ZEB2與E-cadherin在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的表達意義

王迎賓 李丹丹 付玉環(huán)

[摘要] 目的 研究E盒結(jié)合鋅指蛋白2（ZEB2）與E-鈣黏蛋白（E-cadherin）在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的表達意義。方法 選取河北省唐山市協(xié)和醫(yī)院2016年1月—2019年3月88例前列腺標本，其中60例前列腺癌組織為觀察組，28例良性前列腺增生組織為對照組，采用免疫組化SP法檢測兩組患者ZEB2、E-cadherin蛋白表達。分析ZEB2和E-cadherin蛋白表達與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果 兩組ZEB2、E-cadherin蛋白陽性表達率比較，差異有高度統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。ZEB2、E-cadherin蛋白的表達與前列腺癌患者TNM分期和骨轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P < 0.05或P < 0.01），而與年齡和Gleason分級無關(guān)（P > 0.05）。Spearman等級相關(guān)分析顯示，前列腺癌組織中ZEB2與E-cadherin蛋白的表達呈負相關(guān)（r = -0.377，P < 0.01）。 結(jié)論 ZEB2蛋白的高表達與E-cadherin蛋白的表達降低在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。

[關(guān)鍵詞] 前列腺癌;E盒結(jié)合鋅指蛋白2;E-鈣黏蛋白;良性前列腺增生

[中圖分類號] R737? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2020）10（b）-0102-04

[Abstract] Objective To study the expression significance of zinc-finger E-box binding protein 2 （ZEB2） and E-cadherin in the occurrence and development of prostate cancer. Methods A total of 88 prostate specimens from Tangshan Union Medical College Hospital from January 2016 to March 2019 were selected. Among them， a total of 60 prostate cancer tissues were in the observation group and a total of 28 benign prostate hyperplasia tissues were in the control group. The immunohistochemical SP method was used to detect ZEB2 and E-cadherin protein in the two groups. The relationship between ZEB2 and E-cadherin protein expression and clinicopathological parameters of prostate cancer were analyzed. Results The positive expression rate of ZEB2 and E-cadherin between the two groups were compared， and the differences were highly statistically significant （P < 0.01）. The expression of ZEB2 and E-cadherin protein were closely related to the TNM staging and bone metastasis of prostate cancer patients （P < 0.05 or P < 0.01）， but had nothing to do with age and Gleason grade （P > 0.05）. Spearman rank correlation analysis showed that ZEB2 and E-cadherin protein expression in prostate cancer tissue were negatively correlated （r = -0.377， P < 0.01）. Conclusion The high expression of ZEB2 protein and the reduced expression of E-cadherin protein may play an important role in the occurrence and development of prostate cancer.

[Key words] Prostate cancer; Zinc-finger E-box binding protein 2; E-cadherin; Benign prostate hyperplasia

前列腺癌是一種常見且惡性程度高的男性泌尿生殖系腫瘤。雖然前列腺癌的各種治療方法得到了很大的發(fā)展和應用，但預后問題仍然存在。前列腺癌患者預后仍然較差，5年生存率約為50%[1-3]。因此，尋找和鑒定有效的分子標志物以評估前列腺癌患者的預后是有必要的。越來越多的臨床證據(jù)表明，惡性腫瘤的臨床預后不良主要是由于浸潤和轉(zhuǎn)移率高所致。近年來，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）被證實與前列腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。E-鈣黏蛋白（E-cadherin）被認為是通過調(diào)節(jié)啟動過程上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化期間細胞間黏附的關(guān)鍵因子，并且E-cadherin的喪失加速了某些癌癥中的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤進展。有研究顯示[5-6]，E盒結(jié)合鋅指蛋白2（ZEB2）可以調(diào)節(jié)E-cadherin的表達，然后在腫瘤侵襲中發(fā)揮重要作用，包括膠質(zhì)瘤、腎細胞癌和前列腺癌。本研究擬探討前列腺癌組織中ZEB2與E-cadherin的表達，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇河北省唐山市協(xié)和醫(yī)院（以下簡稱“我院”）2016年1月—2019年3月前列腺癌手術(shù)標本60例，年齡58～85歲，平均（68.43±8.42）歲，其中臨床分期（TNM分期[7]）：T1～T2期23例、T3～T4期37例;病理分級（Gleason評分標準[8]）≤7分（高、中分化）32例、>7分（低分化）28例;伴有骨轉(zhuǎn)移39例。選擇我院同期良性前列腺增生（BPH）手術(shù)標本28例作為對照組，年齡63～82歲，平均（71.36±7.53）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準。所有標本均經(jīng)病理科確診為前列腺癌或良性前列腺增生，并依據(jù)《前列腺癌診斷標準》（WS336-2011）[9]。排除標準：接受內(nèi)分泌、放化療等治療;合并其他惡性腫瘤。

