杧果蒂腐病研究進(jìn)展

孫宇，葉子，夏楊，劉曉妹，蒲金基，張賀*

（1.海南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，海南海口 570228；2.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所·農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·海南省熱帶農(nóng)業(yè)有害生物監(jiān)測(cè)與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?571101）

杧果（Mangifera indicaL.）是世界著名的熱帶水果，素有“熱帶水果之王”的美譽(yù)，分布于熱帶和亞熱帶的100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，包括我國(guó)的華南熱區(qū)[1]。杧果是熱區(qū)重要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)作物，也是農(nóng)民脫貧致富的“金杧果”和“致富樹”。杧果種植區(qū)常年高溫高濕的自然環(huán)境有利于作物病蟲害的頻繁發(fā)生，特別是采后病害的發(fā)生，造成的損失不斷增加，嚴(yán)重阻礙了杧果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前至少有37 種病原真菌、2 種病原細(xì)菌和5 種生理原因引起杧果采后病害，采后病害是引起杧果運(yùn)輸、貯運(yùn)期間果實(shí)發(fā)病并失去食用價(jià)值的主要影響因素，致使采后腐爛率在20%～40%，貯藏期病果率一般為10%～40%，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可達(dá)100%，限制了杧果的遠(yuǎn)銷，縮短了貨架期，而杧果蒂腐病則是杧果最為嚴(yán)重的采后病害之一，其中杧果蒂腐病為害造成的損失約占20%[2]。主要為害果實(shí)，先是呈現(xiàn)棕色病斑，然后變成暗色，流出膠液，故又稱“流膠病”；病斑逐漸擴(kuò)大并包圍枝條后，病部上方的部分會(huì)枯死、干枯，也稱為“回枯病”“枝枯病”，由多種病原菌引起。

在國(guó)外，杧果蒂腐病的研究始于20 世紀(jì)70 年代，研究的內(nèi)容主要集中在病原菌鑒定、主要病原菌致病機(jī)理及其生物學(xué)特性、保鮮技術(shù)及采后藥劑試驗(yàn)和部分病原菌潛伏侵染特性等方面。在國(guó)內(nèi)，對(duì)于杧果蒂腐病的研究起步較晚，1985 年潘賢麗等[3]在我國(guó)首次對(duì)杧果蒂腐病進(jìn)行報(bào)道；20 世紀(jì)80 年代末，王璧生等[4-5]發(fā)現(xiàn)了廣東省杧果蒂腐病并對(duì)其病原菌進(jìn)行了鑒定和調(diào)查；之后我國(guó)研究人員才開始對(duì)杧果蒂腐病展開研究，這些研究包括病原菌鑒定、生物學(xué)特性、采前病害預(yù)防治理與采后貯藏技術(shù)等[6]。但截止目前對(duì)杧果蒂腐病的綜述報(bào)道仍較少，鑒于此，本文從3 種常見的杧果蒂腐病（球二孢屬蒂腐病、小穴殼屬蒂腐病、擬莖點(diǎn)霉屬蒂腐?。┑陌l(fā)生史、病原菌、癥狀與危害、發(fā)病規(guī)律、致病機(jī)制、綜合防治技術(shù)等方面入手，分析了杧果蒂腐病，為其防治提供參考。

1 杧果蒂腐病的病原菌及特征

根據(jù)國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道，杧果蒂腐病可由多種病原菌引起，其中比較常見的有可可球二孢菌（BotryodiplodiatheobromaePat.）和小穴殼菌（Dothiorella dominicanaPet.et Cif.）[7]。1993 年Johnson 等[8]報(bào)道，在亞洲，Botryodiplodia theobromaePat.是引起杧果蒂腐病的主要病原菌之一。1994 年王璧生等[5]對(duì)杧果蒂腐病病原菌進(jìn)行鑒定，他認(rèn)為杧果蒂腐病由3 種真菌引起，即可可球二孢菌（Botryodiplodia theobromaePat.）、小穴殼菌（Dothiorella dominicanaPet.et Cif.） 和擬莖點(diǎn)霉菌（Phomopsis mangiferaeAhmad），3 種真菌都屬于半知菌類。研究表明，杧果蒂腐病病原菌存在多樣性，B.theobromae是導(dǎo)致該病在海南發(fā)生的優(yōu)勢(shì)病菌，也是造成國(guó)內(nèi)杧果蒂腐病最主要的病原菌，在世界各杧果種植地均有發(fā)現(xiàn)[9-11]。除上述3 種病原菌外，近年來有報(bào)道Diaporthespp.[12]、Neofusicoccumsp.[13]同樣可以引起杧果蒂腐病。

