野豬非洲豬瘟的防控及疫苗研發(fā)

楊 靜安 康 王樹凱劉軍輝

（1河北省張家口市林業(yè)和草原局濕地和野生動(dòng)物保護(hù)管理中心，河北張家口 075000；2河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，河北張家口 075000）

非洲豬瘟（African swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起豬的一種急性、烈性、高致死性的傳染病。臨床上以病豬發(fā)熱、皮膚發(fā)紺為主要特征，剖檢可見脾臟顯著腫大，顏色變暗，質(zhì)地變脆，淋巴結(jié)、腎、胃腸黏膜等多個(gè)器官組織明顯出血。非洲豬瘟主要感染家豬和野豬，發(fā)病豬和帶毒豬是非洲豬瘟病毒的主要傳播宿主。軟蜱是主要的傳播媒介和貯存宿主。非洲豬瘟可通過(guò)直接接觸感染豬或采食被污染的飼料、泔水、豬產(chǎn)品，接觸污染的糞便、墊料等進(jìn)行傳播，也可經(jīng)軟蜱傳播。

1 我國(guó)野豬非洲豬瘟疫情發(fā)生情況

2018年11月16日，吉林省白山市渾江區(qū)一頭病死野豬的非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，這是我國(guó)發(fā)現(xiàn)的第1例野豬感染非洲豬瘟病毒后的疫情。2018年12月2日，黑龍江省農(nóng)墾總局北安管理局野豬養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生非洲豬瘟疫情，存欄野豬375頭，死亡77頭。2019年2月24日，大興安嶺重點(diǎn)國(guó)有林管局桑都爾林場(chǎng)野豬養(yǎng)殖戶的豬群發(fā)生非洲豬瘟疫情，發(fā)病222頭，死亡210頭。2019年8—9月采自湖南常德地區(qū)的2頭野外野豬的血液樣品經(jīng)檢測(cè)，非洲豬瘟病毒核酸為陽(yáng)性。2019年12月11日，陜西佛坪縣在3頭死亡野豬中檢出非洲豬瘟病毒。2020年3月3日，湖北省神農(nóng)架林區(qū)陽(yáng)日鎮(zhèn)、松柏鎮(zhèn)發(fā)生野豬非洲豬瘟疫情，共發(fā)現(xiàn)死亡野豬7頭。

2 野豬媒介傳播非洲豬瘟病毒的模式

野豬作為野生動(dòng)物宿主和傳播媒介在非洲豬瘟疫情散播中起著至關(guān)重要的作用，野豬參與非洲豬瘟病毒的傳播有以下2種方式，第一，為“野豬—軟蜱”的森林循環(huán)，在非洲，非洲豬瘟病毒感染軟蜱后，軟蜱中的病毒含量可使新生疣豬感染，新生疣豬感染后可發(fā)生短暫的病毒血癥，大約持續(xù)2～3周，期間蜱吸食新生疣豬血液后，疣豬血液中病毒的量足以使蜱感染。蜱通過(guò)叮咬再去感染其他野豬，從而形成“野豬—軟蜱”的森林循環(huán)[1]。第二，為森林循環(huán)和家豬之間的傳播方式，疣豬能否將ASFV傳染給家豬，軟蜱起到了至關(guān)重要的作用，成年疣豬可將感染的軟蜱攜帶到家豬活動(dòng)區(qū)域，“疣豬—家豬”之間非洲豬瘟病毒的傳播很可能是因?yàn)榧邑i受到軟蜱的叮咬或采食了感染病毒的軟蜱而發(fā)生的[1]。

3 防控野豬發(fā)生非洲豬瘟疫情的措施

3.1 開展科普宣傳引導(dǎo)

積極開展科普宣傳，堅(jiān)持正面宣傳，科學(xué)引導(dǎo)，多渠道、全方位廣泛宣傳非洲豬瘟的防控知識(shí)，讓群眾相信非洲豬瘟可防可控，引導(dǎo)公眾科學(xué)認(rèn)知非洲豬瘟，營(yíng)造非洲豬瘟群防群控的氛圍。

