不同低密度脂蛋白膽固醇檢測系統(tǒng)的結(jié)果差異分析

鄧敏 陸青

(上海市醫(yī)療器械檢測所，上海 201318)

不同廠商的不同檢測系統(tǒng)，即使聲稱各自具有溯源性，但其檢測結(jié)果間的差異一直給臨床醫(yī)生及患者帶來很大的困惑，甚至會引發(fā)醫(yī)療糾紛[1]。為探索當前市場上低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒的檢測現(xiàn)狀，探討不同測量系統(tǒng)檢測結(jié)果之間的一致性，選取市售的10個廠商生產(chǎn)的低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)檢測系統(tǒng)，嘗試以同一血清基質(zhì)校準品替代原廠配套校準品，檢測國家標準物質(zhì)及國際參考物質(zhì)，觀察各測量系統(tǒng)結(jié)果相對偏移及離散情況的變化。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器

低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒分別來自10家國產(chǎn)廠商（以下簡稱A、B、C、D、E、F、G、H、I、J），均為直接法-表面活性劑清除法。7100型全自動生化分析儀（日本日立公司）。

1.2 樣品

血清總膽固醇、總甘油、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇（冰凍）標準物質(zhì)，證書編 號：GBW09179b，LDL-C量 值：2.478mmol/L，不確定度：0.053mmol/L；國際參考物質(zhì)(standard reference material,SRM) 1951c （美國標準物質(zhì)研究院研制），LevelⅠLDL-C量值：86.4±1.4mg/dL(2.23±0.04mmol/L)，LevelⅡLDL-C量值：143.8±2.1mg/dL (3.72±0.05mmol/L)。

1.3 校準品及質(zhì)控物質(zhì)

A廠商自帶校準品（批號：20200416）、B廠商自帶校準品（批號：00303B12）、C廠商自帶校準品(批號：ZL9103B)、E廠商自帶校準品（批號：190301）、H廠商自帶校準品(批號：20CA)、J廠商自帶校準品(批號：19113007)。血清基質(zhì)校準品（英國朗道公司，批號：2655CH）。質(zhì)控物質(zhì)（英國朗道公司，多項質(zhì)控品水平2、水平3，批號：2622CH、2623CH）。廠商校準品及質(zhì)控品為凍干粉末的，均按說明書要求復溶，復溶后分裝并避光保存至-75℃。測量前30min從-75℃取出，室溫融解，樣本處理過程注意避免反復凍融。

1.4 實驗方法

實驗前對日立7100全自動生化分析儀進行常規(guī)維護與保養(yǎng)，按照每個試劑盒說明書規(guī)定的相應參數(shù)進行設置與校準，以質(zhì)控品為樣本進行檢測，計算每個系統(tǒng)檢測結(jié)果的精密度，在結(jié)果符合行業(yè)標準要求的前提下，進行后續(xù)檢測。

日立7100全自動生化分析儀分別與10個試劑盒配套組成檢測系統(tǒng)。用下述2種方法校準后，分別檢測國家標準物質(zhì)GBW09179b、國際參考物質(zhì)SRM1951c Level Ⅰ/Ⅱ，每個樣本重復檢測3次。兩種校準方法如下：

校準方法1：按照各試劑廠商聲明的配套校準品進行校準。其中A、B、C、E、H、J試劑使用廠商自帶配套校準品進行校準，D、F、G、I試劑使用血清基質(zhì)校準品進行校準。

校準方法2：所有試劑均使用血清基質(zhì)校準品進行校準。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學方法

分別計算檢測結(jié)果與國家、國際標準物質(zhì)標示靶值的相對偏移及不同檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的離散情況，以變異系數(shù)（CV）表示。相對偏移（B）使用公式計算：B=[(X-T)/T]×100%，X為3次結(jié)果均值，T為標準物質(zhì)靶值。采用Minitab 17及Excel 2016軟件進行統(tǒng)計及繪圖。相對偏移以≤1/2CLIA' 88允許誤差（TEa%）為臨床可接受水平。

2 結(jié)果

2.1 測定國家標準物質(zhì)GBW09179b

使用校準方法1校準后，測定國家標準物質(zhì)GBW09179b，各檢測系統(tǒng)所得結(jié)果的相對偏移范圍在-11.08%～+11.11%，10組檢測結(jié)果的變異系數(shù)為6.95%。使用校準方法2校準，各檢測系統(tǒng)所得結(jié)果的相對偏移范圍明顯縮小，范圍降至+1.29%～+6.94%，10組檢測結(jié)果的變異系數(shù)有顯著降低，降至1.61%。不同檢測系統(tǒng)，經(jīng)兩種校準方法校準，所得結(jié)果相對偏移均符合臨床要求。各檢測系統(tǒng)結(jié)果見表1及圖1。

