• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    外泌體作為溫郁金活性成分姜黃素載體的研究進(jìn)展

    2020-12-17 18:09:43郭月琴趙祺袁瑋姜程曦
    園藝與種苗 2020年2期
    關(guān)鍵詞:研究

    郭月琴,趙祺,2#,袁瑋,姜程曦,3*

    (1.溫州大學(xué)生命科學(xué)研究院,浙江溫州325035;2.大理藥業(yè)股份有限公司,云南大理671000;

    3.浙江省生物醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心,浙江溫州325035)

    外泌體作為細(xì)胞自身分泌的囊泡,是細(xì)胞間信息交換的重要載體。外泌體由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu),具有低免疫原性、先天穩(wěn)定性、靶向性、高傳遞效率和血腦屏障(BBB)能力、良好的生物相容性及無病毒載體等優(yōu)點(diǎn),成為天然的內(nèi)源性藥物載體,具有廣闊的應(yīng)用前景[1],目前已有臨床試驗(yàn)驗(yàn)證了外泌體治療疾病的安全性[2]。溫郁金的主要化學(xué)成分有揮發(fā)油、姜黃素類、生物堿、多糖等[3],姜黃素作為中藥溫郁金的活性成分之一,因其廣泛而明確的藥理作用成為現(xiàn)代藥理研究的熱點(diǎn),但由于姜黃素溶解度差、結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、體內(nèi)代謝過程快,生物利用度低,嚴(yán)重限制了其臨床推廣應(yīng)用[4]。而利用外泌體這種新型載藥途徑,能更好地將其有效成分遞送至靶細(xì)胞。該文就外泌體作為姜黃素載體的最新研究進(jìn)行綜述,旨在為姜黃素新藥的開發(fā)提供參考。

    1 外泌體生物學(xué)特性

    1.1 生成與組成

    外泌體是細(xì)胞通過內(nèi)吞—融合—外排等一系列生物學(xué)機(jī)制產(chǎn)生,并通過主動分泌作用排出細(xì)胞外的囊性小泡,其本質(zhì)是脂質(zhì)雙分子層[5]。幾乎所有細(xì)胞都能分泌外泌體,并且廣泛存在于人體的各種體液中。外泌體的細(xì)胞來源,以及其內(nèi)部的蛋白質(zhì)含量決定了其密度。一般來說,外泌體的分子直徑約為25~95 nm。外泌體形態(tài)呈杯型或雙凹碟型,但在人體體液中呈球狀[6]。由于外泌體的微泡結(jié)構(gòu)為其內(nèi)在的小分子提供了一個(gè)安全穩(wěn)定的環(huán)境,同時(shí)這些信號小分子利用循環(huán)系統(tǒng)在胞間信號交換發(fā)揮重要作用,這讓外泌體表現(xiàn)出一個(gè)成熟、穩(wěn)定的信號傳輸系統(tǒng)[7]。因此,外泌體是理想的細(xì)胞間信息傳遞媒介。

    外泌體的組成可以通過形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)闡述。形態(tài)學(xué)方面,通過電子顯微鏡觀察外泌體持續(xù)不斷地在核內(nèi)體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中形成一種小囊泡,即核內(nèi)體,隨著早期核內(nèi)體成熟,逐漸變成具有管腔結(jié)構(gòu)的晚期核內(nèi)體,晚期核內(nèi)體局部膜內(nèi)陷芽生狀態(tài)后,隨機(jī)吞噬部分細(xì)胞質(zhì)中的成分,形成多囊泡體,通過與漿膜融合,局部內(nèi)陷以胞外分泌途徑釋放[8]。生物化學(xué)方面,現(xiàn)普遍認(rèn)為外泌體由蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)分子等構(gòu)成,其中常見的標(biāo)記蛋白如:CD9、CD63、CD81、CD82 等;與MVB 形成相關(guān)的蛋白如Alix、TSG101 以及胞質(zhì)熱休克蛋白Hsp70、Hsp90 等[9-10]。外泌體中的核酸[11]包括mRNA、microRNA(miRNA)、其他非編碼RNA 以及DNA 等。

