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    不同乳酸菌對液態(tài)發(fā)酵米醋總酸及風(fēng)味物質(zhì)的影響

    2020-12-12 13:26:58鄧永建陸震鳴張曉娟柴麗娟余永建李華鐘史勁松許正宏
    食品科學(xué) 2020年22期
    關(guān)鍵詞:米醋食醋麩皮

    鄧永建,陸震鳴,張曉娟,柴麗娟,李 信,余永建,李華鐘,史勁松,許正宏,

    (1.江南大學(xué)生物工程學(xué)院,江蘇 無錫 214122;2.江南大學(xué) 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室,江蘇 無錫 214122;3.江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司,江蘇 鎮(zhèn)江 212143;4.江南大學(xué)藥學(xué)院,江蘇 無錫 214122)

    按照醋酸發(fā)酵方式的差異,釀造食醋可分為固態(tài)發(fā)酵食醋、液態(tài)發(fā)酵食醋、固液復(fù)合發(fā)酵食醋等,其中固態(tài)發(fā)酵食醋以東方谷物醋為主,如我國的山西老陳醋、鎮(zhèn)江香醋、四川麩醋等[1],而液態(tài)發(fā)酵食醋廣泛存在于世界各地,如德國酒精醋、英國麥芽醋、意大利葡萄醋等。液態(tài)發(fā)酵法又可分為表面靜態(tài)發(fā)酵法、深層通風(fēng)發(fā)酵法和滴淋發(fā)酵法等[2],其中深層通風(fēng)發(fā)酵法由于具有生產(chǎn)速度快、生產(chǎn)效率高等優(yōu)點而應(yīng)用廣泛[3]。

    液態(tài)發(fā)酵米醋主要以大米為原料,經(jīng)蒸煮、糖化、乙醇發(fā)酵獲得米酒,進而接種醋酸菌進行醋酸發(fā)酵而成[4]。與傳統(tǒng)多菌種固態(tài)釀醋工藝相比,液態(tài)發(fā)酵制醋的原料和釀造菌種相對單一,發(fā)酵周期較短,產(chǎn)酸以醋酸為主,產(chǎn)品酸感刺激、風(fēng)味寡淡、口感單調(diào)。目前,國內(nèi)外針對液態(tài)發(fā)酵食醋的研究主要集中在篩選產(chǎn)酸速率快、耐酸、耐乙醇的醋酸菌以及設(shè)計新型、產(chǎn)酸效率高的發(fā)酵罐等,但對改善液態(tài)發(fā)酵食醋口感和風(fēng)味方面的研究較少。有研究[5-6]在傳統(tǒng)食醋醋醅中篩選了能夠耐受10%(體積分?jǐn)?shù))乙醇、3%乙酸、40 ℃溫度的醋酸菌,并將其用于西瓜醋的釀造;吳光忠等[7]采用獼猴桃和糯米為原料釀造果香型米醋,改善了米醋的風(fēng)味品質(zhì);方冠宇[8]研究了不同發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)對浙江玫瑰醋品質(zhì)的影響,發(fā)現(xiàn)用氣動攪拌發(fā)酵罐釀造的玫瑰醋與傳統(tǒng)玫瑰醋最接近。

    我國傳統(tǒng)食醋釀造過程中,大量乳酸菌參與了發(fā)酵,能夠產(chǎn)生適量乳酸,柔和食醋酸感,同時促進食醋產(chǎn)品中多種風(fēng)味物質(zhì)的形成[9-10]。本研究嘗試在液態(tài)發(fā)酵食醋生產(chǎn)前期,將麩皮浸出液用乳酸菌靜置發(fā)酵,然后加入米酒并接種醋酸菌啟動醋酸發(fā)酵。通過增加底物和微生物種類,以期達(dá)到改善液態(tài)發(fā)酵米醋風(fēng)味品質(zhì)的目標(biāo),為優(yōu)化米醋釀造工藝提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    麩皮和米酒由江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司提供,其中米酒乙醇體積分?jǐn)?shù)為10%。

    氫氧化鈉、硫酸鋅、亞鐵氰化鉀(均為分析純)國藥集團化學(xué)試劑有限公司;2-辛醇、草酸、酒石酸、丙酮酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、琥珀酸(均為色譜純)上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

    實驗菌種見表1。

    表1 本研究所用菌種信息Table 1 Information about bacterial strains used in this study

    1.2 儀器與設(shè)備

    全溫?fù)u瓶柜 太倉市強樂實驗設(shè)備廠;生化培養(yǎng)箱 上海精宏實驗設(shè)備有限公司;e2695高效液相色譜儀 美國Waters公司;7890B-5977B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國Agilent公司。

