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    轉(zhuǎn)基因稻谷Bt蛋白降解及長期取食對印度谷螟體內(nèi)3種抗氧化酶活性的影響

    2020-12-08 03:22:54王康旭吳學(xué)友陶冶心陳二虎唐培安
    糧油食品科技 2020年6期
    關(guān)鍵詞:稻殼儲藏米粉

    王康旭,吳學(xué)友,陶冶心,陳二虎,唐培安

    (南京財經(jīng)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,江蘇高校糧油質(zhì)量安全控制及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 南京 210023)

    印度谷螟Plodia interpunctella(Hübener)是世界性的鱗翅目儲糧害蟲,能夠危害稻谷、小麥、玉米、干果、藥材和多種作物種子的生產(chǎn)和儲藏[1]。傳統(tǒng)防治方法具有抗性發(fā)生普遍、殘留風(fēng)險高等缺點(diǎn),嚴(yán)重威脅了糧食和食品安全的有力保障[2]。轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻,是指將非水稻來源的抗蟲基因?qū)胨倔w內(nèi)所培育出的新型水稻品種[3]。其中的抗蟲基因大多來源于蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis, Bt),這是因?yàn)?Bt在其形成芽孢的過程中會產(chǎn)生具有殺蟲效果的晶體蛋白(cry)[4],在借助基因工程的方法后,可以在水稻中大量表達(dá)此類殺蟲蛋白,賦予作物抗蟲性[5]。研究表明,轉(zhuǎn)Bt基因水稻對多種鱗翅目昆蟲均具有良好的防治效果,例如稻縱卷葉螟Cnaphalocrocis medinalis、印度谷螟和二化螟Chilo suppressalis等[6-7]。

    保護(hù)酶是昆蟲體內(nèi)最主要的生理生化相關(guān)酶系之一,主要包括過氧化物酶(peroxidase, POD)、過氧化氫酶(catalase, CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)等[8]。一般而言,生物體中的保護(hù)酶會長期處于一種動態(tài)平衡狀態(tài),使游離自由基保持在一個較低水平狀態(tài),以避免自由基對機(jī)體的破壞,起到保護(hù)作用。但是,一旦生物體內(nèi)的保護(hù)酶平衡被打破,機(jī)體就可能受到自由基的傷害。同時研究表明,當(dāng)昆蟲取食Bt毒蛋白后,體內(nèi)保護(hù)酶的平衡會遭到破壞,過量的自由基會損傷機(jī)體。此時昆蟲為了保護(hù)和維持機(jī)體的正常功能就會升高保護(hù)酶活性,從而影響害蟲的生理狀態(tài)[9]。

    前期研究表明,在短期取食轉(zhuǎn)Bt稻谷后,印度谷螟體內(nèi)的三種保護(hù)酶活力呈現(xiàn)上調(diào)趨勢,但是長期取食轉(zhuǎn) Bt稻谷及其制品后害蟲體內(nèi)的保護(hù)酶活力狀態(tài)尚不清楚,影響了害蟲對轉(zhuǎn)Bt作物的相關(guān)毒理機(jī)制研究[10-11]。本實(shí)驗(yàn)以印度谷螟幼蟲為試蟲,利用轉(zhuǎn)Bt稻谷為原料制取得到的大米粉為飼料,對試蟲進(jìn)行長期喂食處理,通過酶活分析方法研究了印度谷螟幼蟲在長期取食轉(zhuǎn) Bt水稻制品后體內(nèi)的保護(hù)酶活性變化。本研究不僅有利于揭示轉(zhuǎn)Bt稻谷對于印度谷螟作用的生理生化機(jī)理,還可以為相關(guān)毒理學(xué)機(jī)制提供深入研究依據(jù),有利于轉(zhuǎn)基因稻谷的安全儲藏和合理利用。

