果表明RJ 改善了衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)功能，可能通過調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)功能，在老化過程中改變QOL。

Jiang C M 等[28]探討了蜂王漿蛋白（MRJP）對人胚肺成纖維細(xì)胞（HFL-1）抗衰老作用的研究。HFL-1細(xì)胞分為空白組、MRJP 低、中、高劑量組（0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL）。MRJP 可上調(diào)超氧化物歧化酶-1（SOD1）的表達(dá)，下調(diào)雷帕霉素（MTOR）、連環(huán)蛋白1（CTNNB1）以及腫瘤蛋白p53（TP53）的表達(dá)，結(jié)果表明MRJP 對HFL-1 細(xì)胞有明顯抗衰老作用。

1.2 對神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用

Yongming Pan 等[29]研究RJ 具有潛在的神經(jīng)保護(hù)作用，可以減輕A 毒性，結(jié)果表明RJ 大大降低了血漿總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的含量，以及降低了兔腦中A 的表達(dá)水平。此外，RJ 可以降低表達(dá)水平 位APP 裂解酶-1（BACE1）和晚期糖基化末端受體的合成產(chǎn)品（RAGE）的表達(dá)，并增加低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1（LRP-1）和胰島素降解酶（IDE）的表達(dá)水平。發(fā)現(xiàn)RJ 顯著增加了神經(jīng)元數(shù)量，增強(qiáng)了抗氧化能力，抑制caspase-3 蛋白表達(dá)，并增強(qiáng)神經(jīng)元代謝。數(shù)據(jù)表明RJ 可以降膽固醇水平，調(diào)節(jié)A水平并增強(qiáng)神經(jīng)元代謝，提供臨床前證據(jù)，表明RJ 治療具有保護(hù)神經(jīng)元作用并預(yù)防阿爾茨海默?。ˋD）。

Justyna Pyrzanowska 等[30]長期研究RJ 給藥后老年大鼠的單胺能傳遞，探討RJ 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)的作用，使用HPLC 定量氨基酸（丙氨酸、天冬氨酸、-氨基丁酸、谷氨酸、組氨酸和?；撬幔┰诖竽X區(qū)域（前額葉皮層、海馬、紋狀體和下丘腦）的濃度，并檢查了腎和肝的生化參數(shù)，觀察到 -氨基丁酸濃度降低。結(jié)果表明RJ 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)傳遞起到了積極的作用。

Seymen C M 等[31]研究海馬神經(jīng)元的微管相關(guān)蛋白2（MAP-2）的免疫反應(yīng)性和RJ 在甲狀腺功能減退癥（HT）期間調(diào)節(jié)MAP-2 的潛在作用。假對照組和RJ組相比，HT 組的MAP-2 免疫反應(yīng)性顯著降低。實(shí)驗(yàn)性甲狀腺功能減退癥顯著降低了CA3 和CA1 區(qū)的MAP-2 免疫反應(yīng)性，并導(dǎo)致海馬變性。結(jié)果表明，RJ 增加了MAP-2的表達(dá)，并對退行性疾病表現(xiàn)出治療作用。

You M 等[32]研究RJ 對阿爾茨海默病神經(jīng)調(diào)節(jié)作用。在這項(xiàng)研究中，RJ 治療在莫里斯水迷宮（MWM）測試和被動(dòng)回避測試中顯著改善了APP/PS1 小鼠的行為缺陷。數(shù)據(jù)顯示RJ 顯著降低了APP/PS1 小鼠的淀粉樣蛋白斑塊表達(dá)。此外，RJ 通過抑制氧化應(yīng)激減輕了c-JunN 末端激酶（JNK）磷酸化誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡。重要的是，RJ 治療后APP/PS1 小鼠的海馬環(huán)狀單磷酸腺苷（cAMP）、p-PKA、p-CREB 和BDNF 水平顯著升高，表明cAMP/PKA/CREB/BDNF 途徑可能與阿爾茨海默病有關(guān)?？傊@些結(jié)果為使用RJ 作為針對AD病理的功能性食品提供了科學(xué)依據(jù)。

