不同藥劑對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

李小艷 劉翊澤 楊紅 王林

摘要 ? ?擬莖點(diǎn)霉菌可引起植物發(fā)病。為篩選較好的防治藥劑及其濃度，本研究采用室內(nèi)抑菌法對(duì)6種藥劑進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，苯甲·氟酰胺懸浮劑、唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、寡糖·乙蒜素微乳劑、吡唑醚菌酯懸浮劑4種藥劑對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌有較好的抑制效果，其中，苯甲·氟酰胺懸浮劑抑制效果最好，唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑和吡唑醚菌酯懸浮劑的抑制效果次之，寡糖·乙蒜素微乳劑的抑制效果最差。

關(guān)鍵詞 ? ?擬莖點(diǎn)霉菌;防治藥劑;室內(nèi)抑菌法;室內(nèi)毒力測(cè)定

中圖分類號(hào) ? ?S482 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ? ?A

文章編號(hào) ? 1007-5739（2020）22-0070-04 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

Abstract ? ?Phomopsis sp. can cause plant diseases. In order to screen better control agents and concentration， this study used the indoor antibacterial method to determine the six agents. The results showed that 4 kinds of medicaments including benzo·fluoroamide suspension， oxazofet·dysenlian water dispersible granules， oligosaccharide·allicin microemulsion， pyraclostrobin suspension had good inhibitory effects， among which， benzo·fluoroamide suspension had the best inhibitory effect， followed by oxazofet·dysenlian water dispersible granules and pyraclostrobin suspension， oligosaccharide·allicin microemulsion had the worst inhibitory effect.

Keywords ? ?Phomopsis sp.; control agent;indoor antibacterial method; indoortoxicity test

擬莖點(diǎn)霉屬為半知菌亞門腔孢綱球殼孢目中的真菌屬，其形態(tài)學(xué)特征主要為一個(gè)暗色真子座質(zhì)的載孢體，能夠產(chǎn)生甲（α）型和乙（β）型2種分生孢子[1]。其分布非常廣泛，尤其在熱帶和亞熱帶地區(qū)。擬莖點(diǎn)霉作為一種重要的植物病原菌，主要危害被子植物和裸子植物，侵染植物的枝葉、果實(shí)，但很少侵染根，可引起如葉枯、枝枯、果腐、根腐、潰瘍、爛莖、樹(shù)皮壞死等多種病害[2-3]。此外，由于擬莖點(diǎn)霉屬無(wú)宿主特異性，因而在許多染病植物中均可分離，如茄子褐紋病[4]、大豆擬莖點(diǎn)霉莖枯種腐病[5]、蘆筍莖枯病[6]、柑橘黑點(diǎn)病[7]等病害。

前人對(duì)擬莖點(diǎn)霉屬病害的研究大多集中于生物學(xué)特性、分類地位、病原菌分離鑒定、內(nèi)生菌的治病癥狀等方面[8]，對(duì)病原菌與寄主相互作用的過(guò)程、致病機(jī)理及抗病性等方面的研究相對(duì)較少[9-10]。當(dāng)前擬莖點(diǎn)霉屬菌物引起了人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注，國(guó)內(nèi)外對(duì)其病害分子遺傳及基因功能的研究也日益增多。如Anco等[11]首次將綠色熒光蛋白通過(guò)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)入到P. viticola中，為分析致病侵染進(jìn)程提供了便利。崔友林[12]基于國(guó)外抗病資源方面的研究，對(duì)我國(guó)大豆抗擬莖點(diǎn)種腐病的分離物進(jìn)行序列分析，得出結(jié)論后應(yīng)用于抗性鑒定，并為Phomopsis longicolla的抗病資源和抗病品種選育方面提供參考。

隨著經(jīng)濟(jì)水平、生活質(zhì)量的不斷提高，人們對(duì)身體健康的重視程度也越來(lái)越高。尤其在蔬果方面，人們不僅要求品種多樣化，而且對(duì)蔬果品質(zhì)和安全也提出了更高要求。擬莖點(diǎn)霉菌作為一種真菌，對(duì)植物會(huì)產(chǎn)生病害，且影響較大，因而給種植戶帶來(lái)了困擾，同時(shí)也造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。王井田等[13]于2013年研究擬莖點(diǎn)霉菌侵染規(guī)律，通過(guò)田間和鏡檢試驗(yàn)表明，該菌在越冬過(guò)程中多以菌絲體或孢子器附著于病枝、病殘?bào)w和殘留果梗上，待到次年春季孢子便會(huì)大面積傳播，以侵染幼果為主。該病癥早期不易被發(fā)現(xiàn)，直到果實(shí)成熟或采收后才開(kāi)始緩慢顯現(xiàn)。