    1 材料與方法

    1.1 供試水稻及蟲源

    稻谷華恢1號:通過基因槍法介導(dǎo),將融合抗蟲基因Cry1Ab/Cry1Ac導(dǎo)入非轉(zhuǎn)基因水稻品系明恢63獲得的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻,由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供,標(biāo)記為HH/Bt。

    稻谷明恢63:為轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因水稻華恢1號的非轉(zhuǎn)基因親本對照,標(biāo)記為MH/CK。

    實(shí)驗(yàn)所采用的印度谷螟品系采自江蘇省吳江市,用完全不含 Bt毒素(明恢 63)的大米粉在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)連續(xù)喂養(yǎng)2年,作為敏感種群。飼養(yǎng)條件為:溫度(30±0.5) ℃、濕度70%~80%、黑暗條件培養(yǎng)。

    1.2 儲藏條件

    將新收獲的轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷(HH/Bt)樣品從低溫貯藏室中取出,恢復(fù)至室溫后,經(jīng)除雜后,分裝在5 L廣口瓶中,蓋緊橡膠塞,并用石蠟密封瓶口,置于(25±1) ℃人工氣候箱中儲藏,每隔30 d取樣一次,檢測水分和Bt蛋白含量。供試稻谷明恢63(MH/CK)做同樣處理。

    1.3 水分測定

    稻谷樣品的水分測定按照 GB 5009.3—2016直接干燥法進(jìn)行。

    1.4 Bt蛋白含量測定

    采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)。測定時,將稻谷提取物加入到已經(jīng)由Cry1Ab/Cry1Ac蛋白抗體包被的微孔板中,抗體同樣品提取物中的目標(biāo)蛋白進(jìn)行作用,之后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記(HRP-labeled)的Cry1Ab/Cry1Ac二抗,進(jìn)行檢測。產(chǎn)物在 450 nm處有吸收峰,且產(chǎn)物顏色與OD值在一定范圍內(nèi)呈正比,因此,可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品Cry1Ab/Cry1Ac蛋白含量。

    1.5 試蟲處理

    將不同質(zhì)量的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉摻入普通米粉中,充分?jǐn)嚢杌靹?,配制成含量?0、100、200、400 mg/g的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉的飼料。取實(shí)驗(yàn)室長期培養(yǎng)的印度谷螟5齡幼蟲若干只,饑餓處理24 h后作為供試蟲體。所有試蟲分為3組。置于2 cm直徑的培養(yǎng)盒中,每個培養(yǎng)盒接種一頭,分別用含有0、50、100、200、400 mg/g的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉飼養(yǎng)12 d后取樣。另外,我們從敏感種群中隨機(jī)挑選了部分試蟲,在含有50、100 mg/g轉(zhuǎn)基因大米粉的飼料中連續(xù)篩選培養(yǎng)5個月后取樣。所有樣品冷凍保存于–80 ℃冰箱中,用于酶源制備。

    1.6 酶源制備

    待勻漿的印度谷螟幼蟲經(jīng)過流動的純凈水沖洗后,用濾紙將表面水分吸干。對幼蟲進(jìn)行稱重,置于試蟲9倍重的0.9%的低溫生理鹽水的玻璃勻漿器中進(jìn)行研磨,之后將勻漿液在 2 000~3 000 r/min下低溫離心15 min,取離心后上清液作為待測酶源,置于–80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.7 酶源蛋白質(zhì)含量測定

    采用考馬斯亮藍(lán)G–250法測定待測酶源中的總蛋白含量,以牛血清蛋白(BSA)為標(biāo)準(zhǔn)蛋白進(jìn)行計算。

    1.8 酶活性測定

    本實(shí)驗(yàn)采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的SOD、POD和CAT活力檢測試劑,按試劑盒說明進(jìn)行操作。被測樣品的抗氧化酶活性計算公式如下:

    1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    采用GraphPad軟件LSD方法進(jìn)行方差分析,重復(fù)數(shù)據(jù)計算其平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤(SE)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 稻谷水分含量變化