Zhang X 等[33]從RJ 中提取的蜂王漿肽（RJP）具有較強(qiáng)生物活性。研究RJP 的神經(jīng)保護(hù)作用，將主要的蜂王漿蛋白消化成粗RJP，然后通過RP-HPLC 純化，在N2a/APP695swe 細(xì)胞中評估了純化的RJP。結(jié)果表明，蜂王漿肽（RJPs）（1-9g/mL）可以通過下調(diào)-分泌酶（BACE1）抑制外部 -淀粉樣蛋白40（A ）和-淀粉樣蛋白42（A ）的產(chǎn)生；在N2a/APP695 細(xì)胞中BACE1 的調(diào)節(jié)可能與組蛋白乙?；揎椨嘘P(guān)，結(jié)果證明了RJPs 的神經(jīng)保護(hù)功能，這表明RJPs 可以作為潛在的 分泌酶抑制劑來改善阿爾茨海默氏病。

1.3 抗病毒作用

Habashy NH等[34]研究蜂王漿蛋白（MRJP）2 及其同工型X1 的抗HCV 和HBV 能力。結(jié)果證明，MRJP對病毒受體CD81 和清除劑受體B 類I（SR-B1）有抑制能力。此外，MRJP 靶向作用于HCV-NS3/NS4A 蛋白酶、HCV-NS5B 聚合酶和HBV 聚合酶（DNA 依賴性DNA 聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶）。MRJP 最大限度地發(fā)揮了其抗病毒作用?？傊@些結(jié)果闡明MRJP2 及其同工型X1 是HCV 和HBV 兩種病毒的安全的抑制劑。

1.4 促進(jìn)傷口愈合

Lin Y 等[35]研究RJ 的水溶性蛋白在體外傷口愈合模型中對人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）的增殖和遷移作用。結(jié)果表明，MRJP2、MRJP3 和MRJP7 刺激了HaCaT 細(xì)胞的增殖和遷移活性，并無細(xì)胞毒性。蜂王漿蛋白（MRJP2、MRJP3 和MRJP7）具有潛在的促進(jìn)傷口愈合生物活性，這是關(guān)于蜂王漿可能通過MRJP誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和遷移改善傷口閉合的首次報(bào)道。這些蛋白質(zhì)可能是開發(fā)新型傷口愈合藥物的先導(dǎo)化合物。

1.5 抗炎作用

Salahshoor MR 等[36]研究RJ 對缺血/再灌注（I/R）誘導(dǎo)的急性腎臟損傷的治療作用。這項(xiàng)研究旨在評估RJ 對I/R 誘發(fā)的腎臟疾病的抗炎和保護(hù)作用，通過白細(xì)胞浸潤以及細(xì)胞間粘附分子-1 和腫瘤壞死因子-（TNF- ）的mRNA 表達(dá)水平來評估I/R 誘導(dǎo)的腎臟炎癥，確定腎小球的直徑、腎功能指標(biāo)和血清亞硝酸鹽（NO）水平。結(jié)果表明，組織鐵還原/抗氧化能力（FRAP）水平與假手術(shù)組相比有所降低（P＜0.05），然而與I/R組相比，RJ 預(yù)處理可顯著降低血液尿素氮、腎臟丙二醛、肌酐、腎小球直徑、TNF- 水平及粘附分子-1 表達(dá)水平，并增加組織FRAP 含量（P＜0.05）。RJ 改善了I/R 引起的急性腎損傷。

Yang YC 等[37]認(rèn)為RJ 的功能可能歸因于其主要和獨(dú)特的脂肪酸10-羥基-2-癸烯酸（10-HDA）。研究了10-HAD 對人結(jié)腸癌細(xì)胞WiDr 的抗炎功能，以及對病原菌生長的影響。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）以及Western blot 法檢測WiDr 細(xì)胞中的促炎細(xì)胞因子，受體拮抗劑細(xì)胞因子（IL-1ra）和核因子 B（NF- B）。通過確定最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌劑濃度（MBC）評估10-HAD對細(xì)菌的生長抑制作用。結(jié)果表明，10-HAD可調(diào)節(jié)WiDr 細(xì)胞促炎細(xì)胞因子、白介素（IL）-8、IL-1和腫瘤壞死因子-（TNF- ）的產(chǎn)生。10-HAD 以劑量方式增加IL-1ra，降低NF- B 表達(dá)，研究表明，10-HAD在WiDr 細(xì)胞中表現(xiàn)出抗炎、抗菌活性。

