牛胚胎移植過(guò)程中的注意事項(xiàng)

韓永勝 佟桂芝 宋斌

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院 161005)

1 供 (受) 體的選擇

1.1 供體的選擇

在供體選擇上應(yīng)選擇健康強(qiáng)壯，性周期正常的個(gè)體。在選擇供體時(shí)，首先要考慮其能否提供優(yōu)質(zhì)的卵母細(xì)胞，這樣才能獲得優(yōu)質(zhì)的早期胚胎，提高母系遺傳物質(zhì)與受體之間建立信號(hào)通路的成功率，進(jìn)而提高后期著床率；青年牛超排效果好于成母牛。

1.2 受體牛的選擇

受體牛的選擇應(yīng)排除有遺傳疾病牛；淘汰有生殖疾病的受體母牛，如子宮內(nèi)膜炎、卵巢囊腫、子宮頸畸形等；淘汰過(guò)胖或過(guò)瘦的牛。購(gòu)買的受體牛做進(jìn)一步的獸醫(yī)檢查，凈化子宮，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，檢查生理狀況，受體牛的同期化處理。在選擇受體牛時(shí)還要根據(jù)胚胎的不同發(fā)育階段和不同發(fā)情、排卵時(shí)間靈活搭配，盡量縮短胚胎發(fā)育時(shí)期和受體牛子宮環(huán)境的同步差。

2 同期發(fā)情

一次前列腺素法：對(duì)處于發(fā)情周期第10 天左右的供、受體牛一次肌肉注射氯前列烯醇 2～4ml（0.32～0.64mg，按牛體重大小）誘導(dǎo)發(fā)情。

二次前列腺素法：注射一次氯前列烯醇2～4ml 后11d 左右再次肌注氯前列烯醇2～4m1。

陰道栓加前列腺素（CIDR+PG）法：在任意一天放入含有黃體酮的陰道栓，10d 左右取出陰道栓，同時(shí)肌注4m1 氯前列烯醇。

3 超數(shù)排卵

影響超數(shù)排卵的效果的因素如下：（1）排卵季節(jié)，最好選擇在秋冬季節(jié)。（2）選擇 2～6 胎的供體母牛。（3）一般最合適的時(shí)期在發(fā)情期后的第10～12 天。（4）正確使用生殖激素處理超排母牛。

4 人工授精

（1）母牛最佳配種期：發(fā)情后 6～12h。

外部表現(xiàn)：開始時(shí)精神不安、左右回顧、陰戶充血。中期食欲不振、哞叫、陰戶充血、腫脹。末期陰戶腫脹減退、稍有皺紋。

黏液情況：開始時(shí)少而薄、透明。中期多而薄、半透明、呈牽絲狀（吊線）。末期少而厚、透明、牽絲稍差、粘膠減退。

爬跨運(yùn)動(dòng)：開始時(shí)爬跨其他母牛，不接受其他母牛爬跨。中期接受其他母牛爬跨不動(dòng)，或互相爬跨。末期逃避爬跨、但有時(shí)仍爬跨其他母牛。

卵泡變化：開始時(shí)卵泡發(fā)育小，不明顯。中期卵泡大，膜薄，緊張而光滑。末期突出卵巢表面，水泡感明顯，一觸即破感。

由于母牛排卵不易掌握，最好采用重復(fù)配種的方法，即在發(fā)情癥狀明顯時(shí)配一次，過(guò)10h 后再重復(fù)配一次。

凍精的解凍溫度為38～42℃（一般控制在40℃）。

精液解凍時(shí)注意事項(xiàng)：取凍精時(shí)凍精離開液氮的時(shí)間不要太長(zhǎng)，不超過(guò)10s，且凍精不要超過(guò)瓶口；水溫要控制好，輸精解凍時(shí)水溫稍低，檢查時(shí)水溫可稍高；解凍時(shí)間不要太長(zhǎng)，10～15s，并要輕輕搖晃細(xì)管凍精；解凍后要擦干細(xì)管上的水，并檢查細(xì)管有無(wú)斷裂和破損。

（2）直腸把握輸精法。

輸精原則：慢插、適深、輕注、緩出、防流。

注意事項(xiàng)：插槍時(shí)先將輸精槍斜向上45°插入 10～15cm，再平行向前插入，直至子宮頸口，先勿將套管外的保護(hù)套除去，待輸精槍插入陰道后再去除，注意保護(hù)自身安全，避免被牛只踢傷。

