血小板糖蛋白受體Ⅲa的PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期患者遺傳易感性的相關性

程淑清 陳安兒

[摘要] 目的 探討血小板糖蛋白受體Ⅲa（GPⅢa）基因PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期（PE）遺傳易感性的相關性。方法 選取2016年9月～2018年9月于本院住院分娩的PE患者120例為PE組，對照組為120例正常妊娠婦女。采用常規(guī)檢測收集普通風險指標并比較其在PE 組及對照組之間的差異。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術檢測GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性，分析血小板糖蛋白受體Ⅲa（GPⅢa）的PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期患者遺傳易感性的相關性。 結果 對照組和PE組A1/A1、A1/A2、A2/A2基因型頻率分別為75.0%（90/120）、23.3%（28/120）、1.7%（2/120）和70.0%（84/120）、26.7%（32/120）、3.3%（4/120），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;對照組和PE組的等位基因頻率A1、A2分別為76.3%（116/152）、23.7%（36/152）和79.7%（118/148）、20.3%（30/148），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與A1/A1基因型相比，A1/A2和A2/A2基因型具有較高的收縮壓和舒張壓，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。結論 中國人群PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期風險無關，尚需在更大的樣本中進行驗證。

[關鍵詞] 子癇前期;血小板糖蛋白受體;多態(tài)性;遺傳易感性

[中圖分類號] R96? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）29-0020-04

[Abstract] Objective To explore the correlation between the PLA1/A2 polymorphism of the platelet glycoprotein Ⅲa receptor（GPⅢa） genes and genetic susceptibility with preeclampsia（PE）. Methods A total of 120 patients with PE hospitalized in our hospital for delivery from September 2016 to September 2018 were selected as the PE group and 120 normal pregnant women were taken as the control group. Common risk indicators were collected through conventional detection and their differences between the PE group and the control group were compared. The technology of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） was used to detect the PLA1/A2 polymorphism of GPⅢA， so as to analyze the correlation between PLA1/A2 polymorphism of GPⅢa and genetic susceptibility of the patients with PE. Results The genotype frequencies of A1/A1， A1/A2 and A2/A2 in the control group and the PE group were respectively 75.0%（90/120）， 23.3%（28/120）， 1.7%（2/120） and 70.0%（84/120）， 26.7%（32/120）， 3.3%（4/120）， and the differences were statistically insignificant（P>0.05）. The allele frequencies of A1 and A2 in the control group and the PE group were respectively 76.3%（116/152）， 23.7%（36/152） and 79.7%（118/148）， 20.3%（30/148）， and the differences were statistically insignificant（P>0.05）. Compared with genotype A1/A1， genotype A1/A2 and genotype A2/A2 had higher systolic and diastolic blood pressure， and the differences were statistically significant（P<0.001）. Conclusion Whether PLA1/A2 polymorphism in Chinese population is related to the risk of PE or not still needs to be verified by larger samples.

[Key words] Preeclampsia; Platelet glycoprotein receptor; Polymorphism; Genetic susceptibility

子癇前期（PE）是一種可遺傳的妊娠特有內皮疾病，免疫不良、胎盤發(fā)育不足和滋養(yǎng)細胞浸潤、胎盤缺血、氧化應激和血栓形成是PE發(fā)展的關鍵因素[1]。多種血栓形成風險的基因變異影響PE遺傳易感性，包括纖溶酶原激活物抑制劑1型（PAI-1）基因啟動子中的缺失/插入多態(tài)性[2]、FV Leiden突變和5、10亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）的C>T677多態(tài)性[3]。血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa是纖維蛋白原和von Willebrand因子的膜受體[4]，其介導的血小板聚集和血栓形成在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展及預后方面具有關鍵性調節(jié)作用。GPⅢa基因PLA1/A2多態(tài)性是由第2外顯子的編碼突變（98C>T）導致33Leu>Pro取代，從而在血小板上產生兩種抗原性不同形式的成熟GPⅡb/Ⅲa抗原（PLA1和PLA2）。2001年在北歐白種人中首次報道GPⅢa 98T多態(tài)性的攜帶可能是子癇前期的未知危險因素[5]。但2003年一項基于南非黑人的研究顯示PLA1/PLA2多態(tài)性并非子癇前期的病理病因的危險因素[6]。目前尚無PLA1/PLA2多態(tài)性與中國人群PE遺傳易感性的相關性研究。因此本研究選取PE患者作為研究對象，將明確PLA1/PLA2多態(tài)性是否參與PE發(fā)病機制，為預警病情發(fā)展和基因水平治療干預提供思路，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2016年9月～2018年9月我院產科收治的子癇前期患者120例，診斷標準參照第8版《婦產科學》[7]。年齡22～39歲，平均（27.4±3.5）歲，平均孕齡（34.3±3.2）周。納入標準：妊娠20周后出現(xiàn)高血壓（收縮壓≥140 mmHg或舒張壓≥90 mmHg）并伴有蛋白尿≥300 mg/24 h或隨機尿蛋白定性≥（+）。排除標準：既往有子癇前期病史者;有不良煙酒嗜好者;妊娠合并其他疾病者。選擇同期健康足月孕婦120例作為對照組，年齡23～40歲，平均（26.8±3.4）歲，均排除染色體疾病、生殖道感染性疾病、代謝內分泌疾病及免疫系統(tǒng)性疾病等其他內外科合并癥者。本研究經本院臨床醫(yī)學倫理委員會審核批準，且所有入選對象均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1風險指標檢測? 促凝管空腹采集入組孕婦靜脈血4 mL，待血液凝固后3500 r/min離心15 min獲得相應血清，-80℃保存待用。采用全自動生化分析儀Backman AU5800測定谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、血肌酐（Scr）和尿蛋白;采用WofenTOP 700測定D-D二聚體（D-Dimer）;血小板計數(shù)（PLT）采用Mindray BC6800。

