蘋(píng)果枝干輪紋病的有效防治技術(shù)研究

郭對(duì)田，劉保友,2，欒炳輝，王洪濤，王英姿，薛雯

(1.山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東煙臺(tái) 265500；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植保學(xué)院；3.山東省農(nóng)藥檢定所)

蘋(píng)果輪紋病是由葡萄座腔菌(Botryospaeriadothidea)引起的蘋(píng)果主要病害之一，在中國(guó)各蘋(píng)果產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，環(huán)渤海優(yōu)勢(shì)蘋(píng)果種植區(qū)發(fā)生嚴(yán)重[1,2]。富士品種易感輪紋病，且呈逐漸加重趨勢(shì)[3]。蘋(píng)果輪紋病菌侵染果實(shí)可在生長(zhǎng)期和貯存期造成爛果；侵染枝干形成干腐狀和枝干病瘤[1,4]。嚴(yán)重降低了樹(shù)勢(shì)甚至死枝，影響了蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)良性發(fā)展[2]。

輪紋病菌孢子是輪紋病原的主要接種體[5-7]，溫度適宜時(shí)，降雨特別是持續(xù)降雨是影響孢子釋放效果的主要影響因素。剪除干腐病枝和刮除病瘤是休眠季清園的重要工作內(nèi)容。因農(nóng)村勞動(dòng)力流失和老齡化，清園工作越來(lái)越不給力，枝干輪紋病發(fā)生愈發(fā)嚴(yán)重(圖1)。目前，化學(xué)防治仍是防控蘋(píng)果病害的主要措施之一[8]。筆者進(jìn)行了刮除輪紋病病瘤降低病原菌、刮除病瘤加噴殺菌劑和增效助劑的防治效果試驗(yàn)，并篩選環(huán)境友好的有效藥劑。

1 試驗(yàn)材料

輪紋病菌孢子監(jiān)測(cè)和田間評(píng)價(jià)試驗(yàn)園分別設(shè)在煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院和棲霞市臧格莊鎮(zhèn)，栽植株行距分別為3m×3m和2.5m×3m，樹(shù)齡分別為10年和14年，均發(fā)生枝干輪紋病嚴(yán)重。

供試藥劑共7種：①98%戊唑醇原藥，②98%多菌靈原藥，③30%戊唑·多菌靈懸浮劑(SC)，以上3種藥劑均為江蘇龍燈化學(xué)有限公司產(chǎn)品，④98%吡唑醚菌酯原藥，安道麥安邦(江蘇)有限公司產(chǎn)品，⑤250 g/L吡唑醚菌酯乳油(EC)，巴斯夫歐洲公司產(chǎn)品，⑥25%戊唑醇水乳劑(EW)，美國(guó)世科姆公司產(chǎn)品，⑦杰效利，助劑，美國(guó)邁圖高新材料集團(tuán)產(chǎn)品。①～⑥的基本藥劑有3種，即戊唑醇、多菌靈、吡唑醚菌酯。

2 試驗(yàn)方法

2.1 輪紋病枝干刮除病瘤、噴藥處理對(duì)病原孢子釋放量的影響

2016、2017年2年的5月13日至7月29日，采用玻片粘著法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)蘋(píng)果輪紋病病菌孢子[5]。設(shè)3個(gè)處理：處理1不刮除病瘤，處理2刮除病瘤，處理3刮除病瘤后噴25%戊唑醇EW 2000倍液(筆者多年應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)，刮除病瘤后噴施戊唑醇可大幅減少枝干病瘤的增長(zhǎng)率)，10～14 天噴施1次，共噴7次。每個(gè)處理放置3個(gè)載玻片，載玻片均勻涂抹凡士林的一面貼近枝干輪紋病瘤處(圖2)，間隔7～10天更新載玻片，換下的載玻片帶回實(shí)驗(yàn)室于100倍顯微鏡視野下鏡檢。

