傳統(tǒng)及趁鮮加工工藝對荊芥飲片質量的影響

劉雨晴，許鳳清，2，吳德玲，2，廖延武，張 偉，2，趙宏蘇

(1.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012；2.中藥飲片制造新技術安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012)

荊芥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，來源于唇形科植物荊芥SchizonepetatenuifoliaBriq. 的干燥地上部分[1]，是臨床常用辛溫解表藥。其性溫、味辛，以全草入藥，具有解表散風、透疹、消瘡之功效，主治風寒感冒、咽喉腫痛及多種皮膚病[2-3]。荊芥主要含有揮發(fā)油、黃酮、單萜苷類、甾體等化學成分[4-5]?，F(xiàn)代藥理研究[6-7]表明，荊芥在抗感染和抗病毒方面具有較好的療效。

傳統(tǒng)荊芥飲片生產(chǎn)加工過程中涉及清洗、軟化工序，與水較長時間接觸，一方面會導致荊芥中親水性有效成分流失，另一方面軟化切制后的二次干燥也會使荊芥中揮發(fā)性成分丟失，從而影響荊芥飲片的質量[8]。因此，荊芥作為一種富含揮發(fā)油類成分的全草類藥材，其飲片的切制加工工藝對保證其質量優(yōu)劣起決定性作用。有研究[9]表明，新鮮藥材在產(chǎn)地采收后就趁鮮加工成飲片，對于提高中藥飲片的質量具有十分重要的意義。2015年版《中華人民共和國藥典》以揮發(fā)油和胡薄荷酮作為荊芥質量控制的主要指標?，F(xiàn)有研究[10-11]表明，荊芥中黃酮類成分之一的橙皮苷具有抗感染、抗病毒、抗氧化等多種藥理活性，荊芥總黃酮亦具有抗腫瘤等作用[12-13]。因此，本研究以荊芥飲片揮發(fā)油、胡薄荷酮、橙皮苷及總黃酮含量作為指標，通過綜合評分法建立荊芥藥材及飲片的質量評價標準，并利用正交偏最小二乘判別分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)比較傳統(tǒng)加工與趁鮮加工方式對荊芥飲片質量的影響，旨在探討趁鮮加工的合理性與可行性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 水分測定裝置：湘潭市三星儀器有限公司；揮發(fā)油測定器：湘潭市三星儀器有限公司；島津LC-2030C 3D型高效液相色譜儀：日本島津公司；ME204E電子天平：梅特勒·托利多儀器有限公司；TU-1810紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限公司；RHP-100型高速多功能粉碎機：浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋：常州普天儀器制造有限公司；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 試藥 胡薄荷酮對照品(批號 YBF18052406，純度≥98%)、橙皮苷對照品(批號 YBF18052412，純度≥98%)：購于南京元寶峰醫(yī)藥科技有限公司；蘆丁標準品(批號 100080-201610，純度≥92.6%)：購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純：德國默克公司；水為純凈水；其他試劑均為分析純。

荊芥藥材于2018年9月13日采自國家中藥標準化荊芥種植基地——安徽省亳州市十八里荊芥種植基地，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學劉守金教授鑒定為唇形科植物荊芥SchizonepetatenuifoliaBriq新鮮地上部分。將原藥材割取荊芥地上部分，除去雜質，曬干。傳統(tǒng)加工飲片：將原藥材噴淋清水，洗凈潤透，于50 ℃烘1 h，切段，陰干干燥后即得。趁鮮加工飲片：將荊芥新鮮植株除去雜質，經(jīng)過自然干燥至五成干，切段，陰干干燥即得。

2 方法與結果

2.1 揮發(fā)油及胡薄荷酮含量測定 依照2015年版《中華人民共和國藥典》，分別取荊芥原藥材、傳統(tǒng)加工飲片、趁鮮加工飲片對揮發(fā)油及胡薄荷酮進行含量測定[3]，結果見表1。

2.2 總黃酮的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品適量，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解，配制成每1 mL含228.84 μg的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取荊芥飲片粉末(過2號篩)0.5 g，精密稱定。置于100 mL具塞磨口三角瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量。水浴加熱回流30 min，放置室溫，加甲醇補足減失的質量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 測定方法 取蘆丁對照品溶液或供試品溶液，置于25 mL量瓶中，加水至10 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，續(xù)加4%氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容至刻線，搖勻，放置15 min[13]，以相應試劑為空白，進行全波長掃描，結果表明供試品溶液的最大吸收在500 nm處，且陰性對照品無干擾。在該條件下測定吸收度A，計算總黃酮的含量，結果見表1。

2.2.4 線性關系的考察 精密吸取“2.2.1”項下的對照品溶液2、3、4、5、6、7 mL，自“置于25 mL量瓶中”起，按“2.2.3”方法制備系列濃度的蘆丁對照品溶液，以濃度(ρ)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線為A=0.011 6ρ+0.012 9，r=0.999 9，線性范圍為18.307～64.075 μg/mL。

2.3 橙皮苷含量的測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm)。流動相采用乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脫程序：0～19 min，20%乙腈；19～20 min，20%→85%乙腈；檢測波長為283 nm，柱溫30 ℃，流速為1.0 mL/min。色譜圖見圖1。