1.2.2 DNA提取及基因分型? EDTA抗凝采血管抽取PE組和對照組外周靜脈血2 mL，使用QIAamp DNA blood kit（Qiagen，Germany）提取基因組DNA，-80℃冰箱保存。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術檢測GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性，擴增引物序列分別為5'-TGCTGGACTTCTCTTTGGGC-3'（F）和5'-TCAGGTC TCTCCCCGCAAAG-3'（R），PCR循環(huán)條件：96℃變性15 s，57℃退火40 s，72℃延伸30 s，共39個循環(huán)，75℃再延長5 min。使用MyCycler熱循環(huán)儀系統(tǒng)（Bio-Rad，USA）進行擴增。

1.3觀察指標

收集并比較PE組和對照組患者的年齡、孕齡、體質量指數(shù)（BMI）、收縮壓（SBP）和舒張壓（DBP）等普通風險指標。

1.4統(tǒng)計學分析

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以[n（%）]表示，計量資料以（x±s）表示，組間比較采用Student's t檢驗，Hardy-Weinberg遺傳平衡分析采用擬合優(yōu)度χ2檢驗。組間等位基因多態(tài)性的比較采用Pearson's χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 PE組和對照組普通風險指標比較

見表1。對年齡、孕齡等指標進行計量資料單因素分析結果顯示，所有指標呈正態(tài)分布且方差齊性，其中PE組生產時的孕齡、PLT計數(shù)顯著低于對照組（P<0.05），收縮壓、舒張壓、血肌酐、尿蛋白和D-Dimer顯著高于對照組（P<0.05）。而兩組孕婦的年齡、體質量指數(shù)、ALT及AST等指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2 PE組和對照組的GPⅢa基因型和等位基因頻率

Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗結果顯示，對照組GPⅢa基因的PLA1/A2位點基因型分布和等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05），表明該研究所選樣本具有良好的群體代表性?；蚍中徒Y果顯示，GPⅢa基因的PLA1/A2多態(tài)性基因型A1/A1、A1/A2和A2/A2在對照組人群中則分別為75.0%（90/120）、23.3%（28/120）和1.7%（2/120），在PE組中的表達分別為70.0%（84/120）、26.7%（32/120）和3.3%（4/120），組間比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.140，P=0.565）。PE組等位基因A1和A2頻率分別為76.3%（116/152）和23.7%（36/152）;對照組分別為79.7%（118/148）和20.3%（30/148），組間比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.509，P=0.475）。見表2。

2.3 PLA1/A2基因多態(tài)性對臨床指標的影響

見表3。年齡、孕齡、體質量指數(shù)、尿蛋白、PLT、Scr、ALT、AST和D-Dimer指標在各基因型間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;收縮壓和舒張壓在各基因型間存在顯著差異，與A1/A1基因型相比，A1/A2和A2/A2兩種基因型收縮壓和舒張壓較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與A1/A2基因型相比，A2/A2基因型收縮壓和舒張壓較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3 討論

子癇前期是妊娠常見并發(fā)癥，嚴重危及孕產婦和圍產兒的生命健康安全，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為妊娠20周后出現(xiàn)高血壓，并伴有蛋白尿或母體出現(xiàn)重要臟器和器官的異常改變、胎兒胎盤受累等[8]。PE是一種具有家族傾向，且與人種、種族和環(huán)境因素相關的多系統(tǒng)復雜疾病，目前該疾病的發(fā)病機制尚未明確，因此探尋PE的具體發(fā)病機制，以制訂有效的臨床防治方案，已成為當前產科領域急需解決的難題之一。本研究結果顯示，子癇前期患者顯示出高水平的收縮壓、舒張壓、血肌酐、尿蛋白和D-Dimer及低水平的孕齡、PLT計數(shù)。