    儲藏前,HH/Bt和MH/CK稻谷的初始水分分別為13.31%和13.18%,無顯著差異(P>0.05)。在隨后的270 d儲藏期內(nèi),對HH/Bt稻谷的水分含量進(jìn)行的檢測分為糙米和稻殼兩部分進(jìn)行,結(jié)果見圖1。從HH/Bt稻谷的糙米和稻殼水分變化趨勢可以看出,隨著儲藏時間增加,其水分含量在逐漸降低,在270 d的儲藏期內(nèi),HH/Bt糙米水分由儲藏前的13.31%下降至12.46%,HH/Bt稻谷稻殼的水分由儲藏前的10.11%下降至8.54%。

    圖1 儲藏期內(nèi)HH/Bt稻谷(糙米和稻殼)水分變化

    2.2 Bt蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線

    以 1.8×10–2、1.5×10–2、1.0×10–2、5.0×10–3和1.0×10–3μg/mL 濃度梯度的Cry1Ab標(biāo)準(zhǔn)液,經(jīng)EnvirotogixCry1Ab/Cry1Ac平板試劑盒酶聯(lián)免疫反應(yīng)后,在450 nm波長下,用多功能酶標(biāo)儀讀取波長其OD值,繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

    圖2 Bt蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線

    2.3 儲藏期內(nèi)稻谷Bt蛋白含量變化

    在25 ℃條件下,歷時270 d(9個月)的儲藏期內(nèi),轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白含量的變化分別如圖3、圖4所示,測定結(jié)果顯示,隨著儲藏時間的增加,HH/Bt稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白含量均降低,HH/Bt稻谷的糙米中Bt蛋白含量由儲藏前的5.534 μg/g,在儲藏90、180、270 d后分別降至4.818、4.551、4.003 μg/g。HH/Bt稻谷的稻殼中 Bt蛋白含量由儲藏前的1.003 μg/g,在儲藏90、180、270 d后分別降至0.839、0.672、0.328 μg/g。在 270 d的儲藏期內(nèi),HH/Bt稻谷的稻殼中Bt蛋白的自然降解率較糙米中的大,HH/Bt稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白降解率分別為27.7%和67.3%。

    圖3 儲藏期內(nèi)HH/Bt稻谷的糙米中Bt蛋白含量變化

    圖4 儲藏期內(nèi)HH/Bt稻谷的稻殼中Bt蛋白含量變化

    儲藏期內(nèi)HH/Bt稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白含量的差異分析結(jié)果表明,隨著儲藏時間的延長,轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白的含量顯著下降(P<0.05),儲藏60、240 d后,糙米和稻殼中Bt蛋白含量分別為4.930、4.067、0.842、0.623 μg/g。同一儲藏期,對糙米和稻殼中的 Bt毒蛋白含量的差異分析結(jié)果表明,儲藏前(0 d)轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白的含量差異極顯著(P<0.05),儲藏270 d后,該轉(zhuǎn)基因稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白含量差異仍極顯著(P<0.05)。

    2.4 轉(zhuǎn)Bt基因大米粉對印度谷螟幼蟲體內(nèi)SOD活性的影響

    轉(zhuǎn) Bt基因大米粉對印度谷螟幼蟲體內(nèi) SOD的影響如圖5所示。在用不同濃度的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉飼喂印度谷螟幼蟲12 d后,其體內(nèi)SOD活性隨著取食飼料中轉(zhuǎn) Bt基因水稻濃度的上升而下降,在取食400 mg/g轉(zhuǎn)Bt基因水稻后,SOD活性與對照相比差異達(dá)到最大,下降了 28.4%。另外,圖6顯示了用50、100 mg/g的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉持續(xù)飼養(yǎng)印度谷螟5個月后,對試蟲種群體內(nèi)的SOD活性進(jìn)行測定的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)取食含有50、100 mg/g的轉(zhuǎn)基因大米粉飼料的印度谷螟種群的SOD活性與對照相比分別下降了10.33%、38.75%,該結(jié)果與12 d的飼養(yǎng)處理結(jié)果趨勢基本一致。深入分析認(rèn)為,在長期取食轉(zhuǎn)Bt基因大米粉后,幼蟲體內(nèi)的SOD活性明顯受到抑制,并且取食的飼料中轉(zhuǎn)基因大米粉含量越高,SOD活性抑制效果越顯著。這說明,長期取食轉(zhuǎn)Bt基因水稻后,Bt毒蛋白可能會抑制SOD對體內(nèi)O2–的清除。