    1.3 方法

    1.3.1 米醋的液態(tài)發(fā)酵

    麩皮浸出液的制備:將麩皮與水按質(zhì)量比1∶4混合,超聲處理20 min,用雙層紗布過濾,得到麩皮浸出液。

    乳酸發(fā)酵:取50 mL麩皮浸出液,分別接種10 株不同的乳酸菌,置于37 ℃生化培養(yǎng)箱中靜置發(fā)酵24 h,得到乳酸發(fā)酵液。

    醋酸發(fā)酵:實驗組取40 mL乳酸發(fā)酵液,對照組取40 mL麩皮浸出液,分別加入60 mL米酒,并接種醋酸菌,置于30 ℃全溫?fù)u瓶柜中,轉(zhuǎn)速200 r/min進行醋酸發(fā)酵。

    1.3.2 總酸的測定

    參考GB/T 5009.41—2003《食醋衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》[11]。

    1.3.3 有機酸的測定

    參考GB/T 18623—2011《國家地理標(biāo)志產(chǎn)品 鎮(zhèn)江香醋》[12]。

    1.3.4 揮發(fā)性化合物的檢測[13]

    樣品預(yù)處理:取1 mL米醋加入20 mL頂空萃取瓶中,加5 mL水、2.5 g氯化鈉、10 μL 2-辛醇內(nèi)標(biāo)(25 mg/L),放入1 顆磁力攪拌子,置于恒溫加熱磁力攪拌器中,50 ℃水浴預(yù)熱5 min,隨后將老化過后的萃取頭插入萃取瓶,50 ℃頂空萃取40 min。

    氣相色譜條件: 色譜柱:DB-WAX(30 m×0.25 mm,0.25 μm);載氣為高純氦氣,柱流量1 mL/min,不分流;進樣口溫度250 ℃;升溫程序:起始40 ℃,保持5 min,以5 ℃/min升至120 ℃,然后以10 ℃/min升至240 ℃,保持5 min,后運行溫度240 ℃,后運行5 min。

    質(zhì)譜條件:傳輸線溫度280 ℃,連接桿溫度150 ℃;離子源為電子電離源,電子能量70 eV,離子源溫度230 ℃,質(zhì)量掃描范圍m/z33~450;ACQ方式Scan。

    定性方法:將測得的質(zhì)譜圖與NIST17.L譜庫進行檢索比對,確認(rèn)各個色譜峰對應(yīng)的化學(xué)成分。

    定量方法:采用半定量的方法,以測得的2-辛醇內(nèi)標(biāo)峰面積與被測物峰面積比值計算米醋中各種揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)含量。

    1.3.5 米醋的感官評價[14-16]

    由10 名(5 男,5 女)經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員組成感官評價小組,按照表2的評價標(biāo)準(zhǔn)(100 分制)對所得的11 個米醋樣品進行感官評價,以平均得分為最終結(jié)果。

    表2 米醋感官評價標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Criteria for sensory evaluation of rice vinegar

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    采用Microsoft Excel 2010進行數(shù)據(jù)處理,采用MetaboAnalyst(https://www.metaboanalyst.ca/)在線工具進行聚類分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同乳酸菌發(fā)酵麩皮浸出液的總酸及有機酸組成

    麩皮是固態(tài)發(fā)酵食醋釀造的重要輔料之一,富含多種營養(yǎng)物質(zhì),包括小分子糖類、氨基酸、維生素和礦物質(zhì)等[17-18]。表3為麩皮浸出液經(jīng)不同乳酸菌發(fā)酵24 h后發(fā)酵液的總酸和有機酸組成。麩皮浸出液的總酸為1.62 g/L(以乳酸計),以酒石酸為主要有機酸;經(jīng)不同乳酸菌發(fā)酵后,總酸為7.2~14.5 g/L(以乳酸計);有機酸組成發(fā)生了明顯改變,乳酸、乙酸、檸檬酸和琥珀酸含量顯著上升,而草酸和丙酮酸含量變化不明顯。短乳桿菌L-02的產(chǎn)酸能力最弱,而副干酪乳桿菌L-06的產(chǎn)酸能力最強。

    表3 乳酸菌發(fā)酵24 h后總酸及有機酸組成Table 3 Total acidity and organic acid composition of lactic acid bacteria-fermented bran leachate at 24 h

    2.2 醋酸發(fā)酵過程的總酸變化

    圖1 醋酸發(fā)酵過程總酸變化Fig. 1 Changes in total acidity during acetic acid fermentation

    從圖1可知,所有實驗組醋酸發(fā)酵起始時總酸質(zhì)量濃度(以乙酸計)為5.0 g/L左右,隨著醋酸發(fā)酵的進行,總酸逐漸升高,到第6~8天時達(dá)50.0 g/L左右。與對照組相比,羅伊氏乳桿菌L-05和橋乳桿菌L-09強化組的產(chǎn)酸速率相似,但嗜酸乳桿菌L-10、發(fā)酵乳桿菌L-03和植物乳桿菌L-04強化組的產(chǎn)酸速率較慢,這可能與嗜酸乳桿菌等乳酸菌能產(chǎn)生細(xì)菌素、類細(xì)菌素和過氧化氫等抑菌物質(zhì)有關(guān)[19-21]。

