中藥及提取物治療喉癌機制的研究進展

陳天琪，孔凡銘，賈英杰

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，天津 301617；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科，天津 300381）

喉癌占全身惡性腫瘤的1%～5%，約占全身惡性腫瘤患病率的5.7%～7.6%。多發(fā)生于男性，發(fā)病年齡以40～60歲為多[1]。其病因主要有吸煙、慢性喉炎、空氣污染等，還存在癌前病變?nèi)绾戆装?、喉角化癥、成人乳頭狀瘤等。臨床多使用手術(shù)切除輔助放療、化療等綜合手段治療，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要因素。為此，許多研究者結(jié)合分子生物學(xué)及其技術(shù)對中藥治療喉癌進行了深入研究，本文將從中藥及提取物治療喉癌的各機制層面進行綜述。

1 誘導(dǎo)細胞凋亡

對于維持一個多細胞生物的組織或器官的完整性和平衡性，細胞凋亡具有不可替代的重要作用，而腫瘤細胞的增殖能力增強及凋亡能力降低，使其具有容易復(fù)發(fā)、難以控制的特點。B淋巴細胞瘤-2（Bcl-2）家族是調(diào)節(jié)細胞凋亡的重要蛋白。Bcl-2和Bcl-2相關(guān)的促凋亡蛋白（Bax）分別是Bcl-2家族中最主要的抑制凋亡和促進凋亡蛋白。在多數(shù)腫瘤中，Bcl-2表達水平升高，而Bax表達下降。上調(diào)Bcl-2或下調(diào)Bax能抑制多種因素誘導(dǎo)的多種腫瘤細胞凋亡[2]。

半胱氨酸蛋白酶（Caspase）家族是細胞凋亡調(diào)控的關(guān)鍵分子群，他們通過切斷與周圍細胞的聯(lián)絡(luò)、關(guān)閉脫氧核糖核酸（DNA）復(fù)制和修復(fù)、破壞DNA和核結(jié)構(gòu)、誘導(dǎo)凋亡小體形成等，在各細胞凋亡路徑都有可能被激活[3]。

研究發(fā)現(xiàn)，一些中藥及提取物可以影響細胞增殖或凋亡過程中的通路或分子，從而達到抑制腫瘤細胞增殖的作用。

1.1 黃芩素、漢黃芩素、黃芩苷 黃芩味苦，性寒。歸肺、膽、大腸、小腸經(jīng)?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》論述足厥陰肝經(jīng)“循喉嚨之后，上入頏顙，連目系”；手太陽小腸經(jīng)“絡(luò)心，循咽，下膈”，“是動則病，齒痛，頸腫”?！鹅`樞·經(jīng)脈》中論述手陽明大腸經(jīng)“是主津所生病者，目黃，口干，鼽衄，喉痹，肩前臑痛，大指次指痛不用。氣有余，則當(dāng)脈所過者熱腫”。皆對中藥黃芩在喉癌中的作用有一定闡釋。

漢黃芩素是傳統(tǒng)中草藥黃芩的有效成分之一，對腫瘤細胞的殺傷有獨特作用。不僅如此，在其他實驗中，黃芩其他有效成分黃芩苷、黃芩素都被證明對喉癌細胞有抑制作用。孫吉鳳等[4]證實黃芩素分別上調(diào)Bax的表達、下調(diào)Bcl-2的表達及下調(diào)Bcl-2/Bax比例，促進細胞色素（Cyt）C釋放到胞質(zhì)，進而與激活的Caspase-9及凋亡蛋白酶活化因子-1（Apaf-1）形成凋亡小體，激活Caspase-3及后續(xù)線粒體凋亡途徑，使細胞阻滯在S期，誘導(dǎo)喉癌Hep-2細胞凋亡。