    圖5 不同含量轉(zhuǎn)基因大米粉飼養(yǎng)印度谷螟幼蟲12天對其SOD酶活力的影響

    圖6 由不同含量轉(zhuǎn)基因大米粉飼養(yǎng)5個月后的印度谷螟種群體內(nèi)的SOD活性

    2.5 轉(zhuǎn)Bt基因水稻對印度谷螟幼蟲體內(nèi)POD活性的影響

    在用不同含量的轉(zhuǎn)Bt基因水稻飼喂印度谷螟幼蟲12 d后,其體內(nèi)POD活性變化的情況如圖7所示,取食轉(zhuǎn) Bt基因水稻后,幼蟲體內(nèi)的 POD活性顯著升高,且隨著飼料中轉(zhuǎn)Bt基因水稻濃度的上升而下降,但始終高于對照組。圖8表明利用不同含量的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉飼料飼養(yǎng)5個月的印度谷螟種群,其幼蟲體內(nèi)的POD活性進(jìn)行測定的結(jié)果,該結(jié)果與12 d的飼養(yǎng)結(jié)果一致,通過轉(zhuǎn)基因大米粉的POD活性高于對照組。由此可見,在利用轉(zhuǎn)基因大米粉長期飼養(yǎng)印度谷螟后,其體內(nèi)的POD活性明顯升高,說明其抵抗Bt毒素的能力顯著增強(qiáng),通過提高試蟲體內(nèi)的POD活性以維持細(xì)胞內(nèi) H2O2的動態(tài)平衡。然而攝入高濃度Bt毒素的幼蟲體內(nèi)POD活性比攝入低濃度的低,這可能是由于印度谷螟幼蟲對低濃度Bt毒素具有更快更強(qiáng)的適應(yīng)性,形成了較為完善的防御系統(tǒng)。

    圖7 不同含量轉(zhuǎn)基因大米粉飼養(yǎng)印度谷螟幼蟲12天對其POD活性的影響

    圖8 由不同含量轉(zhuǎn)基因大米粉飼養(yǎng)5個月后的印度谷螟種群體內(nèi)的POD活性

    2.6 轉(zhuǎn)Bt基因水稻對印度谷螟幼蟲體內(nèi)CAT活性的影響

    由圖 9可以看出,在印度谷螟幼蟲取食轉(zhuǎn)基因大米粉含量>50 mg/g的大米粉飼料后,其體內(nèi)的CAT活性均顯著高于對照組,且隨著Bt大米粉含量的增加,CAT活性呈增加趨勢。圖10表明利用不同含量的轉(zhuǎn)Bt基因大米粉飼料飼養(yǎng)5個月的印度谷螟種群,其體內(nèi)CAT活性的變化。在長期攝入Bt毒素后,幼蟲體內(nèi)的CAT活性均顯著高于對照組。

    由此可見,在印度谷螟幼蟲長期取食含有 Bt大米粉的飼料后,其體內(nèi)CAT活性會發(fā)生上調(diào),可能可以借此來清除體內(nèi)過量的H2O2,從而維持細(xì)胞內(nèi)游離自由基的相對穩(wěn)定,以抵抗Bt毒素的脅迫。

