• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    規(guī)?;膛?chǎng)牛病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查與防控

    2020-12-09 08:36:22郭啟勇柳國(guó)鎖黃海碧吳心華
    畜牧與獸醫(yī) 2020年12期
    關(guān)鍵詞:血清檢測(cè)

    郭啟勇,柳國(guó)鎖,黃海碧,吳心華*

    (1. 寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院,寧夏 銀川 750000;2. 金宇保靈生物藥品有限公司,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000)

    牛病毒性腹瀉(bovine viral diarrhea/mucosal disease,BVD)是由牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染引起的一種傳染病[1-2]。BVDV是黃病毒科瘟病毒屬的成員[3-4]。BVD病程復(fù)雜,臨床癥狀和亞臨床癥狀多樣,主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和生產(chǎn)性能等機(jī)能破壞,并導(dǎo)致免疫抑制[5-6]。BVDV主要感染牛、綿羊、山羊、鹿等動(dòng)物,多數(shù)表現(xiàn)為隱性感染。新生犢牛經(jīng)常因?yàn)楦篂a而死亡[7-8]。牛病毒性腹瀉在臨床上經(jīng)常表現(xiàn)為混合感染,由于病毒感染后,導(dǎo)致牛群排毒造成持續(xù)性感染,臨床表現(xiàn)多樣,在不同的時(shí)期感染具有不同的臨床表現(xiàn),懷孕母牛感染BVDV可以通過(guò)胎盤(pán)傳給胎兒[9-10]。BVDV感染牧場(chǎng)之后,由于防控困難。給牧場(chǎng)帶來(lái)極大的經(jīng)濟(jì)損失和資源浪費(fèi),世界上每年每頭牛損失50~500美元,平均大約46.5美元;歐洲的經(jīng)濟(jì)損失大概每年達(dá)到87美元[11-12]。中國(guó)目前為止沒(méi)有關(guān)于經(jīng)濟(jì)損失方面的研究和分析。BVDV 1946年在紐約州首次發(fā)現(xiàn)[13],該病毒屬的病毒具有交叉感染性,豬的豬瘟病毒可以傳染給牛,牛的病毒性腹瀉可以傳染給豬、綿羊、山羊、駱駝、鹿、羚羊等[14-15]。

    國(guó)外分為3個(gè)階段進(jìn)行逐步凈化:第一個(gè)階段,加強(qiáng)牧場(chǎng)生物安全的防范措施,對(duì)周?chē)h(huán)境做定時(shí)、定期、定量的消毒,對(duì)引進(jìn)的牛群嚴(yán)格按照OIE標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè),對(duì)于陽(yáng)性牛立即淘汰,減少損失。做到安全隔離,禁止和牧場(chǎng)的接觸,預(yù)防出現(xiàn)持續(xù)性感染牛(PI)。第二階段有計(jì)劃有目標(biāo)的嚴(yán)格篩查PI牛,篩查之后,應(yīng)該盡快清除。第三階段,對(duì)健康牛進(jìn)行檢測(cè)??偨Y(jié)各國(guó)經(jīng)驗(yàn),清除PI牛是整個(gè)防控中最為嚴(yán)格和重要的一步。疫苗免疫雖然是提高牛的免疫力,但是無(wú)法阻止PI牛的出現(xiàn)和排毒。疫苗免疫有兩種形式存在,一種是篩查和淘汰,存在于奧地利、瑞士以及北歐的一些國(guó)家;另外一種就是免疫和淘汰,在養(yǎng)殖密集區(qū)域、疫病高發(fā)區(qū)域、動(dòng)物流動(dòng)率高的地區(qū)多進(jìn)行疫苗免疫。

    為了解BVD在規(guī)?;膛?chǎng)中的流行情況,采用ELISA檢測(cè)對(duì)奶牛養(yǎng)殖密集區(qū)域的銀川市、中衛(wèi)市、吳忠市、石嘴山市、固原市等規(guī)模化奶牛場(chǎng)的奶牛血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè),對(duì)599份犢牛樣品采用熒光定量PCR進(jìn)行病原檢測(cè),為規(guī)?;膛?chǎng)的防控工作提供數(shù)據(jù)參考。同時(shí)選擇一個(gè)規(guī)模化牧場(chǎng)做防控示范場(chǎng)研究,為以后本病的防控提供實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品

