草魚抗出血病研究進(jìn)展

■王金龍 付青山（ 湖南省水產(chǎn)科學(xué)研究所； 沅江市畜牧水產(chǎn)事務(wù)中心）

草魚屬鯉形目鯉科雅羅魚亞科草魚屬，是我國最主要的養(yǎng)殖品種，草魚淡水養(yǎng)殖幾乎遍布全國各地，2018年全國草魚養(yǎng)殖產(chǎn)量550.43萬t，占淡水養(yǎng)殖總量的18.59%。草魚具有味美、生長快的特點(diǎn)，其養(yǎng)殖飼料價(jià)格相對較低而經(jīng)濟(jì)效益明顯，深受消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶的喜愛，但草魚又具有多病、成活率低的特點(diǎn)，與草魚有關(guān)的疾病有草魚出血病、腸炎病、爛鰓病等十幾種。草魚出血病是一種最為常見的草魚疾病，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，每年由于草魚出血病導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失至少達(dá)10億人民幣，給我國草魚養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了草魚養(yǎng)殖者的積極性和我國淡水養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，因此該病病原及其防控技術(shù)的研究多次被列為國家科技攻關(guān)項(xiàng)目。

草魚出血病是一種主要危害草魚魚種的急性傳染病，該病發(fā)病快、流行廣、死亡率高，其組織病理變化主要表現(xiàn)為全身性小血管損傷、出血。我國在20世紀(jì)70年代即開始進(jìn)行草魚出血病病原的研究，1980年發(fā)現(xiàn)病毒顆粒并確認(rèn)為草魚出血病病原，1991年國際病毒分類委員會(huì)將其命名為草魚呼腸孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV）。GCRV是中國分離鑒定的第一株魚類病毒，是水生呼腸孤病毒屬中致病力最強(qiáng)的毒株，不僅能感染草魚，而且還能感染青魚、麥穗魚、布氏鰲條魚等，并能使這幾種魚發(fā)生出血病癥狀而死亡。經(jīng)長期研究，人們對草魚呼腸孤病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、理化特性、分子生物學(xué)特性、免疫原性及其免疫防治等已經(jīng)有了初步的了解，積累了一些資料，為在魚類養(yǎng)殖過程中進(jìn)行該病毒的免疫防治工作奠定了一定的基礎(chǔ)，但仍有缺陷和不足，尚需進(jìn)一步探索。

由于呼腸孤病毒增殖的主要特征是在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行復(fù)制、生物合成及裝配等全過程。與其他病毒不同的是，這類病毒增殖的任一階段都不在細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行，化學(xué)藥物難以對其有效控制，必須探求藥物之外的其他防治辦法。當(dāng)前，采用免疫法來提高草魚自身對GCRV的抵抗能力，是進(jìn)行防控GCRV感染的主要途徑。國內(nèi)草魚免疫防疫技術(shù)研究始于20世紀(jì)60年代。1969年，中國水產(chǎn)科學(xué)院珠江水產(chǎn)研究所首次研制出草魚出血病組織漿滅活疫苗（即“土法”疫苗）?！捌呶濉?、“八五”期間，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院組織聯(lián)合科技攻關(guān)研制出我國第1個(gè)高效弱毒疫苗——草魚出血病弱毒疫苗，并開展多聯(lián)疫苗的研制，構(gòu)建了與草魚出血病弱毒疫苗聯(lián)用的草魚細(xì)菌性爛鰓、赤皮、腸炎四聯(lián)滅活疫苗的大規(guī)模制備技術(shù)。2011年3月，歷經(jīng)多年研制的草魚出血病活疫苗（GCHV-892株）獲得我國首個(gè)水產(chǎn)疫苗生產(chǎn)批準(zhǔn)文號。該疫苗經(jīng)過在兩廣、江浙等地區(qū)應(yīng)用試驗(yàn)，免疫保護(hù)率高達(dá)90%以上，自此草魚出血病活疫苗研究與應(yīng)用得到了進(jìn)一步發(fā)展。但是，當(dāng)前養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)用的草魚出血病疫苗均存在一定的缺陷。組織滅活疫苗須含足夠的病毒才能引起免疫應(yīng)答，而大劑量（常是必須的）又可引起局部或全身的反應(yīng)，該疫苗不能進(jìn)入MHCI類抗原呈遞途徑，因此不能有效的誘導(dǎo)CTL反應(yīng)，并且所獲得的免疫性一般是短暫的，須激發(fā)注射。而減毒活疫苗由于存在致病性、刺激性過強(qiáng)和回復(fù)致病性的潛在危險(xiǎn)，而且活疫苗生產(chǎn)還可能造成污染，含有生產(chǎn)過程帶來的潛在有毒物質(zhì)，因此在成本和生產(chǎn)技術(shù)上要求比較高。另外，上述2種疫苗的主要缺點(diǎn)是需要冷凍保存，這樣既增加成本又影響有效壽命，尤其是影響其在發(fā)展中國家的推廣使用。而眾所周知，理想的疫苗應(yīng)具備的特征有：安全、廉價(jià)、熱穩(wěn)定性好、含有多種具有保護(hù)作用的免疫原，最好是一次口服即可生效。目前常規(guī)疫苗沒有一個(gè)能完全滿足上述標(biāo)準(zhǔn)。