3.2 強(qiáng)化野豬日常監(jiān)測(cè)

野豬主要活動(dòng)地點(diǎn)在山區(qū)，活動(dòng)區(qū)域一般是以一座山頭為中心向外擴(kuò)散20～30 km范圍內(nèi)，由于山區(qū)人員活動(dòng)較少，野豬一旦發(fā)病很難被及時(shí)發(fā)現(xiàn)，因此，加強(qiáng)日常監(jiān)測(cè)對(duì)預(yù)防和控制野豬非洲豬瘟疫情至關(guān)重要。各國(guó)家級(jí)和省級(jí)陸生、野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)站、林場(chǎng)、自然保護(hù)區(qū)應(yīng)切實(shí)負(fù)起責(zé)任，安排部署監(jiān)測(cè)人員，做好野豬資源分布本底調(diào)查，對(duì)野豬出現(xiàn)頻次較高區(qū)域、野豬與散養(yǎng)家豬存在交叉接觸區(qū)域、與疫點(diǎn)距離不足50 km的淺山區(qū)作為重大防控風(fēng)險(xiǎn)區(qū)，加強(qiáng)對(duì)重大防控風(fēng)險(xiǎn)區(qū)的日常監(jiān)測(cè)。要采取人員野外巡護(hù)與儀器設(shè)備定點(diǎn)監(jiān)測(cè)相結(jié)合的方式，對(duì)野豬棲息地、采食點(diǎn)及往返路線進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)測(cè)，細(xì)化落實(shí)各級(jí)監(jiān)測(cè)人員崗位職責(zé)，增加巡查時(shí)間，確保第一時(shí)間發(fā)現(xiàn)野豬異常情況，第一時(shí)間上報(bào)。

3.3 加強(qiáng)野豬人工繁育場(chǎng)所的監(jiān)管

開展野豬人工繁育場(chǎng)所檢查活動(dòng)，對(duì)轄區(qū)內(nèi)野豬養(yǎng)殖企業(yè)進(jìn)行普查核實(shí)登記，對(duì)野豬人工繁育場(chǎng)的地點(diǎn)、養(yǎng)殖數(shù)量、養(yǎng)殖方式（散養(yǎng)、半散養(yǎng)、圈養(yǎng)）、野外引種來(lái)源、飼喂方式、食物來(lái)源、防疫措施以及是否存在雜交親本等情況進(jìn)行全面調(diào)查和登記，加強(qiáng)對(duì)野豬人工繁育場(chǎng)所的監(jiān)管，養(yǎng)豬戶應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高生物安全水平，嚴(yán)禁使用泔水喂豬，禁止野豬野外散養(yǎng)與野外引種，阻斷人工繁育野豬與野生野豬接觸途徑，同時(shí)應(yīng)防止軟蜱等吸血昆蟲的叮咬，強(qiáng)化防疫、消毒措施，嚴(yán)防疫情傳播擴(kuò)散。

3.4 做好聯(lián)防聯(lián)控工作

林業(yè)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村、海關(guān)、市場(chǎng)監(jiān)管、邊防等部門應(yīng)加強(qiáng)協(xié)作，及時(shí)向地方政府通報(bào)轄區(qū)內(nèi)野豬監(jiān)測(cè)動(dòng)態(tài)，完善聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制。

3.5 研制安全有效的疫苗

非洲豬瘟病毒早在20世紀(jì)初已被發(fā)現(xiàn)，但是直到現(xiàn)在，還沒(méi)有研制出安全有效的疫苗來(lái)防控該病毒，主要仍是對(duì)非洲豬瘟病毒免疫保護(hù)機(jī)制的研究還不夠深入透徹。非洲豬瘟病毒粒子復(fù)雜，其基因組編碼的多種蛋白抑制宿主的免疫應(yīng)答，且編碼蛋白擁有多種免疫逃避機(jī)制，是阻礙疫苗研發(fā)的重要因素。目前研發(fā)的用于非洲豬瘟防控的主要有滅活疫苗、弱毒活疫苗、核酸疫苗、亞單位疫苗、病毒活載體疫苗等。