    1.2 功能及臨床研究

    外泌體的生理學(xué)功能多種多樣,由其來源細(xì)胞決定。研究發(fā)現(xiàn),外泌體攜帶有DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等[12],主要通過“穿梭RNA”[13]和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[14]發(fā)揮重要作用。外泌體含有豐富的生物信息物質(zhì),具有在細(xì)胞間傳遞生物信息的獨(dú)特功能[15],而經(jīng)由不同細(xì)胞分泌的外泌體含有不同的生物學(xué)功能。最開始認(rèn)為外泌體[16]是作為攜帶抗原的載體并將抗原呈遞給T 細(xì)胞進(jìn)而發(fā)揮作用,后來發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞間信息交流方面[17]也至關(guān)重要。如免疫調(diào)節(jié)[18]、增殖分化[19]、細(xì)胞遷移[20]、組織損傷修復(fù)[21]等。其作用機(jī)制主要分為4 個(gè)方面[22]:①外泌體作為一種信號物質(zhì)直接作用于受體細(xì)胞;②外泌體將特異性傳染顆?;蚬δ苄缘鞍踪|(zhì)傳遞給受體細(xì)胞;③外泌體通過mRNA、microRNA 等物質(zhì)進(jìn)行遺傳信息的呈遞;④外泌體可直接在細(xì)胞間進(jìn)行受體轉(zhuǎn)移;而此時(shí)外泌體進(jìn)入受體細(xì)胞后,通過指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄和翻譯,對蛋白進(jìn)行修飾和定位,并通過一系列過程進(jìn)而影響受體細(xì)胞的細(xì)胞表型及生物功能。

    外泌體作為藥物的載體正在引起越來越多研究者的關(guān)注。目前外泌體的臨床研究主要針對miRNA和mRNA 等基因類[23]、多柔比星等抗腫瘤藥物[24]及增強(qiáng)免疫功能的特定蛋白質(zhì)等[25]藥物。而近年來外泌體作為中藥的載體成為現(xiàn)代藥理研究的熱點(diǎn)。Zhang 等[26]利用乳腺癌耐藥細(xì)胞株與負(fù)載β-欖香烯的外泌體(50 μmol/L,30 h)共培養(yǎng),分析發(fā)現(xiàn)負(fù)載β-欖香烯的外泌體上調(diào)了耐藥細(xì)胞中miR-34a 及其靶基因PTEN的表達(dá),并下調(diào)耐藥miR-452 和多藥耐藥基因蛋白P-gp 的表達(dá),負(fù)載β-欖香烯的外泌體能明顯逆轉(zhuǎn)乳腺癌的耐藥性。Zhang XY 等[27]研究證明,梓醇能通過外泌體途徑將有效成分運(yùn)送至神經(jīng)細(xì)胞中起到神經(jīng)保護(hù)作用。Gao F 等[28]研究利用大鼠MSC 來源外泌體作為補(bǔ)陽還五湯有效成分的載體,在采用線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型中進(jìn)行腹膜注射,發(fā)現(xiàn)能通過調(diào)節(jié)相應(yīng)miRNAs 促進(jìn)缺血區(qū)腦血管生成,改善缺血癥狀。因此,通過將外泌體和中藥有效成分結(jié)合,利用外泌體等更加有效的載藥方式實(shí)現(xiàn)對傳統(tǒng)藥物有效成分的精確遞送,對傳統(tǒng)藥物發(fā)揮更好的臨床療效具有深遠(yuǎn)的意義。

    2 外泌體作為姜黃素載體的作用

    姜黃素(curcumin)是中藥溫郁金的活性成分之一,是由一個(gè)多酚類化合物,具有β-二酮的庚二烯與2 個(gè)鄰甲基化的酚相連組成的對稱分子結(jié)構(gòu)。將外泌體與姜黃素結(jié)合,可以使姜黃素的抗腫瘤、抗炎、抗抑郁、神經(jīng)保護(hù)及其他藥理作用增強(qiáng),為研發(fā)新藥提供依據(jù)。