人工授精技術(shù)不過(guò)關(guān)：主要在人工授精過(guò)程中操作不科學(xué)、不衛(wèi)生，配種時(shí)機(jī)掌握不好，直腸檢查技術(shù)不熟練，配種技術(shù)不高等。

5 胚胎采集

（1）牛麻醉要合適：用2%普魯卡因或利多卡因 5ml，在薦椎與第一尾椎結(jié)合處或第一尾椎與第二尾椎結(jié)合處施行硬膜外腔麻醉，以防止子宮頸緊縮及母牛努責(zé)不安。

（2）洗凈外陰部并進(jìn)行消毒處理。

（3）用擴(kuò)張棒擴(kuò)張子宮頸，用黏液抽吸棒抽吸子宮頸黏液。

6 胚胎鑒定

（1）正常發(fā)育胚胎透明帶完整，形態(tài)規(guī)則，色調(diào)均勻一致，透明度適中。根據(jù)胚胎發(fā)育階段及發(fā)育狀況劃分，胚胎質(zhì)量分為 A、B、C 和 D 4 個(gè)等級(jí)。只有 A、B 級(jí)胚胎可用于胚胎切割。

（2）檢胚要準(zhǔn)確、迅速。當(dāng)胚胎在操作過(guò)程時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)胚胎會(huì)產(chǎn)生過(guò)氧化物，從而影響胚胎質(zhì)量，還會(huì)影響胚胎后續(xù)的活力。

7 胚胎移植

胚胎發(fā)育期與受體子宮移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

桑葚胚（M）移植給發(fā)情時(shí)間為第 5～6 天受體（發(fā)情為0d）；早期囊胚（EB）移植給發(fā)情時(shí)間為第 5.5～6.5 天受體母牛；囊胚（B）移植給發(fā)情時(shí)間為第 6～7 天受體母牛；擴(kuò)張囊胚（EXB）移植給發(fā)情時(shí)間為第7～8 天受體母牛。

胚胎早期死亡多集中于妊娠早期，尤其是附植前后：牛15～25d。胚胎早期死亡后孕體完全被吸收，以后再發(fā)情時(shí)間與胚胎死亡時(shí)間有關(guān)。

內(nèi)分泌異常：雌激素、黃體酮作用于輸卵管平滑肌，調(diào)節(jié)受精卵運(yùn)行。如果二者比例失調(diào)，早期胚胎運(yùn)行速度異常，引起胚胎死亡。黃體酮分泌延遲，造成胚胎發(fā)育與子宮內(nèi)環(huán)境不能同步化，胚胎不能和附植，妊娠終止。

8 母牛的妊娠診斷

妊娠18～21d 一般不做檢查，主要根據(jù)母牛發(fā)情周期特點(diǎn)，如該牛沒有發(fā)情表現(xiàn)，則斷定其為妊娠，準(zhǔn)確率可達(dá)80%。

妊娠2 個(gè)月，直腸檢查，子宮角進(jìn)入腹腔，孕角較空角粗約一倍，而且較長(zhǎng)；孕角壁軟而薄，且有液體波動(dòng)。

妊娠3 個(gè)月及以上的牛孕角較空角大得多，直腸檢查很明顯，并隨著時(shí)間的推移可觸摸到胎兒。外部觀察：腹圍增大且不對(duì)稱，在妊娠后半期（5 個(gè)月左右）腹部出現(xiàn)不對(duì)稱，右側(cè)腹壁突出。8 個(gè)月以后右側(cè)腹壁可見到胎動(dòng)。

流產(chǎn)是指妊娠中后期胎兒或母體生理過(guò)程發(fā)生擾亂，它們之間的正常關(guān)系破壞，妊娠中斷，產(chǎn)出不足月的活胎兒或死胎。牛較多為自發(fā)性流產(chǎn)，特別是妊娠頭3 個(gè)月內(nèi)。

哺乳動(dòng)物的繁殖是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過(guò)程。上述一系列環(huán)節(jié)必須相互協(xié)調(diào)，其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)遭到擾亂或破壞，均可導(dǎo)致繁殖失敗。