2.2 實(shí)驗(yàn)室測(cè)定3種殺菌劑對(duì)病原菌的毒力

采用平皿法(NY/T 1156.2-2006)測(cè)定3種殺菌劑吡唑醚菌酯、戊唑醇、多菌靈對(duì)輪紋病原菌的毒力。分別用少量二甲基酰胺、丙酮、冰醋酸溶解后，加入0.1%吐溫80 水溶液，配成濃度為1000mg/L 的母液。采用二次稀釋方法準(zhǔn)確稱(chēng)量所需藥量，與熔化的59ml PDA培養(yǎng)基混合，倒在9cm玻璃皿上。配制吡唑醚菌酯、戊唑醇、多菌靈濃度梯度分別為0.16、0.63、2.50、5.00、10.00mg/kg，0.04、0.08、0.16、0.31、0.63mg/kg和0.08、0.16、0.31、0.63、1.25mg/kg。將直徑6mm菌盤(pán)接種到培養(yǎng)基上，于25℃恒溫培養(yǎng)6天，用十字交叉法測(cè)量菌絲盤(pán)直徑，計(jì)算殺菌劑的抑制生長(zhǎng)率。每個(gè)濃度處理重復(fù)4次，以不加藥平板做對(duì)照。

菌落增長(zhǎng)直徑D=D1-D2，式中D為菌落增長(zhǎng)直徑，D1為菌落直徑，D2為菌餅直徑；菌絲生長(zhǎng)抑制率I=(D0-Dt)/D0×100，式中I為菌絲生長(zhǎng)抑制率，D0為空白對(duì)照菌絲增長(zhǎng)直徑，Dt為藥劑處理菌落增長(zhǎng)直徑。

根據(jù)殺菌劑各濃度的對(duì)數(shù)值及對(duì)應(yīng)的菌絲生長(zhǎng)抑制幾率值做回歸分析，計(jì)算各殺菌劑毒力回歸方程(y=bx+a，其中y值表示抑制幾率值，x表示藥劑濃度絕對(duì)值，a值為截距，b值為回歸直線(xiàn)的坡度)、相關(guān)系數(shù)(r)、半數(shù)抑制濃度(EC50)、90%抑制濃度(EC90)。

2.3 田間殺菌劑防控枝干輪紋病效果評(píng)價(jià)

早春，選取病瘤較多且分布均勻的樹(shù)干，在試驗(yàn)枝干上刮除病瘤、不刮除病瘤兩種情況下，均噴施3種殺菌劑：250g/L吡唑醚菌酯EC設(shè)1500倍、2000倍、3000倍液3個(gè)濃度處理；250g/L吡唑醚菌酯EC設(shè)3000倍+杰效利3000倍液處理；30%戊唑·多菌靈SC設(shè)600倍、30%戊唑·多菌靈SC600倍+杰效利3000倍液處理。以不刮瘤不噴藥為空白對(duì)照。藥劑均勻噴布枝干至滴液為度。藥后14 天切取病瘤樹(shù)皮，每處理取100個(gè)病瘤樹(shù)皮，剪成0.5mm×0.5mm大小，厚度不超過(guò)0.2mm。于超凈工作臺(tái)內(nèi)將病瘤樹(shù)皮用滅菌手術(shù)刀切成2～3mm大小的病組織塊，浸入5%漂白粉溶液中消毒5分鐘，滅菌水沖洗后移入PDA培養(yǎng)基上，25℃恒溫培養(yǎng)6天，檢查病原菌生長(zhǎng)情況，計(jì)算輪紋病菌分離率和防效。(對(duì)枝干病瘤處的分離主要目的是看刮除病瘤和噴施藥劑后對(duì)病原菌的鏟除效果，利用分離率計(jì)算防效)。