    2.1 抗腫瘤

    姜黃素的抗腫瘤作用機(jī)制已經(jīng)證實(shí)是通過調(diào)節(jié)miRNA 表達(dá)(例如miR-1、miR7、mi-9、mi-34 a、miR181、miR21 和mi-19),抑制腫瘤細(xì)胞的增生、擴(kuò)散,增強(qiáng)機(jī)體對細(xì)胞的敏感性,提高對腫瘤的殺滅作用[29]。姜黃素結(jié)合外泌體在腫瘤中的研究比較深入,可以促進(jìn)姜黃素的抗腫瘤作用。體內(nèi)研究中,Aqil F 等[30]研究發(fā)現(xiàn),大鼠中口服外泌體姜黃素(EXOCUR)在各器官與游離劑之間表現(xiàn)出3~5 倍的高水平,與游離姜黃素相比,EXOCU 對多種癌細(xì)胞系(包括乳腺癌、肺癌和宮頸癌)具有增強(qiáng)的抗增殖活性,EXOCUR對宮頸癌異種移植物有明顯的抑制作用(61.0%,P<0.01)。這些結(jié)果表明,外泌體可以發(fā)展為潛在的納米載體,用于傳遞姜黃素,可以顯著提高姜黃素的組織生物利用度問題。體外研究中,Osterman CJ 等[31]研究使用體外胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1 和MIC-PACA-2 的細(xì)胞培養(yǎng)模型,姜黃素被結(jié)合到從姜黃素處理的胰腺癌細(xì)胞中分離的外泌體中,此外,姜黃素通過外泌體遞送到受體胰腺癌細(xì)胞,促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞毒性,表明姜黃素的抗腫瘤作用通過外泌子載體在胰腺癌細(xì)胞中得到增強(qiáng)。Mirzaei H 等[32]用外泌體的靶向作用將不同劑量的姜黃素釋放到癌細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)這些外泌體可誘導(dǎo)受體細(xì)胞的抗癌特性,減少腫瘤的生長。因此,含有姜黃素的外泌體可以作為癌癥治療的有力工具。Wu H 等[33]用姜黃素預(yù)處理的人肺癌細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體作用于人正常肺上皮細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)隨著姜黃素的劑量增加,Turf21 的表達(dá)也增加,證明了姜黃素通過下調(diào)DNMT1,上調(diào)TCF21 發(fā)揮其抗癌作用。Zhang HG 等[34]研究表明,姜黃素預(yù)處理的腫瘤細(xì)胞中分離的腫瘤外泌體具有抑制IL-2 刺激的NK 細(xì)胞細(xì)胞毒性的作用。

    外泌體作為姜黃素載體的體內(nèi)研究和體外研究表明,外泌體可以作為姜黃素載體,姜黃素通過外泌體遞送到受體胰腺癌、肺癌和宮頸癌等腫瘤細(xì)胞,促進(jìn)癌細(xì)胞毒性,減少腫瘤的生長。外泌體與姜黃素的結(jié)合比游離姜黃素的抗腫瘤作用提高了3~5 倍,提高了姜黃素的生物利用度,為開發(fā)新型抗腫瘤藥提供數(shù)據(jù)支撐。