凌丹等[5]通過實驗發(fā)現(xiàn)漢黃芩素能有效降低人喉癌Hep-2細胞端粒酶催化亞單位（hTERT）、Bcl-2蛋白表達水平并增加Bax蛋白表達水平（P＜0.05），說明其在體外能夠有效抑制人喉癌Hep-2細胞增殖，誘導(dǎo)細胞凋亡。何剛迅等[6]分別觀察不同濃度黃芩苷對Hep-2細胞基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）表達水平、遷移能力及細胞血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）蛋白含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩苷可減少上述蛋白的含量，并有效抑制喉癌Hep-2細胞的遷移能力，且呈一定量效關(guān)系。

1.2 丹酚酸B 磷脂酰肌醇3-激酶（PI3Ks）信號通路是細胞內(nèi)重要的信號通路之一，蛋白激酶B（Akt），是PI3K下游主要的效應(yīng)分子，是PI3K信號通路中最為關(guān)鍵的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。PI3K/Akt作為細胞內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。喉鱗癌存在PI3K和Akt蛋白的異常表達并與腫瘤細胞的病理分級關(guān)系密切，PI3K/Akt途徑的異常活化可能在喉鱗狀細胞癌發(fā)生過程中起重要作用[7]。

丹酚酸由唇形科植物丹參的根及根莖提取而得，丹參味苦，微寒，歸心、肝經(jīng)?！度杖A子本草》有丹參治療“惡瘡疥癬，癭贅腫毒，丹毒；頭痛，赤眼，熱溫狂悶”的記載。郭俊宇等[8]證明丹酚酸B在體外能夠有效抑制人喉癌Hep-2細胞增殖，誘導(dǎo)細胞凋亡，同時抑制喉癌細胞的體外侵襲轉(zhuǎn)移能力，其作用可能與下調(diào)PI3K、Akt、Bcl-2等蛋白表達水平相關(guān)。

1.3 蟾酥水溶物 Survivin是人類凋亡抑制蛋白（IAPs）家族的成員，是目前腫瘤研究領(lǐng)域的熱點之一[9]。中藥材蟾酥為蟾蜍科動物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物，有解毒、消腫、強心、止痛之功，臨床常用以治療咽喉腫痛。張健夫[10]發(fā)現(xiàn)蟾酥水溶物可致Hep-2細胞的Survivin蛋白、Caspase-9蛋白的表達水平降低從而誘導(dǎo)細胞凋亡，且其對Hep-2細胞的生長抑制效果存在時間、濃度依賴性。

1.4 藻藍蛋白 藻藍蛋白是從中藥螺旋藻中分離出的一種深藍色粉末，螺旋藻為顫藻科植物鈍頂螺旋藻等多種螺旋藻的藻體。應(yīng)俊等[11]發(fā)現(xiàn)藻藍蛋白可通過降低核仁素表達，升高細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平，上調(diào) Bax、Fas和 P53 mRNA，下調(diào) Bcl-2 mRNA的表達，從而促進凋亡信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終達到誘導(dǎo)Hep-2細胞凋亡的效果。

1.5 草蓯蓉多糖 草蓯蓉是列當(dāng)科草蓯蓉屬植物，從中提取的草蓯蓉多糖可顯著上調(diào)Hep2細胞中p53的表達水平，激活Caspase-3，顯著下調(diào)Bcl-2的表達，通過調(diào)節(jié)細胞凋亡相關(guān)蛋白的表達水平誘導(dǎo)細胞凋亡[12]。

2 阻滯細胞周期，抑制腫瘤細胞增殖

真核細胞必須經(jīng)過G1/S期轉(zhuǎn)換完成DNA的合成，才能進入S期繼續(xù)進行增殖；細胞G2期進行核糖核酸（RNA）和蛋白質(zhì)的合成，為進入M期進行有絲分裂做準備，如果阻滯了細胞周期，就可以有效抑制腫瘤細胞的繼續(xù)增殖，促進細胞的凋亡。