    2018年9月到2019年6月,采集寧夏30個(gè)未進(jìn)行疫苗免疫牧場(chǎng)的1 500份血樣,599份腹瀉犢牛的糞便、鼻拭子、肛拭子及死亡犢牛的脾臟組織樣品。

    1.2 試劑

    牛病毒性腹瀉抗體檢測(cè)試劑盒和抗原快速檢測(cè)卡(美國(guó)愛(ài)德士公司)、AxyprepTMBody Fluid Viral DNA/RNA Miniprep Kit(AXYGEN)、Premix TaqTM(TaKaRa)、無(wú)酶水、無(wú)水乙醇等。

    1.3 牛病毒性腹瀉的抗體檢測(cè)

    嚴(yán)格按照愛(ài)德士ELISA抗體試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

    1.4 病料處理

    在生物安全柜內(nèi)處理。取大約5 mg的組織病料放置到2 mL帶有鋼珠的離心管中,用剪子盡可能剪碎。用組織研磨儀研磨裂解組織。加入PBS進(jìn)行稀釋?zhuān)? mL放入2 mL離心管中。編號(hào),置于-20 ℃冰箱中。鼻拭子和肛拭子樣品在超凈工作臺(tái)中加入定量的PBS溶液,漩渦振蕩,吸取1 mL放入離心管中編號(hào),置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4.1 病料的總DNA提取

    采用TaKaRa MinBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0試劑盒,提取病料組織中的總RNA。

    1.4.2 熒光定量PCR

    根據(jù)GenBank中登陸的BVDV的基因序列,利用DNAStar軟件MegAlign模板分析選擇Ⅰ型的5'UTR保守序列,引物由北京華大基因工程公司合成,探針由寶生物工程(大連)有限公司合成。

    表1 熒光定量PCR引物與探針

    1.4.3 擴(kuò)增體系

    以已獲得的DNA為模板,加入RT-PCR buffer Ⅲ 12.5 μL,ExTaqHS 0.5 μL, PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ 0.5 μL,上下游引物(20 μmol/L) 各 1.0 μL,Ⅰ型1.0 μL,模板核酸 2 μL,加無(wú)酶水補(bǔ)充至 25 μL。擴(kuò)增條件為:反轉(zhuǎn)錄 51 ℃ 15 min;94 ℃ 2 min;PCR 反應(yīng) 94 ℃ 30 s,52 ℃ 30 s,45個(gè)循環(huán)。經(jīng)優(yōu)化后熒光定量PCR檢測(cè)方法的陰性對(duì)照無(wú)Ct值,BVDV陽(yáng)性對(duì)照Ct值小于30,擴(kuò)增曲線呈現(xiàn)典型的S型曲線。

    結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):(1)陰性、陽(yáng)性對(duì)照成立,R2>0.990,試驗(yàn)成立。(2)結(jié)果判定:若被檢樣品出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線,且Ct值為10~35,則結(jié)果為陽(yáng)性;若3537,則判定為陰性。

    1.5 防控方法

    選擇寧夏吳忠的一個(gè)3 000頭規(guī)模未進(jìn)行疫苗免疫的血清學(xué)陽(yáng)性奶牛場(chǎng),使用愛(ài)德士公司生產(chǎn)的BVDV抗原快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)。無(wú)菌采集未斷奶犢牛耳組織,根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

    全群BVDV抗原檢測(cè),成年母牛使用ELISA方法檢測(cè),犢牛使用快速檢測(cè)卡檢測(cè)。陰性?;貧w群體,陽(yáng)性牛隔離,21 d后重復(fù)送樣檢測(cè),陰性?;貧w群體,陽(yáng)性牛淘汰。

    1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Microsoft Excel 2019進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

    2 結(jié)果

    2.1 規(guī)?;膛?chǎng)抗體檢測(cè)

    2.1.1 不同地區(qū)抗體檢測(cè)結(jié)果

    對(duì)寧夏地區(qū)規(guī)?;膛?chǎng)的1 500份進(jìn)行了BVD抗體的檢測(cè),結(jié)果見(jiàn)表2。共檢出1 314份陽(yáng)性血清樣品,陽(yáng)性率為87.6%。銀川市感染率最高為94.80%,固原市感染率最低為59.87%。