圖1 橙皮苷標準品(A)及荊芥樣品(B)的高效液相色譜圖(1代表橙皮苷)

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含121.48 μg的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取荊芥飲片樣品粉末(過2號篩)0.5 g，置于三角錐形瓶中，加甲醇25 mL，密塞，稱定質量，回流30 min，放冷，稱定質量，加相應溶劑補足減失的質量，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液制成供試品溶液。

2.3.4 線性關系的考察 精密吸取橙皮苷對照品溶液，以甲醇稀釋成不同濃度按“2.3.1”項下色譜條件進樣10 μL，以橙皮苷進樣濃度(ρ)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸分析，得線性方程A=19.11ρ+17.328，r=0.999 9(n=6)，表明橙皮苷在3.80～121.48 μg/mL的范圍內線性關系良好。

2.3.5 含量測定 取18批荊芥樣品，按照“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.3.1”項下色譜條件進行測定，計算樣品中橙皮苷的含量，結果見表1。

表1 不同加工方式荊芥飲片及藥材揮發(fā)油、胡薄荷酮、總黃酮、橙皮苷含量

2.4 綜合評分法分析 將上述各組樣品的揮發(fā)油、胡薄荷酮、總黃酮及橙皮苷含量測定結果進行加權綜合評分。以各指標的最大值為參照，對各組數(shù)據(jù)進行歸一化處理，再按各指標的重要性，給出權重系數(shù)。以揮發(fā)油含量(A，%，權重系數(shù)0.3)、胡薄荷酮含量(B，%，權重系數(shù)0.3)、總黃酮含量(C，%，權重系數(shù)0.2)、橙皮苷含量(D，%，權重系數(shù)0.2)為綜合考察指標，計算各組樣品綜合評分值，結果見表2。由表中結果可知，原藥材綜合評分最高，趁鮮加工次之，最后是傳統(tǒng)加工，表明不同加工方式的荊芥質量存在一定的差異。

表2 不同加工方式荊芥飲片及藥材

2.5 OPLS-DA 將歸一化處理后的各組數(shù)據(jù)，采用SIMCA14.1軟件進行OPLS-DA研究，散點得分圖見圖2。圖中趁鮮加工飲片與原藥材聚為一類，傳統(tǒng)加工飲片單獨聚為一類，說明相比傳統(tǒng)加工工藝而言，趁鮮加工飲片與原藥材的質量更為接近，更大程度上保留了藥材中有效成分。此外，對模型中變量重要性投影(variable importance projection，VIP)參數(shù)進行分析，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油、總黃酮、橙皮苷3個指標VIP值均大于1，說明3種成分是形成荊芥各組樣品間差異的主要因素，且貢獻率大小依次為總黃酮、橙皮苷、揮發(fā)油，表明荊芥中黃酮類成分在加工過程中變化較為顯著。見圖3

注：JD：傳統(tǒng)加工飲片；CXJD：趁鮮加工飲片；YC：原藥材

3 討論

本實驗考察了趁鮮加工與傳統(tǒng)加工工藝對荊芥中揮發(fā)油、胡薄荷酮、總黃酮和橙皮苷含量的影響，利用綜合評分法對各樣品質量進行評價。荊芥原藥材總體質量最好，其次是趁鮮加工飲片，最后是傳統(tǒng)加工飲片。

比較傳統(tǒng)加工與趁鮮加工結果可以發(fā)現(xiàn)，兩種工藝所制得的飲片中揮發(fā)油和胡薄荷酮含量均符合《中華人民共和國藥典》的要求，趁鮮加工飲片各指標成分的含量和綜合評分均高于傳統(tǒng)加工飲片，說明趁鮮加工飲片總體質量優(yōu)于傳統(tǒng)加工飲片；利用OPLS-DA法對數(shù)據(jù)分析可以得知，趁鮮加工飲片質量更接近原藥材質量，而傳統(tǒng)加工飲片質量橙皮苷、總黃酮、揮發(fā)油等多種成分均有顯著差異，與原藥材質量差距較大，模型中的VIP參數(shù)表明加工過程中橙皮苷和總黃酮在區(qū)分三者中起到重要作用。

注：V-1.揮發(fā)油；V-2.胡薄荷酮；V-3.總黃酮；V-4.橙皮苷

上述結果表明，荊芥飲片趁鮮加工在保證飲片質量上具有較高的可行性。綜合生產(chǎn)成本、生產(chǎn)效率及不同指標的質量評價結果，荊芥趁鮮加工工藝可行性最高。后期應利用現(xiàn)代分析檢測技術和統(tǒng)計分析方法，在繼承傳統(tǒng)經(jīng)驗鑒別指標的基礎上，引入表征荊芥內在品質的指標，還需對趁鮮加工的加工干燥方式，產(chǎn)地趁鮮加工工藝條件開展進一步研究進一步優(yōu)化，對干燥方法等方面進一步開展深入研究，完善并規(guī)范趁鮮加工荊芥飲片生產(chǎn)工藝流程，保障荊芥飲片質量均一、穩(wěn)定、可控，從而進一步完善荊芥藥材趁鮮加工工藝流程，以期為荊芥飲片趁鮮加工生產(chǎn)提供理論依據(jù)。