1.1 可可球二孢菌

1.1.1 形態(tài)學(xué)特征

黃思良等[14]報(bào)道，可可球二孢菌落在PDA 平板上為絨狀，初始為白色至灰色，后變?yōu)楹诤稚?，生長(zhǎng)速度極快，基質(zhì)可由淡黃色轉(zhuǎn)為褐色。子座質(zhì)地較堅(jiān)硬，截面呈現(xiàn)橢圓形，大?。?～5）mm×（1～3）mm。每個(gè)子座通常含分生孢子器1～6 個(gè)，扁圓或卵圓狀，大?。?50～550）μm×（110～380）μm。分生孢子梗26.1 μm×5.0 μm，單生無隔，無色，前端尖細(xì)。成熟分生孢子有隔膜、扁圓狀、深棕色，少數(shù)外表有縱向線條，大小為（24.2～37.5）μm×（10.0～16.3）μm；未成熟分生孢子呈卵圓或扁圓狀，單胞，無色，壁厚，少數(shù)基部平截，內(nèi)含物顆粒狀。

1.1.2 生物學(xué)特征

可可球二孢菌在13～40 ℃時(shí)均可生長(zhǎng)，19～37 ℃時(shí)適宜，28～34 ℃時(shí)最宜，低于10 ℃或高于43 ℃時(shí)生長(zhǎng)被抑制，pH5.0～5.5 時(shí)最宜；分生孢子器及子座對(duì)光很敏感，光可誘導(dǎo)它們形成；苯井咪唑44 號(hào)對(duì)該菌的室內(nèi)抑制力最大[14]。

1.2 小穴殼菌

1.2.1 形態(tài)學(xué)特征

小穴殼菌菌落在PDA 平板上平鋪，初期灰黑色或暗灰綠色，后轉(zhuǎn)為黑褐色或黑色，生長(zhǎng)快，基質(zhì)由灰黑色轉(zhuǎn)為黑色，菌絲體表現(xiàn)不旺盛，溫度為26～28 ℃時(shí)在PDA上培養(yǎng)，約15 d 能產(chǎn)生分生孢子；在病果皮上，菌絲體旺盛，菌絲較細(xì)，深灰綠色；子座質(zhì)地堅(jiān)硬，內(nèi)含1 個(gè)至多個(gè)分生孢子器，分生孢子器為球形，極少數(shù)為單生，大多數(shù)為集生，大小為100～250 μm。分生孢子呈倒棒或長(zhǎng)梭狀，無色，單胞，大小為（14.2～27.3）μm×（4.0～7.3）μm[15]。

1.2.2 生物學(xué)特征

小穴殼菌在19～37 ℃時(shí)均可生長(zhǎng)，25～34 ℃時(shí)最宜，高于43 ℃或低于10 ℃時(shí)生長(zhǎng)被抑制；pH3.5～5.5 時(shí)最宜；相對(duì)濕度100%條件下，分生孢子3 h 后即可萌發(fā)，9 h 后達(dá)最大值；子座的形成需要光照；25%施?？巳橛蛯?duì)該病菌的室內(nèi)抑制力最大[16]。

1.3 擬莖點(diǎn)霉菌

1.3.1 形態(tài)學(xué)特征

擬莖點(diǎn)霉菌菌落在PDA 平板上為白色薄絨狀、生長(zhǎng)中速，平展，基質(zhì)最初為白色后呈淡黃色，后期生長(zhǎng)出黑色的小粒狀分生孢子器。分生孢子器為單生，質(zhì)硬，三角或扁球狀，大小為（125～300）μm×（135～175）μm；產(chǎn)孢細(xì)胞為瓶梗型，分生孢子梗分枝；分生孢子無色，單胞，多數(shù)呈近梭狀，少數(shù)為扁圓形。根據(jù)形態(tài)差異可以分成α型分生孢子與β型分生孢子。前者多為近梭形，大小范圍為（6.3～7.5）μm×（1.9～2.6）μm；后者呈線形，大小范圍為（20～30）μm×（0.8～1.0）μm[15]。