    2.2 抗炎

    姜黃素的抗炎作用機(jī)制是通過抑制MAPK /NFκB 信號通路,減少炎性介質(zhì)產(chǎn)生、下調(diào)COX-2 脂肪氧化酶活性[35],進(jìn)而減少炎癥細(xì)胞因子釋放等多種途徑發(fā)揮顯著的抗炎效應(yīng)。體外研究中,Vashisht M等[36]通過建立水牛顆粒細(xì)胞炎癥模型,發(fā)現(xiàn)姜黃素(20 μμm)誘導(dǎo)水牛顆粒細(xì)胞釋放的外泌體,增加促炎性細(xì)胞因子基因(IL-1β、TNF-α、IL-6)的表達(dá),抑制CYP19A1基因的表達(dá)和雌二醇的產(chǎn)生,減輕LPS 介導(dǎo)的炎癥,表明外泌體外泌體負(fù)載的姜黃素可以從基因?qū)用嬉种蒲装Y。Aqil F 等[30]研究發(fā)現(xiàn),外泌體姜黃素在人肺和乳腺癌細(xì)胞中可以活化NF-κB,具有顯著的抗炎活性。Zhang HG 等[37]表明了外泌體具有目標(biāo)特異性,姜黃素活性的提高是通過外泌體將姜黃素引導(dǎo)到炎性細(xì)胞與治療性的,證實(shí)了由外泌體遞送的姜黃素在血液中更穩(wěn)定和更高度集中。因此,使用外來體作為藥物載體的特異性為許多炎癥相關(guān)疾病的治療創(chuàng)造了機(jī)會。Huang NP 等[38]在短暫性大腦中動脈閉塞(MCAO) 小鼠模型中,工程化C(RGDYK)結(jié)合的外泌體(cRGD Exo)靶向缺血腦損傷區(qū)域。當(dāng)姜黃素被加載到外泌體上時(shí),發(fā)現(xiàn)在病變區(qū)域中炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡具有強(qiáng)烈的抑制作用,結(jié)果表明基于外泌體的缺血性腦靶向遞送載體,為功能化外泌體的快速和大規(guī)模生產(chǎn)提供了策略。

    在外泌體載體的結(jié)合下,體外研究表明姜黃素通過外泌體的靶向性,使姜黃素在血液中更穩(wěn)定和更高度集中,其抗炎活性更顯著。而關(guān)于外泌體作為姜黃素載體的體內(nèi)研究有待完善,以提供外泌體負(fù)載的姜黃素抗炎作用的數(shù)據(jù)支撐。

    2.3 抗抑郁

    姜黃素的抗抑郁作用可能與甘油磷脂代謝、亞油酸代謝、戊糖和葡糖醛酸酯和醚脂代謝有關(guān)[39],但今后仍需進(jìn)一步探索。Canfrán-Duque A 等[40-41]用抗精神病藥物或安慰劑和DII 標(biāo)記的低密度脂蛋白治療HepG2 肝癌細(xì)胞18 h,然后浸潤在姜黃素中。2 h后,分別收集細(xì)胞和培養(yǎng)基,并用于生化分析、電鏡和免疫細(xì)胞化學(xué),通過超速離心法從培養(yǎng)基中分離出外泌體。研究發(fā)現(xiàn),姜黃素可以刺激外泌體釋放,除去積累在溶酶體小室內(nèi)的膽固醇,減輕膽固醇、鞘磷脂和鞘糖脂的積累,減少因藥物不良反應(yīng)造成的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,維持細(xì)胞內(nèi)膽固醇平衡,有助于最小化抗精神病藥物治療的不良代謝影響,表明外泌體可能會有利于姜黃素的抗精神病作用。

    關(guān)于外泌體作為姜黃素載體的抗抑郁作用研究尚屬空白,不過已經(jīng)證實(shí)姜黃素可以刺激外泌體釋放,減輕膽固醇、鞘磷脂和鞘糖脂的積累,有助于最小化抗精神病藥物治療的不良代謝影響,表明外泌體可能會有利于姜黃素的抗精神病作用,為以后外泌體作為姜黃素載體的抗抑郁作用研究提供佐證。

    2.4 神經(jīng)保護(hù)

    姜黃素已發(fā)現(xiàn)在許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病中起保護(hù)作用,然而,其在創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)中的作用和潛在的分子機(jī)制尚不完全清楚,可能通過激活Nrf2 通路,增加抗氧化酶活性,從而減輕腦損傷[42]。體外研究中,Chaturvedi P 等[43]將同型半胱氨酸治療的內(nèi)皮細(xì)胞用作血腦屏障破壞的模型,利用外泌體負(fù)載的姜黃素檢查其減輕內(nèi)皮細(xì)胞破壞的潛力。研究發(fā)現(xiàn),負(fù)載姜黃素的外泌體通過減少氧化應(yīng)激和減輕受損的連接蛋白介導(dǎo)的緊密連接,從而改善小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞同型半胱氨酸的神經(jīng)毒性,調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的滲透性。Chaturvedi P 等[44]用胚胎干細(xì)胞外泌體負(fù)載的姜黃素可以減少炎癥,減輕星形膠質(zhì)細(xì)胞和GFAPN-甲基-D-天門冬氨酸受體表達(dá),有助于小鼠缺血再灌注損傷后的神經(jīng)血管修復(fù)。