3.5.1 滅活疫苗

滅活疫苗指通過(guò)物理或化學(xué)方式使病原微生物喪失感染性和毒性，但保留其抗原性的一種疫苗，科研人員最先也想研制滅活疫苗來(lái)防控非洲豬瘟病毒，但大多數(shù)疫苗無(wú)免疫保護(hù)效果，利用感染ASFV的豬肺泡巨噬細(xì)胞制備的滅活疫苗，不能起到免疫保護(hù)作用[2]。Blome等[3]使用新型佐劑PolygenTM或Emulsigen?-D與滅活疫苗聯(lián)用，仍然不能產(chǎn)生中和抗體，無(wú)法提供有效的免疫保護(hù)。非洲豬瘟病毒粒子復(fù)雜，編碼眾多參與免疫調(diào)控的蛋白質(zhì)，以及病毒具有細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外2種不同的感染模式，這些都可能是滅活疫苗免疫失敗的原因[4]。

3.5.2 弱毒活疫苗

弱毒活疫苗因免疫效果好、免疫期長(zhǎng)的特點(diǎn)一直是科學(xué)家研究的重點(diǎn)。將天然弱毒株OURT 88/3免疫豬后再接種毒株OURT 88/1，可對(duì)異源毒株提供交叉保護(hù)[5]，但是接種天然弱毒株也可能使接種豬出現(xiàn)發(fā)燒、病毒血癥等副作用[6]。為了獲得免疫效果好的弱毒株，近年來(lái)，基因缺失疫苗一直是研究的重點(diǎn)?；蛉笔б呙缰傅氖菓?yīng)用基因操作技術(shù)，將病原微生物中與致病力有關(guān)的毒力基因敲除，使其毒力減弱，但是仍保留抗原性的一類疫苗。通過(guò)敲除與病毒毒力相關(guān)基因或者阻礙宿主免疫應(yīng)答的基因而使病毒毒力減弱是制備基因缺失疫苗的關(guān)鍵，缺失CD2v（EP402R）基因可使有毒力的BA71株毒力減弱，接種缺失BA71ΔCD2基因的病毒，不僅能抵抗親本BA71株的攻擊，也能抵抗異源性E75株的攻擊，進(jìn)一步的試驗(yàn)證明，這種弱毒株也可抵抗ASFV基因Ⅱ型毒株的攻擊，這提示該弱毒疫苗株對(duì)不同ASFV毒株存在交叉保護(hù)作用[7]。這為科學(xué)家研制可抵抗多種毒株感染的ASFV疫苗株提供了新的思路。有研究發(fā)現(xiàn)多基因缺失可能比單基因缺失具有更好的安全性和保護(hù)效果。同時(shí)缺失9GL和DP96R/UK的毒株相比只缺失9GL的毒株表現(xiàn)出更好的安全性和保護(hù)效果[8]。但是，也有研究表明，多基因缺失苗相對(duì)于單基因缺失苗，并不能提供更好的保護(hù)效果，例如單獨(dú)缺失MGF360/505或9GL基因制備的弱毒活疫苗，都可以很好抵抗親本強(qiáng)毒株的感染[9,10]，但同時(shí)缺失這2種基因，便不能提供很好的保護(hù)作用[11]。

弱毒活疫苗可以抵抗同源毒株的感染，有的對(duì)異源毒株也起到一定的交叉保護(hù)作用，但其產(chǎn)生的副作用嚴(yán)重，弱毒株在豬體內(nèi)是否會(huì)存在毒力返強(qiáng)，其安全性仍是制約其大規(guī)模生產(chǎn)的重要因素。

3.5.3 亞單位疫苗、核酸疫苗、病毒活載體疫苗

亞單位疫苗是利用微生物的主要保護(hù)性免疫原制成不含有核酸、能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗。單獨(dú)免疫桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的p30蛋白或p54蛋白，雖然可以在體內(nèi)檢測(cè)到中和抗體的存在，但是不能抵抗E75毒株的感染，而p30和p54聯(lián)用可以提供部分保護(hù)作用[12]。但是，p54、p30、p72三種蛋白聯(lián)用卻不能抵抗Malawi毒株的感染[13]。這些結(jié)果的差異可能與所使用的ASFV毒株有關(guān)。