    表2 寧夏地區(qū)不同地區(qū)血清抗體檢測(cè)陽(yáng)性率

    2.1.2 不同生長(zhǎng)時(shí)期牛群的BVD抗體陽(yáng)性率

    根據(jù)奶牛的生長(zhǎng)時(shí)期分為犢牛(0~6月齡)、青年牛(6~18月齡)和成年母牛(18月齡以上)。不同時(shí)期血清抗體檢查陽(yáng)性率結(jié)果見(jiàn)表3。犢牛的血清抗體陽(yáng)性率為83.33%,青年牛的血清抗體陽(yáng)性率為84.08%,成母牛的血清抗體陽(yáng)性率88.98%。

    表3 不同生長(zhǎng)時(shí)期血清抗體檢測(cè)陽(yáng)性率

    2.2 BVD病原檢測(cè)

    從寧夏回族自治區(qū)規(guī)?;膛?chǎng)抽樣無(wú)菌采集599頭具有腹瀉癥狀犢牛的糞便、鼻拭子、肛拭子、脾組織樣品經(jīng)過(guò)處理后,用RT-PCR進(jìn)行BVD病原檢測(cè),結(jié)果見(jiàn)表4。顯示抗原陽(yáng)性樣品數(shù)為16份,陽(yáng)性率為2.67%,其中吳忠市的陽(yáng)性率最高為4.42%,固原市未檢出陽(yáng)性。

    表4 不同地區(qū)的BVD抗原檢測(cè)結(jié)果

    2.3 示范防控場(chǎng)BVD監(jiān)測(cè)

    2019年8月對(duì)規(guī)模牧場(chǎng)300多頭未斷奶犢牛進(jìn)行耳組織采集檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率為0.6%。PI牛的淘汰是規(guī)?;翀?chǎng)防控病毒性腹瀉最好的防護(hù)方式,相對(duì)于接種疫苗預(yù)防而言,具有減少工作時(shí)間和減少經(jīng)濟(jì)支出的優(yōu)勢(shì)。2019年9月至11月對(duì)該牧場(chǎng)腹瀉死亡的病料進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率為0,說(shuō)明該牧場(chǎng)病毒性腹瀉的防控有效。

    3 討論

    改革開(kāi)放以來(lái),我國(guó)的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)生了翻天覆地的變化,從原始的小農(nóng)戶生產(chǎn)變成了初具規(guī)模的農(nóng)牧公司生產(chǎn)。其中,奶牛養(yǎng)殖變化明顯,從以前小農(nóng)戶養(yǎng)殖變成了規(guī)?;?、集約化的公司化養(yǎng)殖。由于我國(guó)原始品種不能充分滿足消費(fèi)者的需求,因此大量從國(guó)外引種。貿(mào)易和集約化的養(yǎng)殖方式雖然提高了經(jīng)濟(jì)效益,但也加快了疾病傳播。牛病毒性腹瀉是一種以水平傳播為主的疾病,由于病毒特性,一旦在牧場(chǎng)存在便很難清除[16-18]。犢牛容易造成持續(xù)性感染,病牛初期沒(méi)有明顯的臨床癥狀,牧場(chǎng)獸醫(yī)很難通過(guò)臨床表現(xiàn)做出準(zhǔn)確的診斷。病牛持續(xù)向牧場(chǎng)排毒,造成牧場(chǎng)的永久性污染。病毒性腹瀉在牧場(chǎng)盛行,極大地降低了犢牛的成活率。BVD導(dǎo)致牛淘汰之后,牧場(chǎng)的牛不能得到及時(shí)補(bǔ)充,存欄量下降,而且本病一旦進(jìn)入牧場(chǎng)便長(zhǎng)期存在。

    本次試驗(yàn)共檢測(cè)牛血清1 500份,其中血清抗體陽(yáng)性的牛有1 314頭,抗體陽(yáng)性率高達(dá)87.6%。其中犢牛抗體陽(yáng)性率為83.33%,青年??贵w陽(yáng)性率為84.08%,成母??贵w陽(yáng)性率88.96%。對(duì)599份犢牛樣品應(yīng)用熒光定量PCR進(jìn)行病原檢測(cè),其中陽(yáng)性16份,陽(yáng)性率為2.67%。1999年對(duì)西北地區(qū)牛病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,寧夏地區(qū)病毒性腹瀉血清抗體陽(yáng)性55.95%[16];2015年對(duì)寧夏地區(qū)病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),血清抗體陽(yáng)性率高達(dá)64.92%[17];2016年對(duì)寧夏地區(qū)奶牛疑似病毒性腹瀉的牛采取了135份耳組織,進(jìn)行抗原檢測(cè),陽(yáng)性率最高0.5%,平均0.01%[18]。說(shuō)明我國(guó)規(guī)模化牛場(chǎng)BVD感染嚴(yán)重,并且逐年呈上升趨勢(shì),制定有效的防控措施迫在眉睫。