    在外泌體載體的結(jié)合下,體外研究表明姜黃素通過減少氧化應(yīng)激和減輕受損的連接蛋白介導(dǎo)的緊密連接,從而降低同型半胱氨酸的神經(jīng)毒性。而關(guān)于外泌體作為姜黃素載體的體內(nèi)研究有待完善,分子機(jī)制也尚不完全清楚,還需要深入進(jìn)行姜黃素與外泌體結(jié)合的神經(jīng)保護(hù)作用相關(guān)研究,以提供外泌體負(fù)載的姜黃素抗炎作用的數(shù)據(jù)支撐。

    2.5 其他作用

    研究發(fā)現(xiàn),利用外泌體作為姜黃素的藥物載體,姜黃素在體內(nèi)的濃度、藥物穩(wěn)定性隨之增加,提高了藥物療效并且沒有明顯的不良反應(yīng)[45]。Vashisht M 等[46]在體外研究中,利用腸道Caco-2 細(xì)胞模型模擬人體消化過程,研究了游離姜黃素和外泌體負(fù)載的姜黃素在PBS 緩沖液和體外消化過程中的穩(wěn)定性,發(fā)現(xiàn)牛奶外泌體負(fù)載的姜黃素相較于游離姜黃素在PBS中具有更高的穩(wěn)定性,持續(xù)苛刻的消化過程,并且可以跨越腸屏障。簡而言之,姜黃素包合到外泌體中提高了其穩(wěn)定性、溶解度和生物利用度。

    3 展望

    在中醫(yī)藥發(fā)展大勢下,通過天然產(chǎn)物開發(fā)新藥是中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)走向世界的趨勢。姜黃素具有的抗腫瘤、抗抑郁、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等作用非常具有臨床價(jià)值,但由于其生物利用度低,限制了其臨床應(yīng)用。通過外泌體作為姜黃素的載體,可以提高抗腫瘤、抗抑郁、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等藥理作用,并顯著提高姜黃素的抗腫瘤作用。因此,未來可以嘗試研發(fā)外泌體作為姜黃素載體的藥物作為新型抗腫瘤藥物。關(guān)于姜黃素與外泌體結(jié)合的抗抑郁研究尚屬空白,抗抑郁和神經(jīng)保護(hù)分子作用機(jī)制尚不清楚,這是今后仍需深入研究的著力點(diǎn)。