    圖9 不同含量轉(zhuǎn)基因大米粉飼養(yǎng)印度谷螟幼蟲12天對其CAT活性的影響

    圖10 由不同含量轉(zhuǎn)基因大米粉飼養(yǎng)5個月后的印度谷螟種群體內(nèi)的CAT活性

    3 討論

    本試驗(yàn)針對 25 ℃?zhèn)}儲條件下,水分含量為13%的轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷(HH/Bt)進(jìn)行為期270 d的儲藏研究,研究表明,隨著儲藏時間的增加,HH/Bt稻谷的糙米和稻殼的水分在逐漸降低,HH/Bt稻谷的糙米和稻殼中Bt蛋白含量顯著下降;同一儲藏期,HH/Bt稻谷的糙米中Bt蛋白含量顯著高于稻殼。林鎮(zhèn)清等[12]以早秈稻為材料,進(jìn)行高大平房倉儲藏,跟蹤測定了2006年3月至2008年7月期間,倉中稻谷水分含量的變化,指出質(zhì)量好的稻谷,在控溫、控濕較為理想的倉房內(nèi),稻谷水分會隨著儲藏時間的延長而逐漸降低。本文對轉(zhuǎn)基因稻谷的水分變化研究結(jié)果與其所得結(jié)論相一致。

    謝小波和舒慶堯等[13]對美國一龍公司(Envirotogix)開發(fā)的Cry1Ab/Cry1Ac平板試劑盒用于轉(zhuǎn)Cry1Ab基因水稻中 Bt蛋白含量測定進(jìn)行了評估,指出該試劑盒具有良好的檢測靈敏度和快速的特點(diǎn),其最低 Bt蛋白檢測濃度為0.5 ng/g。本試驗(yàn)所采用的試劑盒是 Envirotogix在原Cry1Ab/Cry1Ac檢測試劑盒基礎(chǔ)上加以改進(jìn)以適合轉(zhuǎn)基因稻谷檢測之用。Tu等[14]開發(fā)的轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因水稻估測其Bt蛋白表達(dá)量占總可溶蛋白的 0.01%~0.20%,為高表達(dá)水平,繼而開發(fā)的該轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因水稻明恢 63(T51–1)Bt蛋白含量高達(dá) 20 μg/g[15]。姜永厚等[16]對轉(zhuǎn)Cry1Ab基因克螟稻 1號(親本為秀水11)孕穗期和成熟期的莖稈中Bt蛋白含量測定結(jié)果分別為43.20、22.27 μg/g,而吳立成[17]對成熟期該轉(zhuǎn)基因水稻地上部分 Bt蛋白含量測定結(jié)果為 7.98 μg/g。Bashir等[18]對轉(zhuǎn)Cry1Ac和Cry2A的印度香米收獲10 d后的子粒中Bt含量測定結(jié)果分別為 0.3、0.26 μg/g。陳浩[19]測定的轉(zhuǎn)Cry1Ac、Cry2A*、Cry9C*基因的水稻明恢 63(TAC–2、T2A–1、T9C–3)成熟種子中Bt蛋白的含量分別為 8.15、12.98、20.10 μg/g。對于上述所測定的Bt蛋白的差異,親本水稻性狀、構(gòu)建的基因、啟動子、生長環(huán)境等都會影響到轉(zhuǎn) Bt基因水稻中Bt蛋白的表達(dá)水平。

    自然環(huán)境儲藏條件下,趙文娟[20]的對轉(zhuǎn)Cry1Ac/SCK基因Ⅱ優(yōu)MS67的Bt蛋白含量進(jìn)行連續(xù)9個月監(jiān)測結(jié)果顯示,Bt蛋白含量在1.262~1.593 μg/g,且在前期儲藏中蛋白降解較快,后期降解速度趨于平緩。轉(zhuǎn)Bt基因谷物中的Bt蛋白降解途徑有:自身代謝分解、光照、微生物分解等。宋偉等[21]的研究指出在25 ℃,13.5%水分含量的儲藏稻谷中,霉菌等微生物的數(shù)量相對較少。本文模擬25 ℃、無光照的倉儲條件,研究HH/Bt稻谷對 Bt蛋白的自身代謝分解,對轉(zhuǎn)Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷270 d的儲藏中,糙米和稻殼中的Bt蛋白的自然降解規(guī)律與前述報道呈一致性。