You M M[38]研究的目的是評估RJ在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠BV-2 細(xì)胞中的抗炎作用，并探討其潛在的分子機(jī)制。結(jié)果表明，在LPS 誘導(dǎo)的BV-2 細(xì)胞中，RJ 在mRNA和蛋白質(zhì)水平上顯著抑制iNOS和COX-2的表達(dá)。RJ以濃度依賴性方式下調(diào)IL-6、IL-1和TNF- 的mRNA表達(dá)。此外，RJ通過上調(diào)血紅素加氧酶-1（HO-1）的表達(dá)并減少活性氧（ROS）和一氧化氮（NO）的生成來保護(hù)BV-2 細(xì)胞免受氧化應(yīng)激。從機(jī)理上講，RJ可以通過抑制IB、p38 和JNK 的磷酸化，抑制NF B p65 的核轉(zhuǎn)運(yùn)來減輕小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。這些結(jié)果表明，RJ 可能是一種有前途的功能性食品，可通過影響小膠質(zhì)細(xì)胞功能來延遲炎癥進(jìn)程。

1.6 抗高血壓作用

Pan Y 等[39]研究RJ 對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）抗高血壓和血管舒張作用的潛在機(jī)制。將大鼠分為WKY 對照組、SHR 對照組和SHR-RJ 組。SHR-RJ 組每天口服1 g/kg RJ，持續(xù)4 周。檢測收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、心率（HR）和一氧化氮（NO）水平。RJ 在體內(nèi)顯著降低SBP 和DBP 含量，增加SHR 的NO 表達(dá)水平。RJ 引起分離的主動(dòng)脈環(huán)舒張，可以顯著抑制NE 誘導(dǎo)的主動(dòng)脈環(huán)中胞內(nèi)Ca+的釋放和高K+誘導(dǎo)的胞外Ca+內(nèi)流，RJ 可以增加cGMP 水平。本研究表明RJ 具有降壓作用，并與NO 產(chǎn)生增加有關(guān)。此外，RJ包含毒蕈堿受體激動(dòng)劑，可能是乙酰膽堿樣物質(zhì)，并通過NO/cGMP 途徑和鈣通道誘導(dǎo)血管舒張。

1.7 保護(hù)肝臟作用

Abu-Serie MM[40]從RJ 中提取出最有效的復(fù)合物RJ 蛋白2（MRJP2），對抗CCl 誘導(dǎo)的肝毒性和HepG2細(xì)胞生長有明顯的保護(hù)作用；通過MALDI-TOF MS 鑒定為MRJP2及其預(yù)測的同工型X1。使用迭代線程ASSEmbly 精煉（I-TASSER）分析和RAMPAGE 程序?qū)@些蛋白質(zhì)進(jìn)行計(jì)算機(jī)評估（3D結(jié)構(gòu)和功能），這兩種純化的蛋白能夠通過減少腫瘤壞死因子（TNF）- ，混合譜系激酶域樣蛋白（MLKL）和細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)性物種來減輕壞死的肝細(xì)胞（達(dá)60.4%）。此外，通過誘導(dǎo)半胱天冬酶依賴性凋亡并控制HepG2 細(xì)胞中Bcl-2 和p53 的表達(dá)，揭示了有效的抗癌作用。因此，在未來研究中，MRJP2 及其同工型X1 可能成為對抗肝損傷和癌癥的雙重策略。

Rafa S.Almeer 等[41]研究RJ 對氯化鎘（CdCl2）誘導(dǎo)肝毒性的保護(hù)機(jī)制，結(jié)果顯示，RJ 明顯改善鎘的肝毒副作用。此外，RJ 抑制氧化應(yīng)激、炎癥和肝組織損傷，增強(qiáng)Nrf-2 蛋白表達(dá)，闡明了RJ 通過上調(diào)Nrf2 和抗凋亡來預(yù)防肝損傷。因此，RJ 可用作抗CdCl2 毒性作用的肝保護(hù)劑。

2 展望

RJ 中含有多種成分，不同的成分具有不同的藥理作用。目前為止，RJ 藥效作用有了進(jìn)一步的發(fā)展，但是RJ 的實(shí)際應(yīng)用前景并不廣泛。RJ 除了少部分成分、功能明確，仍有許多未知成分有待發(fā)現(xiàn)和鑒定，并且它們相應(yīng)的藥效作用也需要進(jìn)一步的研究。此外，RJ 單一成分的分離和純化方法復(fù)雜，且操作困難、效率低下，極大地限制了RJ 功能的開發(fā)和使用。因此，尋找一種方便有效的分離純化方法是RJ 活性成分研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。研究RJ 的潛在藥用特性，闡明其作用機(jī)理，成分和功能之間的關(guān)系，可為RJ 的實(shí)際應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，有利于提高RJ 的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[42-44]。