1.2 試劑與方法

兔抗人ZEB2多克隆抗體為中杉金橋公司產(chǎn)品（生產(chǎn)批號：183654223），兔抗人E-cadherin多克隆抗體為中杉金橋公司產(chǎn)品（生產(chǎn)批號：19122682）。DAB染色液批號：20011502，產(chǎn)品編號：PV-8000D。顯微鏡生產(chǎn)廠商：OLYPUS;型號：BX53。免疫組織化學染色操作參照SP法說明書進行，染色結(jié)果用DAB光鏡下顯色，蘇木精復染，常規(guī)脫水，透明，中性樹膠封片后觀察并分析。

1.3 結(jié)果判斷

ZEB2蛋白染色主要定位于細胞質(zhì)，為淡黃色至棕褐色顆粒。E-cadherin蛋白染色主要在細胞膜和細胞質(zhì)。免疫組化陽性結(jié)果通過陽性細胞的百分比和染色強度綜合判斷。每例均由2名病理醫(yī)師隨機觀察5個高倍視野（400×），各計數(shù)100個細胞。陽性細胞百分比<5%記0分，5%～25%記1分，>25%～50%記2分，>50%記3分;染色強度：無色記0分，淡黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分;最后兩項積分相加，≥3分為陽性，<3分為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法

運用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示。計數(shù)資料以例數(shù)表示，采用χ2檢驗。Spearman等級相關(guān)分析法進行相關(guān)性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者ZEB2和E-cadherin蛋白表達比較

兩組患者ZEB2、E-cadherin蛋白陽性表達率比較，差異有高度統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。見表1、圖1。

3 討論

EMT使具有極性的上皮細胞在特定情況下逐漸失去細胞原有形態(tài)結(jié)構(gòu)、細胞極性，向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化，在這個過程中獲得了遷移能力[10-11]。在腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中，癌細胞通過EMT實現(xiàn)對周圍組織的浸潤。E-cadherin表達的降低是EMT過程中的關(guān)鍵事件[12-13]。ZEB2基因?qū)儆贓盒結(jié)合鋅指蛋白基因家族，通過抑制E-cadherin基因轉(zhuǎn)錄，導致E-cadherin的表達降低，促進細胞發(fā)生EMT，從而增強細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

鄭麗等[14]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中ZEB2蛋白表達顯著高于乳腺良性病變組織，ZEB2蛋白表達與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期呈正相關(guān)，且與乳腺癌預后相關(guān)。羅慶豐等[15]研究提示ZEB2蛋白陽性表達與鼻咽癌遠處轉(zhuǎn)移、TNM分期、病理分型密切相關(guān)。體外實驗研究顯示[16-17]，下調(diào)ZEB2基因表達可以抑制卵巢癌細胞及乳腺癌細胞的侵襲和遷移能力。本研究結(jié)果顯示，ZEB2在前列腺癌組織中的陽性表達率高于良性前列腺增生組織，且表達差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），提示前列腺癌組織中ZEB2蛋白的表達異常升高;且前列腺癌中ZEB2蛋白表達與前列腺癌患者的TNM分期、骨轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與患者的年齡和Gleason分級無關(guān)。提示ZEB2蛋白表達升高可能與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

E-cadherin是一種重要的細胞間黏附分子，是EMT中的關(guān)鍵因子，對同種細胞間相互黏附、維持組織結(jié)構(gòu)的完整性和極性及抑制細胞離散等方面起重要作用，其表達降低促進EMT的進展，增強腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力[18-20]。李家平等[21]研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin在正常子宮內(nèi)膜呈高表達，而在子宮內(nèi)膜腺癌顯示低表達。本研究結(jié)果顯示，在前列腺癌組織中E-cadherin表達低于良性前列腺增生組織，與陶曉峰等[22]觀點一致。同時，E-cadherin與前列腺癌患者的TNM分期及骨轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與患者年齡、Gleason分級無關(guān)。提示E-cadherin表達降低導致癌細胞間的黏附減弱，從而促進前列腺癌浸潤和轉(zhuǎn)移。

已有研究發(fā)現(xiàn)，ZEB2與E-cadherin在鼻咽癌[15]、膀胱癌[23]、食管癌[24]中表達呈負相關(guān)，認為兩者存在拮抗作用。本研究中ZEB2與E-cadherin兩者在前列腺癌組織表達呈負相關(guān)，認為可能原因為ZEB2通過抑制E-cadherin的表達，降低細胞與細胞、細胞與基質(zhì)黏附力，促進細胞發(fā)生EMT，從而促進前列腺癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。

綜上所述，ZEB2與E-cadherin是前列腺惡性演進過程中的兩項重要因子，兩者可能起著既獨立又協(xié)同的作用，聯(lián)合檢測ZEB2和E-Cadherin可作為判斷前列腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的重要生物學指標。另外，ZEB2可作為評判預后的指標及治療干預前列腺癌的新靶點，為臨床診治前列腺癌提供新的思路。

[參考文獻]

[1]? Tosoian JJ，Mamawala M，Epstein JI，et al. Intermediate and Longer-Term Outcomes From a Prospective Active-Surveillance Program for Favorable-Risk Prostate Cancer [J]. J Clin Oncol，2015，33（30）：3379-3385.