目前，市場(chǎng)上尚未有僅針對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的藥劑。本文采用室內(nèi)抑菌法，研究化學(xué)藥劑醚菌·啶酰菌懸浮劑、苯甲·氟酰胺懸浮劑、唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、吡唑醚菌酯懸浮劑和生物制劑寡糖·乙蒜素微乳劑、哈茨木霉菌可濕性粉劑及其不同濃度對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的抑制效果，意在篩選出對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌效果較好的藥物及其濃度，為農(nóng)作物栽培生產(chǎn)提供更明確的方向。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?試驗(yàn)材料

供試菌種為擬莖點(diǎn)霉菌，由四川省自然資源研究所分離純化鑒定。

供試培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

供試藥劑為醚菌·啶酰菌懸浮劑（15 mL/袋，巴斯夫歐洲公司）、苯甲·氟酰胺懸浮劑（15 mL/袋，巴斯夫歐洲公司）、唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑（20 g/袋，山東鄒平農(nóng)藥有限公司）、寡糖·乙蒜素微乳劑（10 g/袋，海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司）、哈茨木霉菌可濕性粉劑（100 g/袋，美國(guó)拜沃股份有限公司）、吡唑醚菌酯懸浮劑（100 mL/瓶，山東康喬生物科技有限公司）。

1.2 ? ?試驗(yàn)方法

1.2.1 ? ?擬莖點(diǎn)霉菌的活化。在超潔凈工作臺(tái)中用接種環(huán)從容器挑出一個(gè)菌餅，放在PDA培養(yǎng)基中央，用封口膜將其封好，在溫度為25 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1周。

1.2.2 ? ?藥劑配制。將6種藥劑各配制出5種濃度供后續(xù)試驗(yàn)使用，共設(shè)30個(gè)處理，即醚菌·啶酰菌懸浮劑4.00 mL/L（A1）、2.00 mL/L（A2）、1.00 mL/L（A3）、0.50 mL/L（A4）、0.25 mL/L（A5），苯甲·氟酰胺懸浮劑3.560 mL/L（B1）、1.780 mL/L（B2）、0.890 mL/L（B3）、0.445 mL/L（B4）、0.223 mL/L（B5），唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑2.660 g/L（C1）、1.330 g/L（C2）、0.665 g/L（C3）、0.333 g/L（C4）、0.1663 g/L（C5），寡糖·乙蒜素微乳劑4.440 mL/L（D1）、2.220 mL/L（D2）、1.110 mL/L（D3）、0.555 mL/L（D4）、0.278 mL/L（D5），哈茨木霉菌可濕性粉劑8.880 g/L（E1）、4.440 g/L（E2）、2.220 g/L（E3）、1.110 g/L（E4）、0.555 g/L（E5），吡唑醚菌酯懸浮劑4.000 mL/L（F1）、2.000 mL/L（F2）、1.000 mL/L（F3）、0.500 mL/L（F4）、0.250 mL/L（F5）。其中，處理 A3、B3、C3、D3、E3、F3為說(shuō)明書推薦濃度。

1.2.3 ? ?藥劑初篩。用8 mm打孔器沿活化好的含擬莖點(diǎn)霉菌的PDA培養(yǎng)基邊緣處打孔，用鑷子取菌餅接于平板中央，培養(yǎng)1 d后，在菌餅2 cm左右處呈三角形放置3個(gè)牛津杯，在牛津杯中加入1.2.2中配制好的6種藥劑推薦濃度溶液各100 μL，每種濃度3個(gè)重復(fù)，封口后置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，觀察擬莖點(diǎn)霉菌生長(zhǎng)情況，測(cè)量抑菌圈半徑，并記錄。處理數(shù)據(jù)時(shí)，直徑=半徑×2。

抑菌效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：- 表示無(wú)抑菌圈;+ 表示抑菌圈直徑為8～10 mm;++ 表示抑菌圈直徑為10～12 mm;+++ 表示抑菌圈直徑大于12 mm。

1.2.4 ? ?有抑菌效果的藥劑室內(nèi)毒力測(cè)定。將初篩后有抑菌效果的藥劑配制的5個(gè)濃度梯度按照1.2.3中的方法加入牛津杯中，封口后置于25 ℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察擬莖點(diǎn)霉菌生長(zhǎng)情況，在培養(yǎng)后的第3天測(cè)定抑菌圈半徑，并記錄。