核酸疫苗是指將含有編碼的某種抗原蛋白基因序列的質(zhì)粒載體注射到宿主體內(nèi)，使抗原蛋白在宿主體內(nèi)表達(dá)，從而誘導(dǎo)宿主細(xì)胞對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答。將p54和p30串聯(lián)后與豬白細(xì)胞抗原Ⅱ的抗體可變片段融合，雖然可以誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞反應(yīng)，但是無(wú)法產(chǎn)生中和抗體，也無(wú)法針對(duì)致死性的ASFV毒株產(chǎn)生保護(hù)[14]。將p54、p30及CD2v相融合，雖然在免疫豬體內(nèi)檢測(cè)到產(chǎn)生了強(qiáng)烈的體液免疫和細(xì)胞免疫，但是仍然不能提供保護(hù)。但是，將這3種基因與泛素融合后，卻可以針對(duì)致死性ASFV毒株產(chǎn)生部分保護(hù)作用，原因是在免疫豬體內(nèi)檢出強(qiáng)烈的CTL反應(yīng)，表明CD8（+）-T細(xì)胞在免疫保護(hù)中發(fā)揮著重要的作用[15]。包含其他ASFV抗原基因的DNA表達(dá)文庫(kù)，與泛素融合后制成的核酸疫苗，也只能提供部分保護(hù)。這種保護(hù)也與特異性的T細(xì)胞反應(yīng)有關(guān)[16]。鑒定更多的保護(hù)性抗原，增強(qiáng)特異性T細(xì)胞反應(yīng)可能是提高核酸疫苗免疫效果的可行思路。

病毒活載體疫苗是利用腺病毒、甲病毒等可以在機(jī)體內(nèi)持續(xù)復(fù)制與表達(dá)的特性，將ASFV部分抗原基因融合到病毒載體上制成的疫苗。Lokhandwala等[17]構(gòu)建了混合ASFV-P32、P54、PP62和P72抗原的腺病毒載體疫苗，可產(chǎn)生特異性抗體和CTL反應(yīng)，之后又將A151R、 B119L、 B602L、 EP402RΔPRR、 B438L、K205R、A104R等ASFV抗原基因融合到腺病毒載體上，雞尾酒式免疫豬，大量的抗體和IFN-γ+細(xì)胞反應(yīng)也被檢測(cè)到[18]。但是這些抗原基因還未進(jìn)行免疫保護(hù)試驗(yàn)，是否可以產(chǎn)生保護(hù)效果還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

4 結(jié)語(yǔ)

非洲豬瘟病毒雖然不傳染人，但是其在國(guó)內(nèi)的流行，仍是威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)殺手。我國(guó)野豬數(shù)量龐大且分散，大都在山區(qū)，應(yīng)加強(qiáng)野豬的日常監(jiān)控，建立隔離區(qū)域，防止患病野豬與家豬接觸，此外發(fā)現(xiàn)野豬疑似病例，除了通過(guò)臨床癥狀分辨外，還應(yīng)建立快速準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，一旦確診，對(duì)患病豬群立即采取封鎖、隔離、撲殺、銷毀、消毒、無(wú)害化處理等強(qiáng)制性措施，迅速撲滅疫源，防止擴(kuò)散。

疫苗的研發(fā)仍然是非洲豬瘟病毒防控的重中之重。滅活疫苗因無(wú)法產(chǎn)生相應(yīng)的中和抗體而免疫失敗，弱毒活疫苗在不同毒株交叉保護(hù)以及安全性方面存在問(wèn)題，非洲豬瘟疫苗未來(lái)研究方向需鑒定更多的ASFV保護(hù)性抗原，其保護(hù)效果還需進(jìn)一步驗(yàn)證。不斷深入研究ASFV與宿主之間的相互作用機(jī)制以及開發(fā)疫苗新型技術(shù)，加快疫苗研發(fā)進(jìn)程。