GPⅡb～Ⅲa是與纖維蛋白原和von Willebrand因子（vWF）結合的血小板受體。其在血小板聚集和受損血管壁上的血栓形成中起關鍵作用[9-10]。編碼GPⅡb～Ⅲa的基因位于染色體17q21上，遺傳變異可能會影響GP復合物的激活和聚集本身[11]。正常凝血狀態(tài)下，血小板在血液中自由循環(huán)，不與血管壁或彼此相互作用。當不同誘導劑促成血小板激活后，GPⅡb/Ⅲa發(fā)生膜內側外翻的構象改變，與纖維蛋白原親和力顯著增加，導致血小板聚集。國內外多項研究表明[12-14]，GPⅡb/Ⅲa蛋白介導的血小板聚集、血栓形成在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展及預后方面起關鍵性調節(jié)作用。子癇前期患者GPⅢa蛋白表達較對照組明顯升高，血小板活性顯著增強，表明GPⅡb/Ⅲa在子癇前期凝血過程中起關鍵性調節(jié)作用，可以作為診斷及預測子癇前期進展的一項指標。GPⅡb/Ⅲa蛋白在子癇前期患者體內持久存在，可能是導致子癇前期患者在終止妊娠后，血液持續(xù)高凝狀態(tài)，遠期并發(fā)血栓、缺血性心血管疾病的風險顯著增高的原因[15]。迄今為止，GPⅡb/Ⅲa基因多態(tài)性與子癇前期遺傳易感性及相關并發(fā)癥患病風險的研究較少。

血小板GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性已在心血管疾病中得到廣泛研究，且PLA2等位基因的存在與體外血小板聚集增加有關，而與缺血性心血管疾病在體內有關[16-18]。PLA2多態(tài)性血小板比PLA1多態(tài)性血小板更容易激活糖蛋白GPⅡb/Ⅲa，進而易與纖維蛋白原結合，從而提示PLA2多態(tài)性血小板更傾向于促進血栓的形成，增加心血管事件。本研究也顯示PLA1/A2多態(tài)性與收縮壓和舒張壓存在一定的聯(lián)系。一項基于北歐白人的研究顯示，PLA1/A2多態(tài)性與PE患病風險有關，攜帶PLA2的個體PE風險較高。然而，基于南非黑人的研究表明PLA1/A2多態(tài)性與PE遺傳易感性無關。本研究基于中國本土人群的結果顯示，PE組患者和正常對照組GPⅢa的PLA1/A2多態(tài)性位點的基因型分布和等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學意義，表明PLA1/A2基因多態(tài)性在PE的發(fā)生發(fā)展中可能并不起關鍵性作用，尚不能認為該位點與PE遺傳易感性相關。薈萃分析顯示，小劑量阿司匹林可以明顯降低早發(fā)PE及圍產期病死率，而PLA1等位基因純合的血小板似乎對低劑量阿司匹林的抑制作用不敏感。阿司匹林的這種敏感性可能具有潛在的臨床意義，可以根據患者的PLA基因型最佳地調整特定的抗血小板治療[19]。然而，GPⅢa PLA1/A2多態(tài)性在中國很少見，與本研究結果相一致，顯示這些候選功能多態(tài)性不太可能是中國人阿司匹林藥效學的重要貢獻者[20]。雖然以上證據均顯示GPⅢa基因PLA1/A2多態(tài)性與PE風險無關，但GPⅢa基因與PE風險的關系尚未徹底弄清。另外，PLA1/A2基因多態(tài)性與PE心血管相關并發(fā)癥的患病風險關系尚未了解清楚，這對PE患者的綜合治療和產后護理至關重要。

綜上所述，PE是一種復雜的多因素、多系統(tǒng)疾病，關于易感基因的研究正在深入開展，在PE的發(fā)生、發(fā)展過程中，每個基因的多態(tài)性在PE的危險性方面均可能有一定作用。本研究首次在中國人群中證實GPⅢa基因PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期的易感性無關，但仍需更大樣本進行驗證。另外，鑒于GPⅢa重要的生物學功能，需要進一步的臨床研究明確PLA1/A2多態(tài)性與子癇前期相關并發(fā)癥的關系，完善和改進子癇前期相關并發(fā)癥的預防和治療。

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（收稿日期：2020-05-19）