夾層杯離心集菌涂片法檢測痰液抗酸桿菌的臨床應(yīng)用

嚴(yán) 玉 婷

(珠海市慢性病防治中心 珠海 519000)

肺結(jié)核(Tuberculosis, TB)是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，也是臨床常見的傳染性疾病之一[1]。近年來，結(jié)核病在青壯年的感染率呈明顯上升趨勢，并且絕大多數(shù)為無癥狀帶菌者，更易引起一定范圍內(nèi)的暴發(fā)流行，對人們的健康造成威脅[2]。目前臨床上對TB最基本的實(shí)驗(yàn)室檢測方法為痰涂片抗酸染色鏡檢抗酸桿菌，而用于涂片鏡檢的痰標(biāo)本多為即時痰，這可能導(dǎo)致抗酸桿菌的陽性檢出率較低[3]。因此，如何快速有效地提高抗酸桿菌的陽性檢測率，是結(jié)核病防治工作中需要解決的關(guān)鍵問題之一。 在本項(xiàng)研究中，將引進(jìn)的檢驗(yàn)新技術(shù)夾層杯集菌離心涂片法與直接涂片法和羅氏培養(yǎng)法做了檢驗(yàn)結(jié)果對比，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選擇2018年6月～2018年12月經(jīng)臨床確診的852例肺結(jié)核患者作為研究對象，所有病例均符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》中關(guān)于肺結(jié)核的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，分別收集入選研究對象的清晨痰、即時痰和夜間痰標(biāo)本各1份，收集于一次性無菌塑料瓶內(nèi)。

1.2 主要試劑盒儀器

采用的儀器為TQ 自動離心機(jī)、恒溫干片機(jī)、消化滅活液、彭氏夾層杯和抗酸染色液試劑盒等均購自湖南懷化天騎公司；改良羅氏培養(yǎng)基購自珠海銀科公司。

1.3 檢測方法

1.3.1直接涂片法

按照《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊 》[5]的規(guī)定進(jìn)行涂片、干燥和染色鏡檢。

1.3.2夾層杯集菌離心涂片法

將2倍體積的消化液加入裝有3～5ml痰標(biāo)本的彭氏杯中，旋渦振蕩3min，待完全消化后，將夾層杯移入TQ12離心機(jī)中，4500rpm/ min離心5min，移除上清液，用專用設(shè)備固定夾層杯并烘干表面水分(60 ℃，5 min烤片)， 滴加無水乙醇進(jìn)行固定。 按試劑盒操作說明書在夾層杯中進(jìn)行染色，染色結(jié)束后，用吸水紙印干表面水分，最后用取出夾層片置于載玻片上，注意確保涂菌面向下， 用中性膠封片，油鏡鏡檢。

1.3.3改良羅氏培養(yǎng)法

依據(jù)《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[6]，根據(jù)痰標(biāo)本的黏稠程度加入2～4倍量的4%氫氧化鈉，旋渦振蕩10～20s，直至標(biāo)本充分液化，離心管室溫靜置15min，然后加入磷酸鹽緩沖液至45ml，放入8℃～10℃低溫冷凍離心機(jī)，3000g離心15min，吸取前處理過的標(biāo)本0.1ml，接種于中性改良羅氏培養(yǎng)基，置于37 ℃孵箱中培養(yǎng)，若發(fā)現(xiàn)菌落生長，可經(jīng)抗酸染色證實(shí)是否為抗酸桿菌。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本項(xiàng)研究中的所有數(shù)據(jù)均在專業(yè)統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0中進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用例表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種方法對抗酸桿菌檢測陽性率之間的比較

夾層杯法、直接涂片法和改良羅氏培養(yǎng)法檢測852例晨痰標(biāo)本的陽性率分別為31.2%、19.3%和32.6%, 夾層杯法和改良羅氏培養(yǎng)法的陽性率明顯高于直接涂片法(P<0.01)；與改良羅氏培養(yǎng)法相比無明顯差異(χ2=0.46,P>0.05)，見表1。

表1 3種方法對抗酸桿菌檢測陽性率之間的比較(n=852)

2.2 3種方法對不同時間的痰標(biāo)本的抗酸桿菌陽性檢出率之間的比較

采用夾層杯法檢出的265例陽性痰液標(biāo)本中，晨痰占比43.8%(116/265)，夜間痰占比26.0%(69/265)，其他時段痰液占比30.2%(80/265)。改良羅氏培養(yǎng)法檢出的278例陽性痰液標(biāo)本中，晨痰占比44.3%(123/278)，夜間痰占比26.6%(74/278)，其他時段痰液占比29.1%(81/278)。直接涂片法檢出的132例陽性痰液標(biāo)本中，晨痰占比46.9%(62/132)，夜間痰占比27.3%(36/132)，其他時段痰液占比25.8%(34/132)。3種方法均以晨痰的陽性檢出率最高，夾層杯法對不同時間痰標(biāo)本的檢出率與改良羅氏培養(yǎng)法無統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

3 討論

痰結(jié)核菌檢查為目前臨床診斷肺結(jié)核的主要依據(jù)，同時也是評價療效的重要指標(biāo)[7]，而痰涂片抗酸染色鏡檢抗酸桿菌陽性為診斷TB的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于直接痰涂片法對抗酸桿菌的檢測陽性率較低，給臨床工作者鑒別和診斷肺結(jié)核帶來一定困難。與傳統(tǒng)的直接涂片法相比，夾層杯集菌離心涂片法具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)使用的標(biāo)本量明顯大于直接涂片法，克服了直接涂片法取材不當(dāng)?shù)娜毕?，更符合我國TB控制策略；(2)實(shí)驗(yàn)操作在彭氏杯中進(jìn)行，減少了標(biāo)本暴露, 同時60℃的烤片過程能夠有效地殺滅結(jié)核分枝桿菌, 提高了實(shí)驗(yàn)生物安全水平；(3)所需設(shè)備簡單，檢測價格低，容易標(biāo)準(zhǔn)化，便于開展。在本項(xiàng)研究中，夾層杯法對抗酸桿菌的陽性檢出率明顯高于直接涂片法(P<0.05)，與改良羅氏培養(yǎng)法相比無明顯差異(P>0.05)，提示以改良羅氏培養(yǎng)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，夾層杯法仍具有較高的特異性和陽性檢測值。因此，對于疑似TB的患者，可以考慮先用夾層杯法進(jìn)行初篩，同時聯(lián)合結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，對于夾層杯檢測陽性者可考慮提前用藥，待培養(yǎng)加藥敏結(jié)果出來后再調(diào)整用藥方案，這也為患者的及時有效治療提供了可靠保證。

留取合格的痰標(biāo)本是提高結(jié)核桿菌檢出率的重要條件之一，本研究發(fā)現(xiàn)，不同時間段的痰標(biāo)本其痰結(jié)核桿菌陽性檢出率不同。分別選用夾層杯離心集菌涂片、直接涂片法和改良羅氏培養(yǎng)法對852份痰液標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種方法均以晨痰的陽性檢出率最高，提示在進(jìn)行抗酸桿菌檢驗(yàn)中應(yīng)選取患者晨痰以確保檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，其原因可能是由于清晨患者更容易從肺深部咳出血痰和膿性痰，因而更易檢出抗酸桿菌。

綜合以上結(jié)果，夾層杯離心集菌涂片法的操作簡單、省時且抗酸桿菌的陽性檢出率高，與改良羅氏培養(yǎng)法相比有較好的符合率，在臨床上值得推廣應(yīng)用，并且應(yīng)強(qiáng)調(diào)收集晨痰送檢。