    猜你喜歡
    研究
    FMS與YBT相關(guān)性的實(shí)證研究
    2020年國內(nèi)翻譯研究述評
    遼代千人邑研究述論
    視錯(cuò)覺在平面設(shè)計(jì)中的應(yīng)用與研究
    科技傳播(2019年22期)2020-01-14 03:06:54
    關(guān)于遼朝“一國兩制”研究的回顧與思考
    EMA伺服控制系統(tǒng)研究
    基于聲、光、磁、觸摸多功能控制的研究
    電子制作(2018年11期)2018-08-04 03:26:04
    新版C-NCAP側(cè)面碰撞假人損傷研究
    關(guān)于反傾銷會計(jì)研究的思考
    焊接膜層脫落的攻關(guān)研究
    電子制作(2017年23期)2017-02-02 07:17:19
    中亚洲国语对白在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 成在线人永久免费视频| 在线天堂中文资源库| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产成人影院久久av| 视频区图区小说| 亚洲avbb在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| av免费在线观看网站| 亚洲全国av大片| 久久亚洲精品不卡| 久久久国产精品麻豆| 视频在线观看一区二区三区| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 中文欧美无线码| 99热网站在线观看| 亚洲国产av新网站| 国产亚洲欧美精品永久| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲avbb在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲专区字幕在线| 久久久精品区二区三区| 国产在线一区二区三区精| 天天影视国产精品| 日韩三级视频一区二区三区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品福利永久在线观看| av福利片在线| 91麻豆av在线| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲专区字幕在线| 亚洲三区欧美一区| tube8黄色片| av有码第一页| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲av成人一区二区三| 久久精品国产a三级三级三级| 五月开心婷婷网| 在线观看免费午夜福利视频| 91九色精品人成在线观看| 国产在线一区二区三区精| 亚洲av电影在线进入| 午夜老司机福利片| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久影院123| 亚洲专区国产一区二区| 免费在线观看完整版高清| 嫁个100分男人电影在线观看| 高清在线国产一区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 中文字幕高清在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 青草久久国产| 精品高清国产在线一区| 日本欧美视频一区| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 满18在线观看网站| 欧美大码av| 久久久精品区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| av网站在线播放免费| www日本在线高清视频| 在线观看一区二区三区激情| 久久精品成人免费网站| 91老司机精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产激情久久老熟女| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 91国产中文字幕| xxxhd国产人妻xxx| av天堂在线播放| 香蕉丝袜av| 大码成人一级视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品国产乱码久久久久久小说| 99国产精品99久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产不卡av网站在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 丰满少妇做爰视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产黄色免费在线视频| 色视频在线一区二区三区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 午夜福利在线免费观看网站| 午夜久久久在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 色综合欧美亚洲国产小说| 久久av网站| 国产成人影院久久av| 久久久久久久久免费视频了| 97在线人人人人妻| 欧美精品一区二区大全| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久久水蜜桃国产精品网| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人手机av| 99国产精品99久久久久| 波多野结衣av一区二区av| 天天操日日干夜夜撸| 制服人妻中文乱码| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 九色亚洲精品在线播放| 色94色欧美一区二区| 各种免费的搞黄视频| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产一区二区三区av在线| 美女福利国产在线| 国产在线观看jvid| 波多野结衣一区麻豆| 大片免费播放器 马上看| 午夜影院在线不卡| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲一区中文字幕在线| 在线天堂中文资源库| 桃花免费在线播放| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 五月开心婷婷网| 久久久久视频综合| 不卡一级毛片| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产高清国产精品国产三级| 新久久久久国产一级毛片| 美女大奶头黄色视频| 午夜免费鲁丝| 亚洲成人免费av在线播放| 男女边摸边吃奶| 黄色a级毛片大全视频| 97在线人人人人妻| 大香蕉久久成人网| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产在线视频一区二区| 欧美中文综合在线视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲精华国产精华精| 看免费av毛片| 美女中出高潮动态图| 人成视频在线观看免费观看| 人人妻人人澡人人看| 国产又色又爽无遮挡免| 青春草视频在线免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 视频在线观看一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产成人a∨麻豆精品| 国产一级毛片在线| 精品人妻在线不人妻| 丝袜美腿诱惑在线| 操出白浆在线播放| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩一区二区三区影片| 青春草视频在线免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人国语在线视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 五月开心婷婷网| 欧美日韩福利视频一区二区| 中文字幕av电影在线播放| 婷婷色av中文字幕| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 爱豆传媒免费全集在线观看| 免费在线观看日本一区| 曰老女人黄片| 一个人免费看片子| 青春草视频在线免费观看| 捣出白浆h1v1| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美成人午夜精品| 免费在线观看完整版高清| 