黃芪水溶物：宋巖等[13]證明了黃芪水溶物可調(diào)控喉癌細胞周期，形成細胞周期G2/M期阻滯，抑制腫瘤細胞增殖來發(fā)揮其抗腫瘤作用，并驗證了黃芪可提高順鉑對Hep-2細胞抑制作用的敏感性，通過調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax蛋白表達，提高順鉑對喉癌的治療效果[14]。

3 誘導(dǎo)細胞自噬

細胞自噬是指細胞內(nèi)受損、變性或衰老的蛋白質(zhì)和細胞器被運輸?shù)饺苊阁w，溶酶體對其消化降解的過程。如果自噬作用受影響，細胞內(nèi)一些代謝活動不能進行，會增加自發(fā)性腫瘤的發(fā)生率。研究表明，自噬抑制可作為喉癌治療靶點[15]。近年來一些中藥針對細胞自噬方面開展研究，以期能誘導(dǎo)腫瘤細胞自噬達到治療腫瘤的目的[16]。

3.1 白藜蘆醇 白藜蘆醇存在于許多藥用植物中，如決明子、藜蘆、虎杖等。李云川等[17]實驗證明白藜蘆醇通過阻滯Hep-2細胞在G2/M期來抑制其增殖，且對喉癌細胞系Hep-2細胞生長的抑制具有時間和劑量依賴性。黃丹[18]發(fā)現(xiàn)Bax/Bcl-2途徑參與了白藜蘆醇誘導(dǎo)的Hep-2細胞凋亡：隨作用時間的延長，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達量降低，而促凋亡蛋白Bax的表達升高，Bax/Bcl-2比值升高，細胞接受凋亡信號刺激發(fā)生凋亡。隨后，王敏[19]實驗證明了其抑制細胞增殖的機制還有誘導(dǎo)Hep-2自噬，其上調(diào)自噬基因LC3和beclin1的表達有著濃度和時間依賴性，并促進Hep-2細胞ROS生成，通過ROS介導(dǎo)AMPK-mTOR通路誘導(dǎo)Hep-2自噬。說明白藜蘆醇對Hep-2細胞的作用包括抑制其增殖、誘導(dǎo)其凋亡，還包括誘導(dǎo)Hep-2自噬。

白藜蘆醇還可以增加紫杉醇和順鉑抑制腫瘤的能力。戰(zhàn)仕花等[20]實驗證明，白藜蘆醇可提高Hep-2喉癌細胞株對順鉑的敏感性，其機制可能與提高喉癌細胞中Sirt1蛋白表達有關(guān)。盧晨欣等[21]使用紫杉醇和白藜蘆醇處理人喉癌細胞株Hep-2，結(jié)果表明，與單獨用藥相比，紫杉醇、白藜蘆醇聯(lián)合組顯著增強對Hep-2細胞的抑制作用，且明顯減少紫杉醇的用藥劑量，增加Bax、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、TRIB3等促細胞凋亡基因的表達，降低Bcl-2、X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）等抑制凋亡基因的表達，促進Caspase-3、Caspase-8活性。這表明白藜蘆醇與紫杉醇以及其聯(lián)合藥物可通過線粒體途徑誘導(dǎo)喉癌細胞Hep-2的凋亡。以上實驗均證明了白藜蘆醇可從多個方面對喉癌細胞的增殖或凋亡起作用，并能增強化療藥對喉癌細胞的作用從而達到抑制喉癌的效果。

3.2 姜黃素 姜黃味辛、苦，溫，歸脾、肝經(jīng)。《唐本草》記載姜黃“主心腹結(jié)積，疰忤，下氣，破血，除風(fēng)熱，消癰腫”。姜黃素是姜黃發(fā)揮藥理作用的主要活性成分，其藥理作用廣泛。閆婷婷[22]實驗證明姜黃素能呈時間-劑量依賴性抑制喉癌Hep-2細胞增殖，同時誘導(dǎo)喉癌Hep-2細胞發(fā)生自噬。而使用自噬抑制劑抑制自噬后，可增強姜黃素對喉癌Hep-2細胞系的凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)。范勇等[23]用高姜黃素水平也能夠顯著降低喉癌細胞KAI1/CD82的表達及喉癌細胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力。