2.2 測定國際標準物質(zhì)SRM1951c Level Ⅰ/Ⅱ

經(jīng)校準方法1校準，測定SRM1951c LevelⅠ/Ⅱ。各檢測系統(tǒng)所得結(jié)果的相對偏移范圍分別為-10.16%～+20.63%及-12.46%～+21.24%，結(jié)果相對偏移臨床符合率均為90%。10組檢測結(jié)果的變異系數(shù)分別為8.73%及10.12%。使用校準方法2校準，總體相對偏移范圍略有縮小，相對偏移范圍為+8.52%～+16.89%及-3.76%～+17.92%，結(jié)果相對偏移臨床符合率為50%及60%。10組測量結(jié)果的變異系數(shù)有較為明顯的縮小，分別由8.73%降低至2.85%，10.12%降低至6.18%。各檢測系統(tǒng)結(jié)果見表1及圖1。

3 討論

目前國內(nèi)儀器、試劑產(chǎn)品眾多，各自構成自建的檢測系統(tǒng)，同樣產(chǎn)品雖溯源至相同參考物質(zhì)，但仍可發(fā)現(xiàn)其檢驗結(jié)果可比性差，無法實現(xiàn)檢驗結(jié)果的互認[2]。研究中10個國產(chǎn)低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒雖均溯源至國家或國際兩種參考物質(zhì)，但測定參考物質(zhì)的結(jié)果仍存在一定差異。經(jīng)其配套校準品校準后，溯源至國家標準物質(zhì)的7個檢測系統(tǒng)(B、C、D、E、F、G、I)，測量國家標準物質(zhì)，所得相對偏移結(jié)果不超過±6.00%。其余3個溯源至國際參考物質(zhì)的檢測系統(tǒng)，測量國際標準物質(zhì)，Ⅰ檢測系統(tǒng)的相對偏移為-2.09%及-3.05%，A檢測系統(tǒng)的相對偏移為-10.16%及-12.46%，H檢測系統(tǒng)的相對偏移為+20.63%及+21.24%。由于各檢測系統(tǒng)間結(jié)果一致性較差，離散度（變異系數(shù)）較高，故研究嘗試選用同一血清基質(zhì)校準品替代各檢測系統(tǒng)中配套校準品，準確性（偏移）及檢測系統(tǒng)間結(jié)果離散度均有一定改善。當然，每種檢測系統(tǒng)都應有其配套的校準品[3]，采用統(tǒng)一血清基質(zhì)校準品校準各檢測系統(tǒng)并非正規(guī)溯源的方式，但從結(jié)果分析中可以看出,影響各檢測系統(tǒng)間結(jié)果的一致性較差的原因并不是試劑組分的質(zhì)量問題，而是因為各檢測系統(tǒng)配套校準品的在量值溯源、互換性或生產(chǎn)制備工藝方面尚存在問題。檢測過程中，使用具有量值溯源性和互換性的校準品，可大幅度提高檢測結(jié)果的準確性與一致性[4]。

圖1 不同檢測系統(tǒng)對參考物質(zhì)的檢測結(jié)果偏移及離散圖

量值溯源是實現(xiàn)臨床實驗室不同測量系統(tǒng)測量結(jié)果準確可比的前提，但通過可溯源到相同標準物質(zhì)的測量系統(tǒng)獲得的檢驗結(jié)果也未必具有可比性[5]。因為在校準品量值溯源及傳遞過程中存在諸多影響因素，如所溯源一級校準物質(zhì)的選擇（涉及賦值量值的來源及一致性），溯源過程中所產(chǎn)生的不確定度，量值傳遞過程中樣本基質(zhì)的互換性評價，量值傳遞方式的選擇，包括直接賦值法及比對法（涉及樣本量、統(tǒng)計計算方法、參考檢測系統(tǒng)的選擇）及對溯源結(jié)果的評價標準等。故產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，廠商應當建立校準品、參考品量值溯源程序，并對生產(chǎn)的每批校準品、參考品進行賦值，校準品的量值傳遞對體外診斷試劑的檢測準確性的影響是毋庸置疑的[6]。量值傳遞的方式有多種，使用標準物質(zhì)是量值傳遞的主要方式之一，但由于適合的、可直接用于方法校準、且具有互換性的參考物質(zhì)不易購買且價格昂貴，故建議可使用經(jīng)參考測量程序賦值的人血清作為建立溯源性的二級參考物質(zhì)[7]。目前，相當一部分校準品廠家會選擇溯源鏈的終端為制造商選定的測量程序，即便已經(jīng)有國際約定的參考物質(zhì)或參考方法。廠家是從可獲得性和成本方面考慮，但從量值傳遞本身而言，卻會帶進更多系統(tǒng)和操作因素的影響，不利于賦值和不確定度的評定。因此，為保證校準品量值的準確性和互換性，應盡可能溯源至最高計量級別[8]。