免费高清在线观看视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲精品第二区| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产精品一区二区在线观看99| 一区二区av电影网| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜免费成人在线视频| 99国产综合亚洲精品| 两人在一起打扑克的视频| 免费日韩欧美在线观看| 美女中出高潮动态图| 麻豆国产av国片精品| 亚洲一区中文字幕在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久精品成人免费网站| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲第一av免费看| 免费在线观看黄色视频的| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 啦啦啦视频在线资源免费观看| avwww免费| 女警被强在线播放| 婷婷成人精品国产| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久精品国产综合久久久| 亚洲av美国av| 久久久久精品国产欧美久久久 | 美女主播在线视频| 午夜激情av网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产一区二区 视频在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久9热在线精品视频| 亚洲一区中文字幕在线| 丝袜美腿诱惑在线| 99国产精品99久久久久| 在线精品无人区一区二区三| 美女扒开内裤让男人捅视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黄片大片在线免费观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 成在线人永久免费视频| 国产1区2区3区精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 极品人妻少妇av视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 美女大奶头黄色视频| 国产成人a∨麻豆精品| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲综合色网址| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产成人影院久久av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 免费在线观看日本一区| 高清视频免费观看一区二区| 国产高清videossex| 丝袜喷水一区| 视频区图区小说| 韩国高清视频一区二区三区| 永久免费av网站大全| 黑人操中国人逼视频| 国产av一区二区精品久久| 嫁个100分男人电影在线观看| videosex国产| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩中文字幕视频在线看片| 不卡av一区二区三区| 一区福利在线观看| 黄片大片在线免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产免费福利视频在线观看| 国产片内射在线| 亚洲精品中文字幕在线视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 久热爱精品视频在线9| 十八禁网站网址无遮挡| 国产一区二区在线观看av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲精品一二三| bbb黄色大片| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲av美国av| 操出白浆在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| 一级,二级,三级黄色视频| 不卡av一区二区三区| 一个人免费在线观看的高清视频 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲黑人精品在线| 岛国在线观看网站| 纵有疾风起免费观看全集完整版| a级毛片黄视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 成年人免费黄色播放视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产xxxxx性猛交| 国产97色在线日韩免费| 精品亚洲成国产av| 一本色道久久久久久精品综合| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久这里只有精品19| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 99精品久久久久人妻精品| 一边摸一边做爽爽视频免费| 1024视频免费在线观看| 秋霞在线观看毛片| 黄片大片在线免费观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩人妻精品一区2区三区| 一级片'在线观看视频| 电影成人av| 国产麻豆69| 黄色毛片三级朝国网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 黄片大片在线免费观看| av国产精品久久久久影院| 午夜视频精品福利| 国产在线视频一区二区| 夜夜夜夜夜久久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 在线精品无人区一区二区三| av片东京热男人的天堂| 狂野欧美激情性bbbbbb| 美女高潮到喷水免费观看| 精品欧美一区二区三区在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 捣出白浆h1v1| 日韩中文字幕视频在线看片| 性色av一级| 日韩欧美免费精品| 两个人看的免费小视频| 免费黄频网站在线观看国产| 久久精品亚洲av国产电影网| 丰满少妇做爰视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久久久网色| www.av在线官网国产| 久久热在线av| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲国产精品一区三区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 丁香六月欧美| 免费高清在线观看日韩| 91九色精品人成在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 国产亚洲精品一区二区www | 亚洲国产看品久久| 欧美另类一区| 久久久欧美国产精品| 免费av中文字幕在线| 午夜免费观看性视频| √禁漫天堂资源中文www| 欧美黑人精品巨大| 99久久国产精品久久久| 制服人妻中文乱码| 最新在线观看一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美黄色片欧美黄色片| 99热国产这里只有精品6| 我要看黄色一级片免费的| 精品视频人人做人人爽| 成人手机av| 国产成+人综合+亚洲专区| 99精品欧美一区二区三区四区| 桃花免费在线播放| 激情视频va一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久久久久久精品精品| avwww免费| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产视频一区二区在线看| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久99热这里只频精品6学生| 成年动漫av网址| 精品久久久久久电影网| 欧美日韩黄片免| 一级片免费观看大全| 国产在视频线精品| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 新久久久久国产一级毛片| 激情视频va一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产成人av教育| 日本vs欧美在线观看视频| 久久久久久久精品精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲成国产人片在线观看| 午夜免费成人在线视频| 美女主播在线视频| 一二三四在线观看免费中文在| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 蜜桃在线观看..