    根據(jù)寧夏地區(qū)規(guī)?;膛?chǎng)BVD的流行情況來(lái)看,陽(yáng)性率普遍較高。寧夏地區(qū)養(yǎng)牛在我國(guó)發(fā)展較早,國(guó)內(nèi)外畜牧交易多,加之該地區(qū)全年干旱,對(duì)于奶牛和肉牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展有著得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)。未免疫牛群的血清陽(yáng)性率存在著地區(qū)性的差異,說(shuō)明牛群的生長(zhǎng)環(huán)境也是導(dǎo)致牛感染病毒性腹瀉的原因之一。本次研究結(jié)果表明,清除PI 牛有助于牧場(chǎng)從根本上預(yù)防BVD的大規(guī)模感染。進(jìn)行PI牛檢測(cè)之后,對(duì)PI陽(yáng)性犢牛的姐姐、媽媽進(jìn)行了跟蹤調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)犢牛的媽媽和姐姐抗原檢測(cè)陰性,抗體檢測(cè)陽(yáng)性,說(shuō)明犢牛的抵抗力相對(duì)較差,容易感染疾病,造成發(fā)病。關(guān)于相關(guān)傳播機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。本次的研究為以后BVD的防控提供成功經(jīng)驗(yàn),要想徹底預(yù)防本病,還需要從生物安全的方面考慮,盡量減少外來(lái)病原的侵入,堅(jiān)持自繁自養(yǎng)。

    綜上,從調(diào)查結(jié)果來(lái)看,規(guī)?;膛?chǎng)病毒性腹瀉的感染率普遍較高,BVDV的感染導(dǎo)致免疫力下降,進(jìn)而引發(fā)其他傳染病的發(fā)生,隨著養(yǎng)殖生產(chǎn)的不斷集中,規(guī)?;?、現(xiàn)代化牧場(chǎng)的不斷發(fā)展,疾病將會(huì)成為影響?zhàn)B殖業(yè)發(fā)展的決定因素。建立重大疾病預(yù)警體系,把疾病預(yù)防放在首位,是畜牧業(yè)發(fā)展的必然。從防控示范場(chǎng)的建設(shè)來(lái)看,清除PI牛是規(guī)?;翀?chǎng)最經(jīng)濟(jì)的做法,也是減少規(guī)?;翀?chǎng)疫病泛濫最為有效的方法。