1.3.2 生物學(xué)特征

擬莖點(diǎn)霉菌在19～31 ℃均可生長(zhǎng)，25～31 ℃時(shí)最宜，高于34 ℃或低于13 ℃時(shí)受到抑制。在pH4～10 時(shí)適宜，pH6.0～6.5 時(shí)最宜；分生孢子器對(duì)光很敏感，尤其是黑光可促進(jìn)它的形成；苯井咪唑44 號(hào)對(duì)該菌的室內(nèi)抑制力最大[17]。

2 不同病原菌導(dǎo)致杧果蒂腐病的癥狀與規(guī)律

2.1 球二孢屬蒂腐病

2.1.1 癥狀

杧果球二孢屬蒂腐病在發(fā)病初期，蒂部呈深棕色，無色澤，病健部位相連接處清晰，在濕熱環(huán)境中貯藏時(shí)，病斑可向果身不斷擴(kuò)展，果皮可由暗棕色變?yōu)樽献厣蛏钭厣Ｍ瑫r(shí)，果肉組織流汁、軟化，有蜜甜味，溫度在25～34 ℃下3～5 d 導(dǎo)致整個(gè)果實(shí)腐爛。病果的果皮可以形成密集的暗色小顆粒，即分生孢子器[18]。

2.1.2 發(fā)病規(guī)律

初侵染源以枯萎的樹枝、樹皮、落葉為主，傳播媒介以雨水為主，分生孢子可從果實(shí)剪口、受傷的果柄或機(jī)械傷口侵入。果實(shí)成熟前，病菌處于潛伏狀態(tài)，成熟后迅速腐爛。大面積種植易感病品種、果園老化快、栽培管理?xiàng)l件差，花果期葉蟬、薊馬危害嚴(yán)重，以及遭遇暴雨、臺(tái)風(fēng)和冰雹等自然災(zāi)害，都是造成該病發(fā)生嚴(yán)重的重要原因。

2.2 小穴殼屬蒂腐病

2.2.1 癥狀

在成熟可食果實(shí)上主要的癥狀一共有3 種[3]：（1）蒂腐型，發(fā)病初始階段，在果蒂處呈現(xiàn)黃色、水漬狀病斑，病菌在溫度高和濕度大的環(huán)境貯藏，病斑可以迅速向果身擴(kuò)展，病健交界處模糊，病果迅速腐爛、流汁，病果皮表面會(huì)呈現(xiàn)出許多暗灰綠色菌絲體；在低濕度條件下，果皮上形成的許多小黑點(diǎn)即分生孢子器；（2）皮斑型，這種類型的癥狀與杧果炭疽病類似，發(fā)病早期，病斑呈淺棕色、圓狀、下凹，然后逐漸擴(kuò)大，病斑上常見輪紋，后期會(huì)出現(xiàn)暗色小斑點(diǎn)，在高濕條件下，病害部位可見灰綠色菌絲體；（3）端腐型，此類型在果實(shí)貯藏后期較為常見，果端部會(huì)出現(xiàn)暗黑色、水漬狀的病斑，擴(kuò)展快。

2.2.2 發(fā)病規(guī)律

該病菌在杧果枝梢樁口回枯處和病殘?bào)w上越冬，第二年3～4 月份，分生孢子器可以在病殘?bào)w上產(chǎn)生，然后大量的分生孢子被釋放出來，并通過傳粉昆蟲或風(fēng)雨傳播給幼果和花穗，分生孢子在水滴中大約6 h 后可萌發(fā)，然后長(zhǎng)出芽管侵入果皮中；潛伏在果蒂的組織內(nèi)，等待果實(shí)采收后開始發(fā)病并出現(xiàn)癥狀；此外，果柄的剪口也是病菌的重要侵入口。試驗(yàn)表明，在果柄的切割處，流出的杧果膠乳是此病原菌分生孢子萌發(fā)時(shí)的良好營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，小穴殼菌分生孢子可在2 h 內(nèi)萌發(fā)，潛伏期約為3 d，之后即可發(fā)病。