| av一本久久久久| 日韩电影二区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产一区有黄有色的免费视频| 99热网站在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 最黄视频免费看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久人妻熟女aⅴ| 窝窝影院91人妻| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品国产一区二区久久| 激情视频va一区二区三区| 欧美在线一区亚洲| 国产亚洲精品一区二区www | 精品少妇久久久久久888优播| 午夜免费观看性视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 这个男人来自地球电影免费观看| av不卡在线播放| 久久精品人人爽人人爽视色| 天堂8中文在线网| 他把我摸到了高潮在线观看 | 黄色a级毛片大全视频| 另类亚洲欧美激情| 午夜激情久久久久久久| 午夜福利视频在线观看免费| 男人操女人黄网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99热网站在线观看| 久久亚洲精品不卡| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 热99国产精品久久久久久7| a级毛片在线看网站| 热re99久久精品国产66热6| 一进一出抽搐动态| 啦啦啦免费观看视频1| 国产片内射在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 中文字幕高清在线视频| 大型av网站在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产精品欧美亚洲77777| 深夜精品福利| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产在线观看jvid| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区免费欧美 | 手机成人av网站| 十八禁人妻一区二区| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲精品乱久久久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 热re99久久国产66热| 欧美xxⅹ黑人| 激情视频va一区二区三区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 男人添女人高潮全过程视频| 国产精品一区二区免费欧美 | av免费在线观看网站| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲精品一区蜜桃| svipshipincom国产片| 十八禁网站免费在线| 91九色精品人成在线观看| 美女大奶头黄色视频| 丝袜在线中文字幕| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 热99久久久久精品小说推荐| 国产成人a∨麻豆精品| 久久99一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 国产区一区二久久| 亚洲精品一二三| 精品高清国产在线一区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲男人天堂网一区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品福利永久在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲综合色网址| 国产精品二区激情视频| 亚洲精品国产av成人精品| 国产黄色免费在线视频| 久久精品国产a三级三级三级| 桃花免费在线播放| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 又黄又粗又硬又大视频| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 岛国在线观看网站| 男女之事视频高清在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 啦啦啦 在线观看视频| 在线观看免费高清a一片| 在线精品无人区一区二区三| 黑人欧美特级aaaaaa片| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲国产精品成人久久小说| 久久99一区二区三区| 久久久久网色| 一级片免费观看大全| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 精品一区二区三卡| 男女免费视频国产| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 黄片小视频在线播放| 9色porny在线观看| 亚洲国产精品999| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国产亚洲一区二区精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 桃红色精品国产亚洲av| 丝袜在线中文字幕| 在线观看免费午夜福利视频| www.自偷自拍.com| 色婷婷av一区二区三区视频| 波多野结衣av一区二区av| 人妻久久中文字幕网| 日韩欧美一区视频在线观看| 精品一区在线观看国产| 亚洲av美国av| 脱女人内裤的视频| 久久久国产精品麻豆| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久中文字幕一级| a 毛片基地| 视频区图区小说| av视频免费观看在线观看| 丝袜美足系列| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 丁香六月天网| 黄色怎么调成土黄色| 满18在线观看网站| 成年av动漫网址| www.熟女人妻精品国产| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲精品国产区一区二| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久久国产精品麻豆| 99热全是精品| 少妇的丰满在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 美女国产高潮福利片在线看| 热99re8久久精品国产| 蜜桃在线观看..| 又黄又粗又硬又大视频| 久久久国产成人免费| 在线观看免费视频网站a站| 99久久综合免费| 一区二区三区精品91| 搡老岳熟女国产| 久久 成人 亚洲| 这个男人来自地球电影免费观看| 无遮挡黄片免费观看| 我的亚洲天堂| 美女大奶头黄色视频| 午夜免费成人在线视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲美女黄色视频免费看| 人妻人人澡人人爽人人| 后天国语完整版免费观看| 成年动漫av网址| 99九九在线精品视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 精品视频人人做人人爽| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品成人在线| 亚洲第一av免费看| 精品高清国产在线一区| 在线观看免费日韩欧美大片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产真人三级小视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 真人做人爱边吃奶动态| 大香蕉久久成人网| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成年人黄色毛片网站| 欧美黑人精品巨大| 国产在视频线精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲成人国产一区在线观看| 一本综合久久免费| 中亚洲国语对白在线视频| 老汉色∧v一级毛片| 日本av免费视频播放| 亚洲欧洲日产国产| 国产欧美日韩一区二区三 | 亚洲精品久久午夜乱码| 日韩视频一区二区在线观看| 一本久久精品| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产视频一区二区在线看|