    猜你喜歡
    血清檢測(cè)
    “不等式”檢測(cè)題
    “一元一次不等式”檢測(cè)題
    “一元一次不等式組”檢測(cè)題
    血清免疫球蛋白測(cè)定的臨床意義
    中老年保健(2021年3期)2021-08-22 06:50:04
    慢性腎臟病患者血清HIF-1α的表達(dá)及臨床意義
    慢性鼻-鼻竇炎患者血清IgE、IL-5及HMGB1的表達(dá)及其臨床意義
    “幾何圖形”檢測(cè)題
    “角”檢測(cè)題
    血清IL-6、APC、CRP在膿毒癥患者中的表達(dá)及臨床意義
    血清HBV前基因組RNA的研究進(jìn)展
    一级片免费观看大全| 精品国产国语对白av| 久久这里只有精品19| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 熟女电影av网| 边亲边吃奶的免费视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美xxⅹ黑人| 国产成人精品久久二区二区91 | 一级黄片播放器| 国产 精品1| 九色亚洲精品在线播放| 久久精品夜色国产| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品一二三区在线看| 91精品伊人久久大香线蕉| 一级黄片播放器| 午夜免费观看性视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久久伊人网av| 精品第一国产精品| 国产精品国产三级国产专区5o| h视频一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 99热网站在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 另类精品久久| 国产精品久久久久久精品古装| 啦啦啦啦在线视频资源| 婷婷成人精品国产| 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费在线观看完整版高清| 蜜桃在线观看..| 久热久热在线精品观看| a 毛片基地| 婷婷色综合www| 久久青草综合色| 国产视频首页在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产一区二区在线观看av| 99国产综合亚洲精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品视频人人做人人爽| 蜜桃国产av成人99| 最近的中文字幕免费完整| 在线观看www视频免费| 国产精品一二三区在线看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美日韩精品网址| 久久久久精品性色| 日韩 亚洲 欧美在线| 一区二区三区乱码不卡18| 国产免费视频播放在线视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产成人精品婷婷| 亚洲国产av影院在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲精品视频女| 寂寞人妻少妇视频99o| 色94色欧美一区二区| 免费大片黄手机在线观看| 两个人免费观看高清视频| 自线自在国产av| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 国产成人免费无遮挡视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 男女免费视频国产| 国产免费福利视频在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 看免费成人av毛片| 热99久久久久精品小说推荐| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 色94色欧美一区二区| 色94色欧美一区二区| 不卡视频在线观看欧美| 国产成人一区二区在线| 国产精品国产av在线观看| 国产淫语在线视频| 波多野结衣av一区二区av| 99久久人妻综合| 99久久人妻综合| 18禁国产床啪视频网站| 另类亚洲欧美激情| 免费少妇av软件| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品人妻在线不人妻| 精品国产一区二区三区四区第35| 午夜精品国产一区二区电影| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久久久人妻精品一区果冻| 一本色道久久久久久精品综合| 桃花免费在线播放| 午夜福利在线免费观看网站| 色94色欧美一区二区| 亚洲第一青青草原| 宅男免费午夜| 日韩精品免费视频一区二区三区| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲精品在线美女| 亚洲成人一二三区av| 欧美成人午夜精品| 国产精品免费视频内射| 老司机亚洲免费影院| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久97久久精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 一边亲一边摸免费视频| 超色免费av| 国产精品 国内视频| 最近中文字幕2019免费版| 看十八女毛片水多多多| 久久久久国产网址| 亚洲在久久综合| 国产淫语在线视频| 男女午夜视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 五月天丁香电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产免费视频播放在线视频| 午夜日韩欧美国产| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久综合国产亚洲精品| 夫妻午夜视频| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲天堂av无毛| 人成视频在线观看免费观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 十八禁网站网址无遮挡| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 精品国产露脸久久av麻豆| 不卡视频在线观看欧美| 91精品三级在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 国产在线免费精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 女性生殖器流出的白浆| 久久99一区二区三区| 一区二区三区精品91| 两性夫妻黄色片| 精品一区二区免费观看| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜福利影视在线免费观看| 国产1区2区3区精品| 日本欧美国产在线视频| 一区二区三区激情视频| 少妇精品久久久久久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲精品视频女| 26uuu在线亚洲综合色| 一区二区av电影网| 777米奇影视久久| 成人漫画全彩无遮挡| 在线观看免费高清a一片| www日本在线高清视频| 国产av国产精品国产| 丰满少妇做爰视频| 午夜老司机福利剧场| 在线 av 中文字幕| 久久精品久久久久久久性| 美女国产高潮福利片在线看| 国产成人aa在线观看| 香蕉精品网在线| 男女午夜视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 国产av一区二区精品久久| 国产一区二区三区综合在线观看| 岛国毛片在线播放| 天堂中文最新版在线下载| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 午夜日本视频在线| 午夜av观看不卡| 日韩制服骚丝袜av| 一边亲一边摸免费视频| 久久影院123| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 精品久久久精品久久久| 丝袜脚勾引网站| 热re99久久精品国产66热6| 青春草国产在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 美女午夜性视频免费| 免费看不卡的av| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美日韩视频精品一区| 