延胡索生物堿、茉莉花精油混合液對離體子宮平滑肌作用研究

陳文鑫，羅坤，劉云平，張浩金，吳宗晟，蒙田秀*，謝鋒

(1.廣西中醫(yī)藥大學賽恩斯新醫(yī)藥學院，廣西 南寧；2.廣西中醫(yī)藥大學中藥炮制學教研室，廣西 南寧)

0 引言

茉莉花的花香有著安神、鎮(zhèn)定和松緩情緒等功效[1-2]，延胡索具有活血、利氣、止痛、鎮(zhèn)靜之功效[3-5]，藥用價值大、應用廣泛，因此近些年與其相關的研究報道不斷涌現(xiàn)。中藥的炮制有著降低或者消除中藥材毒副作用、提高中藥材有效成分含量、增強其臨床治療療效的效果。研究結果表明，延胡索通過炮制可提高其有效成分生物堿的含量并增強其治療效果[6-9]。

離體子宮收縮模型具有靈敏、快速、經濟等優(yōu)點，因而被廣泛采用，作為研究痛經治療藥物較為常用的方法[10]?？s宮素(OT)是離體子宮收縮模型最為常用的工具藥，其可引起離體子宮較為強烈而持久的收縮，從而塑造與痛經時子宮相似的狀態(tài)。此次實驗我們選用了OT 為造模藥物建立原發(fā)性痛經的離體子宮收縮模型，對延胡索提取物、茉莉花精油混合液緩解離體小鼠子宮收縮模型的情況進行研究，對其中一些影響因素進行考察，并對敏感的陽性藥物及其有效濃度進行選用。

因此，本實驗旨在通過對未孕小鼠的子宮平滑肌收縮作用的影響來探討延胡索提取物、茉莉花精油混合液對痛經的作用,對進一步豐富痛經的用藥方法做出一些探討。

1 材料

1.1 動物

昆明種雌性小鼠90 只，體重(20+2g)，由廣西中醫(yī)藥大學的實驗動物中心供應 [SCXK(桂)2003-0003]。

1.2 藥材

延胡索，茉莉花購自亳州中藥材基地(符合2015 版藥典標準)

1.3 藥物與藥劑

樂氏液的配置(2000mL 樂氏液含：10%NaCl 180g、10%KCl 8.4g、5%CaCL2 9.6g、5%NaHCO3 20g、GS 2g)；戊 酸 雌 二醇(DELPHARM Lille S.A.S，國藥準字J20130009)；縮宮素注射液藥物(上海第一生化藥業(yè)有限公司，生產批號190901)。

1.4 儀器

實驗用調溫電熱套(江蘇近湖鎮(zhèn)教學儀器廠)，Biolap410生物機能儀(成都泰盟科技有限公司)，HW-400E 型恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 延胡索提取物、茉莉花精油及復方混合液的制備與實驗分組

醋煮延胡索：選取凈延胡索500g，加入100mL 的醋,拌勻，等浸潤至醋吸盡，置于鍋內,加適量水，以水浸過藥面為佳，用文火煮至透心，取出濾液裝瓶備用，低溫保存。

茉莉花精油制備：共有2kg 茉莉花，分兩次提取。將沖洗后的1kg 茉莉花用純凈水浸泡2 小時，將茉莉花與純凈水的混合液置于10L 圓底燒瓶中，同時連接蒸餾萃取裝置，加熱使料液持續(xù)沸騰，進行水蒸氣蒸餾萃取，收集器冷水冷卻。等待一定時間后再將得到的萃取液進行裝瓶，采取低溫保存。

將收集到的兩種提取物按不同比例制備成復方混合液，具體如下：延胡索生物提取物(1:0)、茉莉花揮發(fā)油(1:0)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(1:9)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(9:1)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(4:6)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(6:4)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(5:5)。

將54 只小鼠分為9 組，每組6 個。分別為：正常對照組、縮宮素組(0.2U/mL)、不同濃度的復方混合液7 組。

2.2 離體實驗的操作及給藥

選取未孕小鼠，體重18～22g，在實驗前連續(xù)3d 灌胃注射雌二醇10mg·kg-1·d-1，以此促使子宮進一步發(fā)育成熟。于d4頸椎脫臼處死小鼠，剪開腹腔，輕輕剝離；選擇在子宮二角相連處下端進行剪斷，即刻剝離出子宮，置于已配比好營養(yǎng)液的皿中,準確去除附著在子宮上的脂肪等多余組織。之后將子宮二角相連處剪開，取其中彈性與完整度較好的一角，剪取其中一段約2cm。將所選用子宮肌條的一端用標本鉤鉤在固定的浴槽底部，另一端用線結扎與傳感器相連。浴槽內的營養(yǎng)液需以能浸沒子宮模型為佳。水浴溫度為37±0.5℃,靜置，待子宮的自發(fā)節(jié)律恢復后加入陽性藥物及不同比例的復方混合液來觀察子宮平滑肌收縮情況，加藥順序：先加小劑量的縮宮素，觀察一段時間的節(jié)律性收縮，換液沖洗3 次，然后再分別加入不同配比的延胡索提取物與茉莉花精油復方混合液[延胡索生物提取物(1:0)、茉莉花揮發(fā)油(1:0)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(1:9)、延胡索提取物：茉莉花揮發(fā)油(9:1)等比例]，來觀察子宮的伸縮情況。

實驗中樂氏液每次需注意恒量，且需注意浴槽溫度；換液之后，需等待曲線平穩(wěn)才可滴加下一個藥物。完成換液后及時觀察縮宮素及復方混合液對小鼠離體子宮平滑肌條收縮活動的影響。(記錄給藥前與給藥后10min 子宮平滑肌的收縮波間隔平均持續(xù)時間以及收縮波的頻率、平均振幅。)

2.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0 統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，采用獨立樣本t檢驗進行組間差異分析，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

不同藥物及不同濃度對離體子宮平滑肌收縮的影響：圖1可看出陽性藥物小劑量縮宮素能對正常小鼠的離體子宮起到節(jié)律性收縮的作用；圖2 可看出不同比例的復方混合液對正常小鼠離體子宮的收縮起到不同程度的調節(jié)效果，其中在復方混合液的比例為9:1(茉莉花揮發(fā)油：延胡索)時對子宮節(jié)律性收縮的調節(jié)作用最好(P＜0.05)；圖3 則可看出復方混合液在模型小鼠離體子宮上更加明顯、直觀的調節(jié)收縮的效果。

圖1 陽性藥物對正常雌鼠子宮平滑肌收縮的影響

圖2 復方混合液對正常雌鼠子宮平滑肌收縮的影響

圖3 復方混合液對模型雌鼠子宮平滑肌收縮的影響

3 討論

由實驗結果可見，延胡索生物堿、茉莉花精油的復方混合液對子宮的收縮具有節(jié)律性調節(jié)作用，在茉莉花揮發(fā)油：延胡索提取物(9:1)時為其調節(jié)作用差異具有顯著性(P＜0.01)；除此之外，其他比例的復方混合液雖可以調節(jié)子宮平滑肌收縮波的振幅，但差異無顯著性(P＞0.05)。

本研究探討延胡索堿、茉莉花精油對小鼠離體子宮平滑肌收縮的影響，為闡明原發(fā)性痛經特點和延胡索堿與茉莉花精油的作用機制提供了依據(jù)，也為綜合評價延胡索堿、茉莉花精油治療女性原發(fā)性痛經的共性和各異性特點提供參考。同時能為當今時代女性在治療原發(fā)性痛經時提供了更多的思路與可能性。