聲帶白斑組織標(biāo)志蛋白的表達(dá)及臨床意義

李 峰，高志光，蔣杏麗，安 然，金 夢(mèng)

（黑龍江省醫(yī)院耳鼻咽喉科，黑龍江 哈爾濱 150036）

聲帶白斑（vocal cord leukoplakia）具有惡變潛能的特質(zhì)，因此需要得到臨床的高度重視。細(xì)胞增殖的異常調(diào)控是惡性腫瘤發(fā)生的主要特征，而研究發(fā)現(xiàn)各種致病因素均會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞中的癌基因激活，且抑癌基因失活，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞周期的調(diào)控發(fā)生改變，進(jìn)而引發(fā)癌變[1]。本研究應(yīng)用免疫組化的方法，對(duì)比分析成年聲帶白斑和成年聲帶良性病變患者中標(biāo)志蛋白的表達(dá)進(jìn)行探討，旨在為臨床早期診斷和預(yù)后判斷提供可靠的指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究納入2017年8月～2019年8月我院鼻咽喉頭科收治的120例換這個(gè)，所有患者均經(jīng)顯微手術(shù)明確病理性質(zhì)，其中成年聲帶白斑55例（包括伴上皮單純?cè)錾?2例，伴上皮異型增生33例），成年聲帶良性病變42例（包括聲帶息肉28例，聲帶任克水腫14例）。成年聲帶良性病變組（n=42）中：男27例，女25例，年齡23～82歲；平均（52.52±5.36）歲。聲帶白斑伴上皮單純?cè)錾M（n=22）中：男12例，女10例，年齡23～82歲；平均（51.89±5.21）歲。聲帶白斑伴上皮異型增生組（n=33）中：男17例，女16例，年齡23～82歲；平均（52.23±5.45）歲。且上述資料中的組間數(shù)據(jù)對(duì)比差異均保持均衡性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)喉顯微手術(shù)明確病理性質(zhì)；聲帶白斑病變表現(xiàn)為聲帶單側(cè)或雙側(cè)白色點(diǎn)狀、片狀或外生性白色物。排除標(biāo)準(zhǔn)：有有喉部外傷、插管史、喉部活檢史、頭頸部放化療和手術(shù)史者；合并多種聲帶病變者；合并其他全身惡性腫瘤者；病變組織過小，不能制備足夠病理切片者。

1.2 方法

結(jié)合世界衛(wèi)生組織（WHO）修訂的頭頸部腫瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)（2005年）將所有聲帶白斑患者進(jìn)行病理分型，主要包括：重度異型增生、鱗狀上皮單純?cè)錾?、輕度異型增生、原位癌及中度異型增生。選用VEGF，Survivin兔抗人多克隆抗體試劑；p53、Ki-67鼠抗人單克隆抗體；福州邁新公司生產(chǎn)的免疫組化試劑盒，對(duì)病例石蠟標(biāo)本二步法免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)蛋白表達(dá)。Ki-67、p53陽性物質(zhì)分布在細(xì)胞核內(nèi)，VEGF在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜均可陽性染色。

1.3 判定方法

（1）細(xì)胞核陽性：根據(jù)占病變上皮細(xì)胞總數(shù)的比例，也就是陽性范圍進(jìn)行判定，①強(qiáng)陽性（+++）：陽性細(xì)胞數(shù)＞50%；②陽性（++）：陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%；③弱陽性（+）：陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%；④陰性（-）：陽性細(xì)胞數(shù)＜5%。

（2）細(xì)胞膜陽性和細(xì)胞質(zhì)陽性：①陽性細(xì)胞數(shù)所占比例：3分：陽性細(xì)胞＞50%；2分：陽性細(xì)胞26%～50%；1分：陽性細(xì)胞1%～25%；0分：未見陽性細(xì)胞著色。②根據(jù)免疫組化檢查結(jié)果中的染色范圍和染色強(qiáng)度進(jìn)行判斷，3分：深棕黃色染色；2分：中等強(qiáng)度棕黃色染色；1分：淺棕黃色染色；0分：上皮細(xì)胞陰性染色。綜合評(píng)分為兩項(xiàng)積分的乘積：陰性（-）：0分；（+++）：7～9分；（++）：4～6分；（+）：1～3分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)，將統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為：α=0.05，P小于0.05象征數(shù)據(jù)有差異。

2 結(jié) 果

聲帶白斑伴上皮單純?cè)錾吐晭Я夹圆∽冎械腒i-67、p53及VEGF表達(dá)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。聲帶白斑伴上皮異型增生中的Ki-67、p53陽性表達(dá)比聲帶白斑伴上皮單純?cè)錾?、聲帶良性病變的?jí)別明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

聲帶白斑的的病因復(fù)雜，病理類型較多，臨床治療和隨訪的標(biāo)準(zhǔn)缺乏統(tǒng)一性。有相關(guān)研究表明，如何有效預(yù)測(cè)聲帶白斑中癌前病變的病理學(xué)特點(diǎn)、基因血特點(diǎn)及生物標(biāo)志物陽性表達(dá)情況等是未來臨床研究的重點(diǎn)方向[2]。相關(guān)研究證實(shí)，導(dǎo)致多種腫瘤發(fā)生的原因之一為抑癌基因p53的突變或缺失[3]。也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67是用判斷細(xì)胞增殖活性的參考指標(biāo)，能夠預(yù)測(cè)腫瘤的分化、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷。吳昆曼的研究指出，VEGF作為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，在腫瘤血管形成中發(fā)揮著重要的作用。上述因子與腫瘤的發(fā)證和發(fā)展之間存在著較為復(fù)雜的關(guān)系

本組研究發(fā)現(xiàn)Ki-67、p53及VEGF表達(dá)在聲帶白斑伴上皮單純?cè)錾吐晭Я夹圆∽冎械募?jí)別之間相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），并且Ki-67、p53及VEGF蛋白在聲帶白斑伴上皮異型增生中的陽性表達(dá)比聲帶白斑伴上皮單純?cè)錾⒙晭Я夹圆∽冎械募?jí)別明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這提示異型增生程度會(huì)隨著陽性級(jí)別程度的增高而越嚴(yán)重。VEGF在不同病變組織中的陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這對(duì)病變嚴(yán)重程度并無明顯的提示性作用。而臨床需要對(duì)Ki-67、p53中等級(jí)別以上陽性表達(dá)的聲帶白斑伴上皮異型增生者加強(qiáng)觀察和隨訪。Ki-67、p53可以從分子生物學(xué)水平來反應(yīng)生物學(xué)特性和細(xì)胞異常增殖情況，且對(duì)異型增生向惡性轉(zhuǎn)變的早期診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)有重要的指導(dǎo)意義。

綜上所述，Ki-67、p53陽性級(jí)別在聲帶白斑伴上皮異型增生中比聲帶良性病變明顯增高，能夠從分子生物學(xué)水平反應(yīng)細(xì)胞異常增殖情況和生物學(xué)特性，且同時(shí)對(duì)可能對(duì)診斷異型增生、癌前病變和判斷預(yù)后有重要的提示作用，臨床建議對(duì)于即使聲帶白斑伴輕．中度異型增生及Ki-67、p53中等級(jí)別以上陽性表達(dá)者需要加強(qiáng)密切隨訪。