2.3 擬莖點(diǎn)霉屬蒂腐病

2.3.1 癥狀

擬莖點(diǎn)霉屬蒂腐病在杧果果實(shí)上，僅表現(xiàn)為蒂腐。發(fā)病早期，果蒂四周會(huì)呈現(xiàn)淺黃棕色斑點(diǎn)，擴(kuò)張遲緩，病健部位相連處清晰，果皮外表沒有菌絲，但解剖病果后，可以看出果肉中有大量白色菌絲體，果肉逐漸變軟變酸；在后期，果皮表面出現(xiàn)的小黑點(diǎn)即分生孢子器[6]。

2.3.2 發(fā)病規(guī)律

目前還沒有完全清楚，貯藏和運(yùn)輸中的病果是否是由田間輕度感病或還沒發(fā)病的果實(shí)混入的。品種間抗病性存在一定差異，據(jù)廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所調(diào)查，紫花杧比桂花杧更易感染此病。

3 杧果蒂腐病的致病機(jī)制分析

目前，關(guān)于3 種蒂腐病菌的致病機(jī)制研究，主要體現(xiàn)在菌株致病力差異，以及高活性的果膠酶、纖維素酶等酶能促使果實(shí)組織崩解，從而加速果肉腐爛[19-21]。相關(guān)研究表明，3 種蒂腐病菌的致病力存在極顯著差異，其中可可球二孢菌的致病力最強(qiáng)，接種96 h 后，病斑平均直徑達(dá)到4.10 cm，小穴殼菌和杧果擬莖點(diǎn)霉菌的致病力次之，病斑擴(kuò)展速度較可可球二孢菌慢，病斑平均直徑分別為2.43 cm 和1.67 cm。3 種蒂腐病菌在纖維素培養(yǎng)基和果膠培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好，其中可可球二孢菌在2 種培養(yǎng)基上的菌絲體生長(zhǎng)速度最快，極顯著高于其他2 種蒂腐病菌，產(chǎn)生的果膠酶和纖維素酶活性最高[22]。

3 種蒂腐病菌中只有可可球二孢菌的致病機(jī)制研究較多，國(guó)外研究表明，關(guān)于可可球二孢菌的致病機(jī)理，在香蕉[23]、山藥[24]、柑橘[25]、杧果[26]、木薯[27]、龍眼[28]等作物和水果上都能產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶，然而，由于寄主的不同，形成的細(xì)胞壁降解酶活性與種類也有所不同。此外，可可球二孢菌還能產(chǎn)生毒素危害[29]侵染后氧化代謝變化也引起發(fā)病[30]。該菌導(dǎo)致杧果果實(shí)腐爛速度加快，為了探索其原因，進(jìn)一步研究病原菌與寄主的互作機(jī)理和減少杧果采后的損失，胡美姣[22]開展了對(duì)可可球二孢菌在致病產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶、毒素和乙烯的變化規(guī)律研究，結(jié)果表明，可可球二孢菌在離體培養(yǎng)條件下或在接種杧果果實(shí)后均可產(chǎn)生多聚甲基半乳糖醛酸酶（PMG）、果膠甲基反式消除酶（PMTE）、多聚半乳糖醛酸酶（PG）、多聚半乳糖醛酸反式消除酶（PGTE）以及纖維素酶（Cx）。其中PMG、PG 與Cx 活性較高，在產(chǎn)生的3 種細(xì)胞壁降解酶中，PG與Cx 活性高峰出現(xiàn)較早，PMG 活性高峰出現(xiàn)最遲。

在液體培養(yǎng)基中可可球二孢菌能產(chǎn)生引起杧果嫩葉變褐、嫩枝萎蔫、果實(shí)腐爛的致病毒素。在酸性至中性條件下該毒素穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性強(qiáng)，對(duì)光照不敏感，在低溫條件下有利于該毒素的保存；在離體條件下可可球二孢菌可產(chǎn)生乙烯；接種到杧果果實(shí)上，在杧果果實(shí)內(nèi)可誘導(dǎo)果肉產(chǎn)生大量1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（ACC，乙烯合成前體），導(dǎo)致杧果果實(shí)迅速產(chǎn)生乙烯。在自然條件下，感染蒂腐病的果實(shí)在癥狀出現(xiàn)前1～2 d 乙烯釋放速度增加，并隨著病程的發(fā)展，乙烯釋放速率顯著增強(qiáng)，且3～5 d 內(nèi)，發(fā)病果實(shí)軟化、腐爛[22]。