對草魚開展抗病育種是防控草魚疾病發(fā)生的另一重要途徑，通過多年的探索，我國魚類遺傳改良工作者在草魚抗病育種方面積累了大量的科學(xué)資料，常規(guī)遺傳育種、細(xì)胞工程、基因工程等多方面的技術(shù)均在草魚抗病育種中有所涉及。常規(guī)育種策略是通過種群內(nèi)、間的抗病遺傳力的差異性雜交獲得抗病性較親本更強(qiáng)的子代，然后對子代進(jìn)行選種或者直接對單種群進(jìn)行自然壓力或人工飼養(yǎng)環(huán)境壓力選擇，選育出抗病力較強(qiáng)的個(gè)體作為繁殖核心群體的策略。在培育抗病草魚方面，由于草魚種內(nèi)品系少，育種工作者往往采用遠(yuǎn)源雜交以期獲得草魚抗病的優(yōu)勢后代。前期的雜交育種過程中，大多選用鯉魚、團(tuán)頭魴作為雜交的親本。長江水產(chǎn)研究所1973年首先將草魚和團(tuán)頭魴進(jìn)行人工雜交試驗(yàn)，取得了初步的成果；中國科學(xué)院水生生物研究所二室家魚小組1976年以草魚為母本，團(tuán)頭魴為父本，用理化方法誘導(dǎo)它們雜交，培育出了草魚型的三倍體、四倍體；吳維新等在1978年進(jìn)行興國紅鯉母本與草魚父本雜交獲得子一代雜交后代，再將雜交一代與草魚回交獲得三倍體草魚型雜種，并經(jīng)多年從雜交一代異源四倍體中選育出可育的二倍體83-2系抗病草魚；湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)肖調(diào)義等利用草魚和赤眼鱒雜交，獲得的子代抗草魚呼腸孤病毒的能力也優(yōu)于草魚?？共〔蒴~培育方面應(yīng)用的細(xì)胞工程技術(shù)主要集中于細(xì)胞核移植、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞染色體組操作等。張念慈等1990年利用體外長期培養(yǎng)的草魚體細(xì)胞作供體，在屬間和亞科間魚類上作核移植，得到不同發(fā)育期的胚胎；余來寧等1996年采用電融合與繼代移核相結(jié)合的方法，將具有抗性的草魚肝培養(yǎng)細(xì)胞核移植于草魚未受精卵內(nèi)，獲得了一批不同發(fā)育期的胚胎和仔魚；1981年張念慈等利用對呼腸孤病毒敏感的草魚吻端組織細(xì)胞株ZC7901 篩選出對草魚出血病病毒有一定抗性的亞株

遺憾的是，至今為止仍然沒有培育一個(gè)抗病草魚魚種品系。傳統(tǒng)育種方法受制于草魚育種周期較長，遠(yuǎn)緣雜交不育，而細(xì)胞工程和基因工程育種則多集中于基礎(chǔ)理論方面，育種技術(shù)尚不夠成熟。草魚抗病育種是一個(gè)長期的過程，結(jié)合傳統(tǒng)育種和各種現(xiàn)代生物技術(shù)方法，未來終將解決草魚抗病問題。