姜黃素與他藥聯(lián)合可更有效抑制喉癌細胞增殖。如周華群[24]發(fā)現(xiàn)姜黃素與白藜蘆醇聯(lián)合處理可降低Hep-2細胞和人咽鱗癌細胞（Fadu）的存活率，抑制細胞集落的形成并促進細胞的凋亡，其機制可能與上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2的表達有關(guān)；彭莎[25]發(fā)現(xiàn)其與多西紫杉醇均對Hep-2細胞有生長抑制作用，并誘導(dǎo)該細胞凋亡，姜黃素提高了Hep-2細胞對多西紫杉醇的敏感性，增強了多西紫杉醇對Hep-2細胞的殺傷作用，說明姜黃素可從多角度多途徑抑制喉癌細胞增殖、轉(zhuǎn)移，并能增強化療藥物抑制腫瘤增殖的效果。

3.3 冬凌草素 冬凌草味苦、甘，性微寒，可清熱解毒。主治咽喉腫痛、感冒頭痛、氣管炎、慢性肝炎等疾病。

冬凌草素是一種從冬凌草中分離得到的二萜類化合物，已被證明通過誘導(dǎo)細胞凋亡或自噬對多種腫瘤有效。冬凌草素和抗表皮生長因子受體（EGFR）單克隆抗體西妥昔單抗對喉鱗狀細胞癌（LSCC）均具有協(xié)同的抗腫瘤作用，激活A(yù)MPK-mTOR在LSCC細胞中進行自噬并激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）介導(dǎo)的 Beclin1上調(diào)[26]。有研究發(fā)現(xiàn)結(jié)合使用EGFR抑制劑和冬凌草素可增加ROS的產(chǎn)生并可分別觸發(fā)Hep-2細胞凋亡的內(nèi)在和外在途徑[27-29]。

4 抑制腫瘤黏附浸潤

MMP可分解細胞外基質(zhì)（ECM）蛋白，基底膜是ECM的重要組成部分，基底膜和ECM的降解主要由MMP所控制[30]。而尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）系統(tǒng)活躍參與腫瘤ECM的降解，促進腫瘤侵襲和浸潤[31]。

4.1 白花蛇舌草多糖 白花蛇舌草為茜草種植物白花蛇舌草的帶根全草，味苦、甘，寒，入心、肝、脾經(jīng)?！稄V西中草藥》記載白花蛇舌草：“清熱解毒，活血利尿。治扁桃體炎、咽喉炎、闌尾炎、肝炎、痢疾、尿路感染、小兒疳積?！盬u等[32]、趙小燕等[33]利用細胞周期分析發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草多糖使細胞滯留于G0/G1期，同時發(fā)現(xiàn)藥物作用24 h后細胞凋亡率明顯升高，相關(guān)凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表達升高，而Bcl-2表達下降。同時細胞侵襲實驗還發(fā)現(xiàn)其抑制MMP-2和uPA相關(guān)蛋白的表達，從而抑制喉癌細胞的凋亡和侵襲。

4.2 熊果酸 熊果酸是一種五環(huán)三萜類化合物，廣泛存在于夏枯草、女貞子等多種藥用植物中，具有多種生物活性。體內(nèi)外研究表明，熊果酸抗瘤譜廣，且對正常細胞毒性低，是一種理想的天然抗腫瘤候選藥物[34]。張軍輝等[35-36]實驗證明熊果酸可以通過抑制細胞增殖，影響細胞侵襲對喉癌細胞產(chǎn)生作用，認為其不僅下調(diào)磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激活轉(zhuǎn)錄因子-3（p-STAT3）和細胞周期蛋白 D1（CyclinD1）蛋白表達，還能降低MMP-9和MMP-2活性及NF-κB蛋白表達，從而達到抗腫瘤目的。