[2]? Fizazi K，Tran NP，F(xiàn)ein L，et al. Abiraterone plus Prednisone in Metastatic，Castration-Sensitive Prostate Cancer [J]. N Engl J Med，2017，377（4）：352-360.

[3]? Dragomir A，Rocha J，Vanhuyse M，et al. Treatment patterns and trends in patients dying of prostate cancer in Quebec：a population-based study [J]. Curr Oncol，2017，24（4）：240-248.

[4]? Graff RE，Judson G，Ahearn TU，et al. Circulating antioxidant levels and risk of prostate cancer by TMPRSS2：ERG [J]. Prostate，2017，77（6）：647.

[5]? Chen H，Lu WB，Huang C，et al. Prognostic significance of ZEB1 and ZEB2 in digestive cancers：a cohort-based analysis and secondary analysis [J]. Oncotarget，2017，8（19）：31435-31448.

[6]? Ding WJ，Zhou M，Chen MM，et al. HOXB8 promotes tumor metastasis and the epithelial-mesenchymal transition via ZEB2 targets in gastric cancer [J]. J Cancer Res Clin Oncol，2017，143（3）：385-397.

[7]? Wang Q，Zhang JG，Wang W. Expression and significance of S100P，CD147，and OCT4 in different prostate cancer tissue TNM stages [J]. Genet Mol Res，2015，14（2）：6844-6851.

[8]? Mai ZP，Yan WG，Li HZ，et al. Clinical characteristics and outcome of gleason score 10 prostate cancer on core biopsy treated by external radiotherapy and hormone therapy [J]. Chin Med Sci J，2015，30（2）：90-94.

[9]? 王行環(huán)，劉同族.提高認識規(guī)范診療——《前列腺癌診斷標準》解讀[J].中國衛(wèi)生標準管理，2011，2（4）：25-27.

[10]? Shamir ER，Pappalardo E，Jorgens DM，et al. Twist1-induced dissemination preserves epithelial identity and requires E-cadherin [J]. J Cell Biol，2014，204（5）：839-856.

[11]? G？觟ppel J，M？觟ckelmann N，Münscher A. Expression of Epithelial-Mesenchymal Transition Regulating Transcription Factors in Head and Neck Squamous Cell Carcinomas [J]. Anticancer Res，2017，37（10）：5435-5440.

[12]? Werden SJ，Sphyris N，Sarkar TR，et al. Phosphorylation of serine 367 of FOXC2 by p38 regulates ZEB1 and breast cancer metastasis，without impacting primary tumor growth [J]. Oncogene，2016，35（46）：5977-5988.

[13]? 阮水良，韓晨陽，官俏兵，等.IL-9通過TGF-β/Smad通路誘導胃癌MKN-45細胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[J].中國病理生理雜志，2018，34（10）：1748-1753.

[14]? 鄭麗，趙敏，昂琳，等.乳腺癌中BCL-6和ZEB2的表達及其意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2017，33（1）：50-54.

[15]? 羅慶豐，修穆群，高文，等.ZEB2蛋白表達和E-cadherin蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的臨床意義[J].實用癌癥雜志，2019，34（5）：704-706.

[16]? 張寧，左麗，肖謎，等.E盒結(jié)合鋅指蛋白2基因?qū)β殉舶┘毎忠u及遷移影響的實驗研究[J].癌癥進展，2019， 17（7）：780-783.

[17]? Xavir PLP，Cordeiro YG，Rochetti AL，et al. ZEB1 and ZEB2 transcription factors are potential therapeutic targets of canine mammary cancer cells [J]. Vet Comp Oncol，2018，16（4）：596-605.

[18]? Ding C，Luo J，Li L，et al. Gab2 facilitates epithelial-to-mesenchymal transition via the MEK/ERK/MMP signaling in colorectal cancer [J]. J Exp Clin Cancer Res，2016，35：5.

[19]? 葛曉晴，楊鯤鵬，任景麗，等.E-鈣黏附蛋白和E盒結(jié)合鋅指蛋白2在非小細胞肺癌中表達及預后[J].中華實用診斷與治療雜志，2015，29（4）：379-381.

[20]? 陳小燕，劉琴，蘭康云，等.Srx與E-cadherin在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義[J].免疫學雜志，2015，31（12）：1067-1071.

[21]? 李家平，何濤，袁紅瑛.GSK-3β和E-cadherin在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達和意義[J].重慶醫(yī)學，2019，48（2）：288-292.

[22]? 陶曉峰，劉暢，付明杰，等.HMGA2和E-cadherin在前列腺癌組織中的表達及意義[J].實用醫(yī)學雜志，2018， 34（2）：191-194.

[23]? 鐘曉健，黃洪才，葉東明，等.膀胱尿路上皮癌組織中E盒結(jié)合鋅指蛋白2、E-鈣黏附蛋白的表達變化及其意義[J].山東醫(yī)藥，2016，56（39）：9-11.

[24]? 霍小東，張洪典，馬釗，等.食管鱗癌預后與E盒結(jié)合鋅指蛋白2和E-鈣黏蛋白表達的關(guān)系[J].中華實驗外科雜志，2018，35（3）：550-553.

（收稿日期：2020-04-07）