1.3 ? ?數(shù)據(jù)分析

以藥劑濃度為橫坐標(biāo)，以抑菌圈直徑為縱坐標(biāo)，用Excel 2017繪制出散點(diǎn)圖，根據(jù)曲線走向進(jìn)行分析。

2 ? ?結(jié)果與分析

2.1 ? ? 藥劑初篩結(jié)果

在牛津杯中加入配制好的6種藥劑推薦濃度，置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，結(jié)果顯示，醚菌·啶酰菌懸浮劑和哈茨木霉菌可濕性粉劑對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌幾乎沒(méi)有抑制作用，牛津杯周圍長(zhǎng)滿真菌，無(wú)抑菌圈，如圖1（a）（e）所示。剩下的4種推薦濃度藥劑對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌均有抑制作用，如圖1（b）（c）（d）（f）所示，其中寡糖·乙蒜素微乳劑的抑菌效果最低，抑菌圈半徑較小;唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑和吡唑醚菌酯懸浮劑的抑菌效果中等，抑菌圈明顯;苯甲·氟酰胺懸浮劑的抑菌效果比較好，有明顯且較大的抑菌圈（表1）。

2.2 ? ?藥劑室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果

根據(jù)測(cè)量的第3天抑菌圈半徑計(jì)算出直徑（表2），再以藥劑濃度為自變量，以抑菌圈直徑為因變量，利用Excel 2017處理記錄數(shù)據(jù)，得到4種藥劑對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的室內(nèi)毒力曲線圖（圖2）。結(jié)果表明，4種藥劑抑菌效果最佳的為苯甲·氟酰胺懸浮劑，其次是唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑和吡唑醚菌酯懸浮劑，效果最低的為寡糖·乙蒜素微乳劑。在配制藥劑的不同濃度方面，僅苯甲·氟酰胺懸浮劑出現(xiàn)了最大抑菌圈，其最佳抑制濃度為0.890 mL/L，低于或高于這個(gè)濃度對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的抑制效果均降低;唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、寡糖·乙蒜素微乳劑、吡唑醚菌酯懸浮劑的最大抑菌圈分別出現(xiàn)在濃度為2.660 g/L、4.440 mL/L、4.000 mL/L時(shí)。在相同濃度下，吡唑醚菌酯懸浮劑和唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑的抑制效果幾乎始終大于寡糖·乙蒜素微乳劑。在低濃度情況下，吡唑醚菌酯懸浮劑的抑菌效果強(qiáng)于唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑;而高濃度下兩者抑菌效果相近。

3 ? ?結(jié)論與討論

本研究采用牛津杯抑菌圈法先從6種防治真菌的藥劑中篩選出了4種對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌有抑制效果的藥劑。其中，醚菌·啶酰菌懸浮劑和哈茨木霉菌可濕性粉劑基本無(wú)抑制效果。醚菌·啶酰菌懸浮劑由啶酰菌胺和醚菌酯混配制成，兩者均為呼吸抑制劑，通過(guò)雙重抑制病原菌呼吸，達(dá)到防治效果，它主要是針對(duì)草莓、黃瓜等作物的白粉病及葡萄穗軸褐枯病，對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌幾乎沒(méi)有抑制效果。生物殺菌劑哈茨木霉菌可濕性粉劑的作用機(jī)制是在植物的某些部位快速生長(zhǎng)，以此占據(jù)生態(tài)位，從而達(dá)到預(yù)防病原菌侵染的效果，如植物的根、葉等周圍。哈茨木霉菌可濕性粉劑也可以作用于病原菌的細(xì)胞，但主要是作為生防菌來(lái)預(yù)防病害，因而對(duì)已經(jīng)生長(zhǎng)出的病原菌治療效果較差。