4.3 雙氫青蒿素 雙氫青蒿素為青蒿素的衍生物，越來越多的證據(jù)表明，腫瘤干細胞（CSC)是腫瘤細胞的次要亞群，可能是腫瘤入侵、遷移和廣泛轉(zhuǎn)移的主要來源[37]。Wang等[38]發(fā)現(xiàn)雙氫青蒿素可以通過抑制STAT3、下調(diào)MMP-9并上調(diào)E-鈣黏著蛋白，預(yù)防侵襲并防止CSC引起的轉(zhuǎn)移。

5 抑制腫瘤血管新生

VEGF是一種廣泛存在的內(nèi)皮細胞特異性因子，VEGF的產(chǎn)生加速血管形成，出現(xiàn)大量結(jié)構(gòu)和功能異常的腫瘤血管，加速腫瘤轉(zhuǎn)移。隨著研究的不斷深入，越來越多的中藥被證明可通過降低腫瘤細胞中的VEGF因子，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[39]。

5.1 染料木素 染料木素，即金雀異黃素，主要存在于豆科之中，如槐角、山豆根中含量較大。山豆根性苦，寒，有清熱解毒，消腫利咽之功效，常用于治療火毒蘊結(jié)、乳蛾喉痹、咽喉腫痛、齒齦腫痛、口舌生瘡等癥。周渝[40]發(fā)現(xiàn)染料木素可作用于VEGFR-3/PI3K/Akt/GSK-3β信號通路發(fā)揮抗腫瘤作用，促進Hep-2細胞的凋亡，抑制Hep-2細胞的增殖、遷移與侵襲能力。

5.2 重組水蛭素 水蛭，味咸、苦，性平，有毒，入肝、膀胱經(jīng)。水蛭素是水蛭及其唾液腺中提取出的多種活性成分中活性最顯著的一種，它是由多個氨基酸組成的小分子蛋白質(zhì)。

在1項網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)[41]的研究中發(fā)現(xiàn)水蛭主要有效成分水蛭素主要參與補體和凝血級聯(lián)、血小板活化等通路，而目前中醫(yī)對腫瘤的病機認識恰好多與毒邪瘀血相關(guān)，這一認識指導(dǎo)了后人的臨床試驗。楊笑染等[42]實驗證明了蛋白酶激活受體2（PAR-2）、VEGF、MMP-2參與了喉癌的侵襲及轉(zhuǎn)移，并發(fā)現(xiàn)重組水蛭素的抗腫瘤及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用可能與其降低喉癌細胞中PAR-2、VEGF、MMP-2的表達有關(guān)。馬濤等[43]使用喉癌荷瘤小鼠進行實驗，更明確了水蛭素對小鼠喉癌細胞的抑制作用。

5.3 重樓皂苷I 中藥重樓又稱七葉一枝花，是中醫(yī)抗腫瘤配方中的常用中藥。重樓皂苷I是從中藥重樓中提取的一種甾體皂苷單體，其以往研究的抗腫瘤主要作用機制包括誘導(dǎo)細胞凋亡、調(diào)節(jié)機體免疫功能、抑制腫瘤組織血管生長、逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥等[44]。而STAT-3的活化是許多惡性腫瘤的重要特征[45]。鄧碧凡等[46]發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅰ可下調(diào)STAT-3表達及抑制STAT-3的磷酸化，抑制低氧條件下喉癌Hep-2細胞增殖和缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、VEGF的表達，從而抑制腫瘤增殖，抑制血管新生。

6 逆轉(zhuǎn)細胞耐藥

腫瘤的耐藥是指惡性腫瘤細胞在接觸一種抗腫瘤藥后，對該藥物產(chǎn)生耐藥最終導(dǎo)致治療失敗，而P-糖蛋白（P-gp）的水平與抗藥性及細胞內(nèi)藥物積聚減少程度呈正相關(guān)。

粉防己堿：防己為防己科植物粉防己的干燥根。味辛、苦，性寒，歸膀胱、肺經(jīng)?！睹t(yī)別錄》載方劑治療“傷寒寒熱邪氣，中風(fēng)手腳攣急，通腠理，利九竅，止泄，散癰腫惡結(jié)，諸疥癬蟲瘡”。