    2.3 液態(tài)發(fā)酵米醋的有機酸組成

    表4 液態(tài)發(fā)酵米醋的有機酸組成Table 4 Organic acid composition of rice vinegar

    如表4所示,各組液態(tài)發(fā)酵米醋的有機酸組成均以乙酸為主。接種乳酸菌發(fā)酵的麩皮浸出液后,液態(tài)發(fā)酵米醋含有乳酸,另有少量琥珀酸、酒石酸和檸檬酸,基本不含草酸和丙酮酸。

    2.4 液態(tài)發(fā)酵米醋的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)組成分析

    圖2 米醋代表性樣品揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)總離子流圖Fig. 2 Total iron current chromatograms of volatile compounds in representative samples of rice vinegar

    采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對11 個米醋樣品的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)進行檢測,圖2為其中3 個代表性米醋樣品的總離子流圖,可以看出在該檢測條件下樣品中的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的分離度良好。

    食醋中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的種數(shù)和含量可以影響風(fēng)味的復(fù)雜性[22-23]。與對照組相比,短乳桿菌L-02、發(fā)酵乳桿菌L-03、植物乳桿菌L-04和羅伊氏乳桿菌L-05強化組中酯類、醇類、酮類和含氮類揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)種類明顯更多,而其他乳酸菌強化組的揮發(fā)性酸類風(fēng)味物種數(shù)則比對照組少(圖3A)。

    與對照組相比,除嗜酸乳桿菌L-10強化組外,其他乳酸菌強化組的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)總含量更高,這主要是由于酯類、醇類、醛類和酮類的含量升高導(dǎo)致,嗜酸乳桿菌L-10強化組的醇類物質(zhì)含量升高,但酮類物質(zhì)含量明顯下降(圖3B)。

    圖3 液態(tài)發(fā)酵米醋中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)種類(A)和含量(B)分布Fig. 3 Types (A) and contents (B) of volatile compounds in rice vinegar

    如圖4所示,從11 個食醋樣品中共檢測到了81 種揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì),包括酯類、醇類、酸類、醛類、酮類、酚類、醚類、烷類、含氮類和雜環(huán)類10大類,主要為酯類物質(zhì)(27 種)和醇類物質(zhì)(17 種)。 酯類物質(zhì)中乙酸異戊酯、乙酸異丁酯、乙酸苯乙酯和丁二酸二乙酯含量最高,它們能賦予食醋水果香氣[24-25];醇類物質(zhì)中苯乙醇、異戊醇和2,3-丁二醇含量最高,苯乙醇具有玫瑰花香和蜜香,異戊醇具有醇味和澀味,2,3-丁二醇具有焦香和奶油香氣[26];乙酸是食醋中最重要的物質(zhì),也是最主要的揮發(fā)性酸類物質(zhì);苯甲醛是最主要的醛類物質(zhì),其具有杏仁香氣[27];3-羥基-2丁酮和2,3-丁二酮是兩種最主要的酮類物質(zhì),都具有奶油香氣[28-32]。

    根據(jù)聚類分析結(jié)果(圖5),11 個米醋樣品可以被分為3 個大類,其中直接以麩皮浸出液與米酒混合接種醋酸菌進行醋酸發(fā)酵釀造的食醋被單獨聚為一類,短乳桿菌L-02、發(fā)酵乳桿菌L-03和羅伊氏乳桿菌L-05強化組被聚為一類,其他乳酸菌強化組被聚為一類。

    圖4 米醋揮發(fā)性化合物組成Fig. 4 Composition of volatile compounds of rice vinegar

    圖5 米醋揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)含量聚類分析Fig. 5 Cluster analysis of concentrations of volatile flavor compounds of rice vinegar

    2.5 米醋感官評價結(jié)果

    圖6 米醋感官評分結(jié)果Fig. 6 Results of sensory evaluation of rice vinegar

    如圖6所示,所有米醋的色澤和體態(tài)得分均在20 分以上,視覺觀察差異不大;但滋味和風(fēng)味的得分有較大差異,羅伊氏乳桿菌L-05強化組得分最高,短乳桿菌L-02強化組得分次之,而未強化組乳酸桿菌的對照組BL的得分最少。這表明,乳酸菌強化能改善米醋的風(fēng)味品質(zhì),其中強化羅伊氏乳桿菌L-05的效果最佳。

    3 結(jié) 論

    本研究將不同乳酸菌發(fā)酵麩皮浸出液后,將其與米酒混合并接種醋酸菌進行發(fā)酵釀造米醋。結(jié)果表明,不同乳酸菌發(fā)酵均能夠增加米醋中乳酸含量,其中羅伊氏乳桿菌L-05和橋乳桿菌L-09強化組產(chǎn)酸速率比對照快;短乳桿菌L-02、發(fā)酵乳桿菌L-03和羅伊氏乳桿菌L-05強化能增加米醋的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)種類和含量。本研究為乳酸菌強化改善液態(tài)發(fā)酵米醋的風(fēng)味提供了理論支持。

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