針對(duì)有抑制效果的藥劑苯甲·氟酰胺懸浮劑、唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、寡糖·乙蒜素微乳劑、吡唑醚菌酯懸浮劑，分別研究了其5種不同濃度對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，整體上4種藥劑的抑菌效果從小到大的順序依次為寡糖·乙蒜素微乳劑<唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑<吡唑醚菌酯懸浮劑<苯甲·氟酰胺懸浮劑，其中以濃度為0.890 mL/L的苯甲·氟酰胺懸浮劑的抑菌效果最強(qiáng)。苯甲·氟酰胺懸浮劑為苯醚甲環(huán)唑和氟唑菌酰胺的混配制劑，是一種廣譜殺菌劑，不僅可用于防治多種作物上的多種真菌性病害，還具有內(nèi)吸傳導(dǎo)性、保護(hù)和治療活性，對(duì)此類病害有較長(zhǎng)的持效期及較好的治療效果。唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑由5%吡唑醚菌酯和55%代森聯(lián)組成，既具有吡唑醚菌酯對(duì)多種真菌性病害的治療效果，也具有代森聯(lián)抑制真菌孢子萌發(fā)和干擾芽管發(fā)育生長(zhǎng)的作用。從總體趨勢(shì)上看，吡唑醚菌酯懸浮劑的抑制效果要比唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑更穩(wěn)定。因此，對(duì)于防治由擬莖點(diǎn)霉菌引起的真菌病害，可優(yōu)先選擇吡唑醚菌酯懸浮劑。寡糖·乙蒜素微乳劑由氨基寡糖素和乙蒜素2種活性物質(zhì)組成，其中氨基寡糖素屬植物誘導(dǎo)抗病劑，它可以直接或間接抑制病原菌。直接抑制是通過(guò)釋放一些寡聚糖素，參與對(duì)病原菌的抑制作用;間接抑制則是通過(guò)激發(fā)植物自身來(lái)產(chǎn)生一系列防御反應(yīng)，從而抑制病原菌生長(zhǎng)。乙蒜素抑制菌體代謝是通過(guò)其結(jié)構(gòu)中的（S-S=O=O）基團(tuán)與菌體中含-SH基的物質(zhì)反應(yīng)。寡糖·乙蒜素微乳劑主要是針對(duì)引起棉花枯萎病的真菌性病害，研究表明，當(dāng)使用濃度高于推薦濃度，其對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的抑制效果也較好。盡管根據(jù)配制的藥劑濃度顯示唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、寡糖·乙蒜素微乳劑和吡唑醚菌酯懸浮劑對(duì)擬莖點(diǎn)霉菌的抑制效果比苯甲·氟酰胺懸浮劑弱，但3種藥劑均沒(méi)有出現(xiàn)最大抑菌圈，且抑菌圈與濃度成正相關(guān)。若不考慮苯甲·氟酰胺懸浮劑，本試驗(yàn)結(jié)果與董克鋒等[14]和岳清華等[15]的研究結(jié)果基本一致。唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑、寡糖·乙蒜素微乳劑和吡唑醚菌酯懸浮劑均可作為擬莖點(diǎn)霉菌的預(yù)防藥劑。

4 ? ?參考文獻(xiàn)

[1] SUTTON B C.The Coelomycetes[M].London：CABI，1980.

[2] 勞佳萍.植物內(nèi)生真菌擬莖點(diǎn)霉生物多樣性研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2007.

[3] UECKER F A.A world list of Phomopsis names with notes on nomenclature，morphology and biology[J].Mycol Mem 1988，13：1-231.

[4] 馬珂.茄褐紋病菌生物學(xué)特性、致病性及寄主抗性機(jī)制的研究[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[5] 崔友林，段燦星，丁俊杰，等.一種新發(fā)生的大豆莖枯病病原菌鑒定[J].中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2010，32（1）：99-103.

[6] 孫燕芳，鄭金龍，劉巧蓮，等.15種藥劑對(duì)蘆筍莖枯病病原菌的毒力測(cè)定[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，33（4）：71-75.

[7] 陽(yáng)廷密，鄧崇嶺，門友均，等.8種農(nóng)藥對(duì)柑橘擬莖點(diǎn)霉毒力測(cè)定及田間防治試驗(yàn)[J].中國(guó)南方果樹(shù)，2014，43（2）：52-53.

[8] 張?jiān)榔?，瞿華香，羅紹春，等.一些重要作物擬莖點(diǎn)霉屬病原生物學(xué)及致病機(jī)制研究概況[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（33）：327-332.

[9] DUVNJAK T，VRATARIC M，SUDARIC A，et al.Pathogen-plant interaction：Phomopsis longicolla strain pathogenicity[J].Alps-Adria Scientific Workshop，2007（35）：361-364.

[10] SMITH S，F(xiàn)ENN P，CHEN P，et al.Inheritance of resistance to Phomopsis seed decay in PI360841 soybean[J].Journal of Heredity，2008（99）：588-592.

[11] ANCO D J，KIM S，MADDEN L V，et al.Transformation of Phomopsis viticola with the green fluorescent protein[J].My-cologia，2009，101（6）：853-858.

[12] 崔友林.大豆莖枯病病原菌鑒定及3種檢疫性大豆病原菌適生性分析[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2009.

[13] 王井田，劉達(dá)富，劉允義，等.獼猴桃果實(shí)腐爛病的發(fā)病規(guī)律及藥劑篩選試驗(yàn)[J].浙江林業(yè)科技，2013，33（3）：55-57.

[14] 董克鋒，岳清華，高勇，等.藍(lán)莓?dāng)M莖點(diǎn)霉枝枯病藥劑防治試驗(yàn)[J].中國(guó)森林病蟲(chóng)，2015，34（6）：44-46.

[15] 岳清華，高勇，廖甜甜，等.6種殺菌劑對(duì)5種藍(lán)莓枝枯病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，47（6）：101-103.