葉琳等[47]實驗發(fā)現(xiàn)粉防己堿可以部分逆轉(zhuǎn)喉癌耐藥細胞株Hep-2/ADM細胞的多藥耐藥，隨藥物濃度增加，逆轉(zhuǎn)效果有可能增強，其逆轉(zhuǎn)機制可能與抑制P-gp外排功能和增強化療藥物誘導(dǎo)的細胞凋亡有關(guān)，其另有實驗[48]證明低濃度的粉防己堿能逆轉(zhuǎn)喉癌耐藥細胞株KBV200對阿霉素的耐藥作用。以上的實驗均說明粉防己堿可通過逆轉(zhuǎn)細胞耐藥增強喉癌化療的效果。

7 增強細胞免疫

7.1 茯苓多糖 茯苓為多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，味甘、淡，性平，歸心、肺、脾、腎經(jīng)?！侗静菥V目》曰：“茯苓氣味淡而滲，其性上行，生津液，開腠理，滋水源而下降，利小便，故張潔古謂其屬陽，浮而升，言其性也；東垣謂其為陽中之陰，降而下，言其功也?！?/p>

復(fù)方茯苓多糖口服液是由香菇、靈芝、茯苓按比例為1∶1∶2混合提取其多糖成分制成的口服液制劑，是一種新型的中藥復(fù)合多糖制劑。侯瑋婷[49]利用復(fù)方茯苓多糖口服液增強了荷瘤小鼠淋巴細胞增殖水平和NK細胞對靶細胞的殺傷功能，抑制了喉癌Hep-2細胞的生長，并且呈一定的量效關(guān)系。

7.2 青蒿琥酯 中草藥青蒿性味苦、辛，性寒，歸肝、膽經(jīng)。《神農(nóng)本草經(jīng)》云：“青蒿主疥瘙痂癢，惡瘡，殺虱，留熱在骨節(jié)間，明目?！鼻噍镧ナ乔噍锼匮苌镏唬R床已發(fā)現(xiàn)多種藥理作用，如抗瘧、調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤等。劉偉等[50]證實青蒿琥酯可抑制人喉癌Hep-2細胞株增殖，其途徑與下調(diào)MEK/ERK、NF-κB信號通路有關(guān)。

腫瘤免疫抑制性微環(huán)境主要由腫瘤細胞產(chǎn)生的免疫抑制分子、免疫抑制性細胞和免疫抑制性細胞因子構(gòu)成。其中免疫抑制性細胞主要包括腫瘤相關(guān)巨噬細胞、調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）等[51]。楊彥忠等[52]實驗證實，人喉癌Hep-2細胞可產(chǎn)生T細胞免疫抑制作用，青蒿琥酯可對其產(chǎn)生穩(wěn)定的逆轉(zhuǎn)作用，下調(diào)腫瘤免疫抑制是其重要抗瘤機制之一，證明青蒿琥酯可以通過改善腫瘤免疫微環(huán)境，增強體內(nèi)細胞免疫來抑制腫瘤細胞。

8 抑制上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）

EMT是指上皮細胞通過特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細胞的生物學(xué)過程，在胚胎發(fā)育、慢性炎癥、組織重建、腫瘤轉(zhuǎn)移和多種纖維化疾病中發(fā)揮了重要作用[53]。