日韩大片免费观看网站| 中国国产av一级| 亚洲欧美清纯卡通| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 老汉色av国产亚洲站长工具| a级毛片在线看网站| 欧美另类一区| 国产精品一二三区在线看| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧洲日产国产| 在线观看人妻少妇| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品免费视频内射| 伦理电影大哥的女人| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 午夜福利视频精品| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av | 咕卡用的链子| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产高清不卡午夜福利| 桃花免费在线播放| 老司机亚洲免费影院| 日韩视频在线欧美| 男女啪啪激烈高潮av片| 看免费av毛片| 久久久久久久大尺度免费视频| 捣出白浆h1v1| 精品久久久久久电影网| 久久精品国产综合久久久| 在线观看一区二区三区激情| 老鸭窝网址在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日韩亚洲高清精品| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 99久国产av精品国产电影| 1024香蕉在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| xxxhd国产人妻xxx| 高清在线视频一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| xxxhd国产人妻xxx| 国产野战对白在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美精品av麻豆av| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久久国产精品麻豆| 十分钟在线观看高清视频www| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品国产av在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| xxxhd国产人妻xxx| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜免费观看性视频| 日韩一本色道免费dvd| 日本爱情动作片www.在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧洲日产国产| 香蕉精品网在线| 色网站视频免费| 桃花免费在线播放| 不卡av一区二区三区| 国产色婷婷99| 欧美激情高清一区二区三区 | 免费高清在线观看视频在线观看| 看免费av毛片| 国产野战对白在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品免费大片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品熟女久久久久浪| 久久av网站| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 宅男免费午夜| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | av.在线天堂| 一本色道久久久久久精品综合| 婷婷色综合www| 丝瓜视频免费看黄片| 免费观看av网站的网址| 亚洲av福利一区| 国产 精品1| 考比视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 1024香蕉在线观看| 最黄视频免费看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 中文天堂在线官网| 人人澡人人妻人| 欧美av亚洲av综合av国产av | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 一级毛片电影观看| 成年av动漫网址| 国产福利在线免费观看视频| 欧美另类一区| 另类精品久久| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲av.av天堂| 免费黄色在线免费观看| 成人免费观看视频高清| 国产精品国产三级专区第一集| 国产男女超爽视频在线观看| 桃花免费在线播放| 免费日韩欧美在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 日本wwww免费看| 一区二区三区乱码不卡18| 精品一区二区三卡| 伊人亚洲综合成人网| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产日韩欧美亚洲二区| 黄色配什么色好看| 亚洲天堂av无毛| 久久国产亚洲av麻豆专区| 少妇熟女欧美另类| 国产在线视频一区二区| 日韩三级伦理在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产av精品麻豆| 伦理电影免费视频| 国产深夜福利视频在线观看| 免费观看av网站的网址| av一本久久久久| 久久久精品区二区三区| 国产成人一区二区在线| 久久这里只有精品19| 丝袜脚勾引网站| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 免费观看a级毛片全部| 欧美另类一区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲久久久国产精品| 亚洲综合色惰| 欧美成人午夜精品| 国产精品.久久久| 国产男人的电影天堂91| 纯流量卡能插随身wifi吗| 母亲3免费完整高清在线观看 | 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 免费观看在线日韩| 国产精品免费大片| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲中文av在线| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产精品免费大片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久久久久久久久免费av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美精品亚洲一区二区| 久久这里有精品视频免费| 男的添女的下面高潮视频| 搡老乐熟女国产| 国产 精品1| 熟女av电影| 麻豆av在线久日| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品国产三级专区第一集| 久久青草综合色| 老熟女久久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美国产精品va在线观看不卡| 午夜免费观看性视频| 2022亚洲国产成人精品| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲国产成人一精品久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 久久久精品区二区三区| 永久网站在线| 中国国产av一级| 男人舔女人的私密视频| 亚洲av日韩在线播放| 久久影院123| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久鲁丝午夜福利片| 国产熟女午夜一区二区三区| xxxhd国产人妻xxx| 中文字幕制服av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 少妇的逼水好多| 一区在线观看完整版| 国产成人a∨麻豆精品| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 一级片'在线观看视频| 9热在线视频观看99| 高清视频免费观看一区二区| 波多野结衣一区麻豆| av国产久精品久网站免费入址| 午夜福利视频在线观看免费| 国产福利在线免费观看视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久网色| 国产探花极品一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 三级国产精品片| 老司机影院毛片| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 麻豆av在线久日| 亚洲国产最新在线播放| 一级爰片在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美+日韩+精品| 99香蕉大伊视频| 久久韩国三级中文字幕| 久久久a久久爽久久v久久| 精品福利永久在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| av线在线观看网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产xxxxx性猛交| 亚洲精品,欧美精品| 国产精品久久久久成人av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美精品一区二区免费开放| 一区二区三区四区激情视频| 两个人免费观看高清视频| av福利片在线| 亚洲欧美清纯卡通| 蜜桃在线观看..