    隨著轉(zhuǎn)基因作物的推廣和應(yīng)用,研究人員對Bt伴胞晶體蛋白的相關(guān)殺蟲機(jī)理已進(jìn)行了詳盡的研究,在相關(guān)害蟲取食轉(zhuǎn)Bt作物后,害蟲機(jī)體會產(chǎn)生相應(yīng)的應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致了系列代謝變化,若Bt毒素刺激能夠控制在范圍內(nèi),蟲體可以通過調(diào)整對應(yīng)的代謝功能以適應(yīng)相應(yīng)的代謝影響,若刺激強(qiáng)度超過蟲體的代謝能力時,會影響害蟲的生理狀態(tài)。所以,我們可以通過研究昆蟲體內(nèi)酶系的變化情況來分析Bt毒素的相關(guān)毒理學(xué)機(jī)制。昆蟲體內(nèi)廣泛存在以SOD、CAT和POD為代表的保護(hù)酶系統(tǒng),能夠保護(hù)昆蟲機(jī)體免受自由基損傷,在昆蟲多種生理生化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用[11]。本試驗(yàn)研究了印度谷螟取食轉(zhuǎn)Bt大米粉后,其體內(nèi)的主要保護(hù)酶的對應(yīng)變化,深入探究了害蟲長期攝入Bt毒蛋白與其機(jī)體代謝情況的對應(yīng)關(guān)系。

    在轉(zhuǎn)Bt水稻短時誘導(dǎo)培養(yǎng)中,印度谷螟幼蟲體內(nèi)SOD活力上升,而CAT和POD的活力低于對照,受到了抑制,說明印度谷螟作為轉(zhuǎn)Bt基因水稻的靶標(biāo)害蟲,Bt毒蛋白被幼蟲攝入后,短期內(nèi)可擾亂幼蟲SOD,CAT和POD保護(hù)酶系統(tǒng)的動態(tài)平衡,對害蟲機(jī)體產(chǎn)生毒害作用。本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上研究了印度谷螟長期取食不同含量轉(zhuǎn)Bt基因大米粉12 d及連續(xù)篩選飼養(yǎng)5個月后,其體內(nèi)保護(hù)酶的變化情況,該結(jié)果與轉(zhuǎn)Bt基因稻谷短期飼喂幼蟲結(jié)果顯著不同。在長期喂食試驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)SOD活性顯著低于對照組,而POD和CAT的活性高于對照組。這說明印度谷螟幼蟲在較為長期取食Bt毒蛋白的過程中,自身形成了較為完善的防御系統(tǒng),可能通過提高 POD和 CAT的活性來實(shí)現(xiàn)H2O2、氧化酚類和胺類化合物的催化反應(yīng),從而有效清除了體內(nèi)H2O2和酚類、胺類物質(zhì)毒性[11]。而長期喂食后,SOD活性仍然受到了抑制,這說明三種保護(hù)酶的表達(dá)調(diào)控機(jī)制可能存在一定的差異,蟲體通過POD和CAT活性的提高以彌補(bǔ)SOD活力的下降,以保護(hù)和維持機(jī)體進(jìn)行正常的代謝,使試蟲對Bt毒素產(chǎn)生了一定的耐受性,但是保護(hù)酶的相關(guān)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)還有待進(jìn)一步探索。另外,我們還對取食轉(zhuǎn)基因大米粉后的印度谷螟生長發(fā)育情況進(jìn)行了系統(tǒng)性探索[23],同時,還利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)對取食轉(zhuǎn)基因大米粉后的印度谷螟中的差異表達(dá)基因進(jìn)行了分析[24],相關(guān)結(jié)果將同本文研究一道為揭示 Bt毒素的抗性機(jī)理以及毒理學(xué)效應(yīng)奠定了理論基礎(chǔ)。

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