天花粉蛋白：天花粉為葫蘆科植物瓜蔞的根，味甘、微苦，性微寒，歸肺、胃經(jīng)，為清熱瀉火類藥物，其具體功效是清熱瀉火、生津止渴、排膿消腫。臨床主要改善熱病口渴、消渴、肺燥咳血、癰腫等癥狀。杜瑞霞[54]實驗證明了轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）聯(lián)合表皮生長因子（EGF）共同誘導(dǎo)可使Hep-2細胞產(chǎn)生EMT。天花粉蛋白協(xié)同曲古菌素A可明顯促進Hep-2細胞的凋亡，抑制EMT過程。張鐸等[55]實驗驗證了天花粉蛋白通過激活JNK信號通路，同時抑制NF-κB活性，增強順鉑誘導(dǎo)喉癌細胞凋亡比例，達到抑制喉癌細胞生長的作用。另外，金巧智等[56]發(fā)現(xiàn)天花粉蛋白可明顯抑制喉癌腫瘤細胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移，可能是通過逆轉(zhuǎn)Syk（L）基因啟動子甲基化狀態(tài)，恢復(fù)其表達，抑制喉癌細胞的惡性生物學(xué)行為。

以上實驗同時證明了天花粉蛋白在抑制喉癌細胞轉(zhuǎn)移、促進喉癌細胞凋亡等方面有良好效果，與曲古霉素A或順鉑聯(lián)合使用效果更優(yōu)。

9 小結(jié)與展望

綜上所述，中醫(yī)藥制劑可多層面多途徑抑制喉癌的發(fā)生發(fā)展，主要從以下角度發(fā)揮作用：1）誘導(dǎo)喉癌細胞凋亡，如黃芩水溶物。2）抑制喉癌細胞增殖，如黃芪水溶物。3）抑制腫瘤黏附，其作用主要通過控制MMP-2、MMP-9等實現(xiàn)，如白花蛇舌草多糖。4）抑制腫瘤血管新生，主要通過調(diào)控VEGF等實現(xiàn)，如水蛭素等。5）逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥，如粉防己堿等。6）增強細胞免疫，如復(fù)方茯苓多糖。7）抑制EMT，如天花粉蛋白。8）誘導(dǎo)細胞自噬，如白藜蘆醇。

《黃帝內(nèi)經(jīng)》記載：“喉主天氣，天氣通于肺；咽主地氣，地氣通于胃?！北静∨R床上以喉部生腫物如菌、潰腐難斂為主要表現(xiàn)，屬于中醫(yī)學(xué)“喉菌”“喉鎖瘡”“喉百葉”“喉疳”“開花疔”等病癥范疇?！堆屎砻}證通論》描述喉菌：“上蒸于喉，結(jié)成如菌，面厚而紫，軟如豬肺，或微痛，或木而不痛，梗死喉間，飲食有礙?！薄动彲兘?jīng)驗全書》：“鎖喉瘡者……發(fā)于聽會之端，注于懸膺之側(cè)，初生如瘰疬，不能飲食，閉塞難通，漸次腫破化膿?！鼻宕夺t(yī)宗金鑒》載：“喉疳初覺陰虛成，嗌干刺痛色淡紅，腎火炎上金受克……”《囊秘喉書》稱：“喉中有生肉，層層相疊，漸腫有孔具氣者?！笨梢娭嗅t(yī)藥領(lǐng)域?qū)戆┰缬姓J識。

目前為止已有多個體外實驗驗證中藥提取物針對喉癌細胞的作用，可增加腫瘤細胞凋亡率，尚有實驗證實一些中藥與化療藥物一起使用效果更加顯著，這些數(shù)據(jù)為臨床提供了良好思路。

中藥能通過多機制和多層面抑制喉癌的發(fā)展，文章中的蟾酥、山豆根等中藥為中醫(yī)治療咽喉部位疾病常用散結(jié)藥物，通過臨床試驗，更進一步證明其與喉癌治療的相關(guān)性，對未來中醫(yī)藥治療腫瘤有了更多的啟發(fā)。但目前中藥治療喉癌還有以下不足：1）體外實驗尚淺，多使用人喉癌Hep-2細胞實驗，缺乏體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)。2）中藥可通過調(diào)控多條信號通路抑制喉癌細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡，但目前對這些通路相互聯(lián)系的影響研究較少，未來還需要更加深入探討分子機制，明確其作用通路，驗證量效關(guān)系，為后期開展臨床試驗打下堅實基礎(chǔ)。