在2015年檢驗醫(yī)學溯源聯(lián)合委員會(JCTLM)年會上，國際臨床化學與檢驗醫(yī)學聯(lián)合會(IFCC)互換性工作組研究報告中指出廠家系統(tǒng)必須使用有互換性的校準品來確保相同樣品在不同的廠家測量系統(tǒng)測量時得到一致的檢驗結(jié)果[5]。有些校準品是血清基質(zhì)的，但其中添加了防腐劑或經(jīng)過其他處理步驟，使校準品與新鮮患者血清的互換性出現(xiàn)問題[4]。校準品及示值的來源也是影響標準物質(zhì)互換性評價的關鍵問題之一，研究選用廠商中有4個不同廠家的常規(guī)方法試劑采用相同校準品，這些都有可能影響校準品互換性評價結(jié)果[9]。校準品的濃度水平過低或過高也會影響互換性評價結(jié)果[10]。此外，校準品的不確定度也是影響互換性結(jié)果的另一個重要因素，是衡量校準品賦值可靠性的定量指標，制定科學有效的方法計算校準品不確定度是關系到患者檢測結(jié)果準確性的關鍵因素之一[6]。

研究發(fā)現(xiàn)，用測量系統(tǒng)配套校準品校準后，多個檢測系統(tǒng)GBW09179b檢測結(jié)果的相對偏移遠低于SRM1951c檢測結(jié)果的相對偏移，且改變校準方法后，現(xiàn)象依舊存在。分析原因，可能是由于SRM1951c與GBW09179b兩種標準物質(zhì)在互換性上存在一定差異所造成的。GBW09179b是采用我國候選參考方法超速離心/HPLC法計算LDL-C的測定值及測量不確定度的冷凍血清參考物質(zhì),測定結(jié)果可溯源至國際SI單位[11]。SRM1951c是國際認可的美國疾病預防和控制中心(CDC)β定量參考法賦值的冷凍血清參考物質(zhì)。標準物質(zhì)是否可用于常規(guī)測量系統(tǒng)，取決于兩個方面的特性，一是量值的準確可靠性，二是在不同測量系統(tǒng)上的互換性[12]。標準物質(zhì)的互換性是指對于給定標準物質(zhì)的規(guī)定量，由兩個給定測量程序所得測量結(jié)果之間關系與另一類指定物質(zhì)(通常是天然樣本)所得測量結(jié)果之間關系的一致程度表示的標準物質(zhì)的特性[13]。

血脂水平一直是臨床關注的重點之一，只有準確評估患者的血脂水平，才能確切地識別個體心血管事件風險，這在一定程度上依賴于準確可靠的血脂檢測結(jié)果[14]。針對研究中發(fā)現(xiàn)的問題，建議各生產(chǎn)廠商在保證產(chǎn)品質(zhì)量的前提下，規(guī)范使用國家、國際標準物質(zhì)，運行標準程序，通過學習國際、國內(nèi)溯源相關標準及指南文件，不斷完善及確保量值溯源及傳遞的準確性，同時充分考慮校準品的互換性評價及不確定度評定。企業(yè)也可積極參與臨床實驗室的室間質(zhì)評工作，驗證產(chǎn)品檢測結(jié)果的準確度。制備經(jīng)參考測量程序賦值的人血清作為二級參考物質(zhì)也是提高各廠家校準品可比性的有效方法。通過不斷完善及規(guī)范參考物質(zhì)及校準品的制備及使用，可以有效降低體外診斷試劑的各類風險，進而促進我國體外診斷試劑行業(yè)的健康發(fā)展。