4 杧果蒂腐病的綜合防治技術(shù)

物理防治與化學(xué)防治等多種方法結(jié)合使用，比單獨(dú)使用一種方法對(duì)杧果采后病害的抑制效果更好，如用多菌靈+52 ℃熱水處理杧果后在21～27 ℃的環(huán)境條件下貯藏，可明顯降低采后蒂腐病與炭疽病的發(fā)生，降低采后生理損失，使貨架期延長(zhǎng)至28 d 以上；采用同樣的方法處理后，在28～36 ℃環(huán)境條件下貯藏且不采用任何的處理措施，其貨架期僅分別為21 d 與17 d[31]。因此，目前均采取多種方法相結(jié)合的綜合治理技術(shù)來減輕蒂腐病為害。綜合防治區(qū)病害的防治方法包括以下幾種：（1）降低果園基地的濕度，包括整治果園基地內(nèi)的排水系統(tǒng)，防除雜草，合理修剪等；（2）降低病原菌的越冬基數(shù)與初次侵染源，包括做好果園清潔衛(wèi)生，冬季進(jìn)行修剪后噴施1～2 次保護(hù)性殺菌劑；（3）苗期發(fā)生病害及時(shí)清除病株，可用1 000 倍高錳酸鉀或硫酸銅浸泡病穴；（4）適時(shí)施藥，從花穗期到果實(shí)成熟前噴藥5～6 次；（5）待果實(shí)膨大中后期進(jìn)行套袋；（6）采后處理，果實(shí)可用清水漂洗后，置于52 ℃的40%多硫酮600 倍液中浸泡8 min，再取出晾干，常溫下單果包裝貯藏；（7）采后植物激素處理，在果蒂上施用一定濃度的植物激素，雖然不能明顯延緩果實(shí)后熟的進(jìn)程，但可維持果蒂的青綠，減小病果率；（8）采后化學(xué)處理，可與防治杧果炭疽病相結(jié)合，施用45%特克多SC500 倍液于52 ℃處理5 min 或45%咪鮮胺EC500～1 000 倍液常溫30～32 ℃浸泡2 min；（9）采后冷藏處理，果實(shí)收獲后放置在10～13 ℃溫度下貯藏，也可推遲該病的進(jìn)程。普通防治區(qū)可在冬季稍作修剪，待花穗期間噴藥1 次，結(jié)果期間噴藥2 次，采后處理的方法與上述方法相同，常溫下貯藏[32]。

5 展望

杧果蒂腐病是杧果最為嚴(yán)重的采后病害之一，主要為害杧果果實(shí)，為害程度僅次于炭疽病，嚴(yán)重限制了杧果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)杧果蒂腐病研究雖然取得了一定的成果，但仍有一些問題尚未解決：（1）由于杧果蒂腐病是多種病原菌導(dǎo)致的，其病原菌具有多樣性，所以需要不斷加強(qiáng)對(duì)病菌種類的鑒定、分布、侵染特點(diǎn)的深入探索；（2）對(duì)于杧果蒂腐病病原菌檢測(cè)技術(shù)的研究甚少，需要加強(qiáng)這方面的研究，并要將其廣泛的應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)踐中；（3）關(guān)于杧果蒂腐病致病機(jī)制，目前只針對(duì)可可球二孢菌開展較多，需要不斷完善該病的致病機(jī)制研究；（4）在杧果蒂腐病的防治中，單一技術(shù)遠(yuǎn)不如多種技術(shù)結(jié)合的效果好；近年來國(guó)內(nèi)杧果蒂腐病防治效果好的藥劑較少，因此需要加強(qiáng)綜合治理措施的推廣，運(yùn)用綠色防控技術(shù)，加強(qiáng)侵染源清除技術(shù)及對(duì)人體無害、環(huán)境污染小、高效低毒的綠色農(nóng)藥的研發(fā)、應(yīng)用和推廣。