| 精品一区二区免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 91精品三级在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 久久午夜综合久久蜜桃| 成年av动漫网址| 永久免费av网站大全| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日本91视频免费播放| a级毛片在线看网站| 在线观看免费高清a一片| 国产成人精品一,二区| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜福利乱码中文字幕| 男人操女人黄网站| 热99国产精品久久久久久7| 久久久欧美国产精品| 精品国产乱码久久久久久小说| 五月天丁香电影| 捣出白浆h1v1| 久久久国产一区二区| 丝袜在线中文字幕| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久青草综合色| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 视频在线观看一区二区三区| 午夜福利视频精品| 国产av一区二区精品久久| 99热国产这里只有精品6| 9热在线视频观看99| 久久久久国产网址| 黑人猛操日本美女一级片| 五月天丁香电影| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 日韩制服骚丝袜av| 热99国产精品久久久久久7| 在线精品无人区一区二区三| 国产亚洲一区二区精品| 男女下面插进去视频免费观看| 超碰成人久久| 黄色一级大片看看| 亚洲国产欧美在线一区| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲经典国产精华液单| www.熟女人妻精品国产| 国产亚洲精品第一综合不卡| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产伦理片在线播放av一区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产一级毛片在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 黄色毛片三级朝国网站| 精品人妻在线不人妻| 色婷婷av一区二区三区视频| 秋霞在线观看毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 中国国产av一级| 国产免费又黄又爽又色| 99香蕉大伊视频| 一级a爱视频在线免费观看| 久久鲁丝午夜福利片| 伦理电影免费视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日本av手机在线免费观看| 国产不卡av网站在线观看| 色吧在线观看| 午夜激情av网站| 国产成人精品福利久久| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品在线美女| av在线观看视频网站免费| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产毛片在线视频| 中文字幕亚洲精品专区| 成人毛片a级毛片在线播放| 9191精品国产免费久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 97在线视频观看| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲第一av免费看| 精品一区二区免费观看| 国产在线一区二区三区精| 日本午夜av视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产极品天堂在线| 亚洲精品日本国产第一区| av.在线天堂| 人妻人人澡人人爽人人| 国产av码专区亚洲av| 精品少妇内射三级| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产免费视频播放在线视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 综合色丁香网| 国产一区二区激情短视频 | 丝袜人妻中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费现黄频在线看| 久久精品久久精品一区二区三区| a级片在线免费高清观看视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲少妇的诱惑av| 观看av在线不卡| 国产亚洲一区二区精品| 麻豆av在线久日| 一二三四在线观看免费中文在| 免费观看在线日韩| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久国产精品麻豆| 一区二区三区四区激情视频| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 久久国内精品自在自线图片| 国产在线视频一区二区| 国产av国产精品国产| 国产精品.久久久| 咕卡用的链子| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| av不卡在线播放| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲三区欧美一区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 人妻 亚洲 视频| 天堂8中文在线网| 黄色一级大片看看| 美国免费a级毛片| 成人毛片60女人毛片免费| 一区二区三区激情视频| 久久精品国产自在天天线| 久久精品国产亚洲av天美| 桃花免费在线播放| 青春草视频在线免费观看| 91久久精品国产一区二区三区| 久久av网站| 美女福利国产在线| 丝袜美腿诱惑在线| 久久久久精品性色| 街头女战士在线观看网站| 久久久久久人妻| 亚洲精品乱久久久久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 黄色一级大片看看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久亚洲精品成人影院| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产国语露脸激情在线看| 伊人久久国产一区二区| 久久久国产一区二区| h视频一区二区三区| 我的亚洲天堂| 熟女电影av网| 最近的中文字幕免费完整| 婷婷色综合大香蕉| 国产在线一区二区三区精| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 日韩中文字幕欧美一区二区 | 欧美精品高潮呻吟av久久| 大片电影免费在线观看免费| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 成人黄色视频免费在线看| av线在线观看网站| 国产成人精品婷婷| 亚洲精品一二三| 久久97久久精品| 欧美最新免费一区二区三区| 五月天丁香电影| 黄片无遮挡物在线观看| 九九爱精品视频在线观看| xxx大片免费视频| 人妻一区二区av| videossex国产| 交换朋友夫妻互换小说| 性色av一级|