分離率=組織塊菌分離數(shù)/總組織塊數(shù)×100。

防效(%)=[(對(duì)照菌落分離率-處理菌落分離率)/對(duì)照菌落分離率]×100。

3 結(jié)果與分析

3.1 刮除病瘤、噴藥對(duì)蘋(píng)果枝干輪紋病孢子釋放量的影響

蘋(píng)果枝干刮除輪紋病病瘤可顯著減少菌孢子的釋放量。如表1，2016年5月13日至7月29日，不刮除病瘤處理共檢測(cè)到5384個(gè)孢子，刮除病瘤處理的1318個(gè)，減少75.5%，刮除病瘤后施藥處理的488個(gè)，較刮除病瘤處理的減少63.0%，較不刮除病瘤的減少90.9%。2017年各處理的孢子釋放量均高于2016年，這是因?yàn)榫咦俞尫帕颗c降雨量呈正相關(guān)[7]，2017年降雨量650mm，較2016年增加121.6mm。但各處理的菌孢子釋放量的變化趨勢(shì)與2016年趨同。2017年刮除病瘤處理的菌孢子量比不刮除的減少44.3%，刮除病瘤且施藥處理的孢子量較刮除病瘤處理的減少43.39%。說(shuō)明刮除病瘤及噴施藥劑的防治輪紋病效果明顯(圖3)。

表1 刮除病瘤及施藥對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌孢子釋放的影響

3.2 3種殺菌劑對(duì)枝干輪紋病的殺菌效果

3.2.1 殺菌劑的室內(nèi)殺菌效果 如表2，室內(nèi)平皿法測(cè)定吡唑醚菌酯、戊唑醇、多菌靈3種殺菌劑對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的抑菌效果均表現(xiàn)良好。EC50分別為0.1967、0.2501、0.3622mg/L，EC90均小于3.9794mg/L。

表2 3種殺菌劑對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的室內(nèi)抑菌效果

3.2.2 殺菌劑在田間的殺菌效果 如表3，果園防控蘋(píng)果枝干輪紋病的效果為：刮除病瘤噴藥能明顯提高藥劑的防效，250g/L吡唑醚菌酯EC1500倍液防效70.27%，比不刮除病瘤噴藥處理的防效36.59%高33.68個(gè)百分點(diǎn)，2000倍和3000倍液的防效低于1500倍液的，但均優(yōu)于不刮除病瘤噴藥處理的防效；同樣噴施30%戊唑·多菌靈SC400、500、600倍液時(shí)，刮除病瘤噴藥的防效明顯高于不刮除病瘤噴藥的防效。刮除病瘤后噴施250g/L吡唑醚菌酯EC 3000倍液混加助劑杰效利 3000倍液的防效為56.76%，明顯高于單噴250g/L吡唑醚菌酯EC 3000倍的防效29.73%。噴施30%戊唑·多菌靈SC 600倍混加助劑杰效利的防效為83.78%，高于單噴30%戊唑·多菌靈SC 600倍防效72.97%。不刮除病瘤時(shí)，殺菌劑中添加助劑的比不添加助劑的同樣提高了防效。

表3 田間不同殺菌劑對(duì)枝干病瘤輪紋病菌殺傷力測(cè)定

4 小結(jié)與討論

輪紋病菌具有潛伏侵染的特性，病菌孢子侵染寄主后，果實(shí)一般在近成熟期開(kāi)始發(fā)病；枝干突起病瘤中的菌絲均被寄主木栓化細(xì)胞圍繞，后期木栓化細(xì)胞將病瘤與健康組織隔離。未形成外凸病瘤時(shí)，病菌可在皮孔下形成病組織[9]。經(jīng)2016～2017年連續(xù)2年試驗(yàn)表明，刮除蘋(píng)果枝干輪紋病病瘤可大幅減少病菌孢子的釋放量。刮除病瘤并噴施藥劑進(jìn)一步降低了病菌孢子的釋放量，對(duì)控制蘋(píng)果枝干輪紋病效果良好。不刮除病瘤處理的病原菌分離率高。室內(nèi)和田間試驗(yàn)結(jié)果均表明，250g/L吡唑醚菌酯EC 1500～2000倍、30%戊唑·多菌靈SC 400～600倍液可用于較好地防控蘋(píng)果枝干輪紋病。吡唑醚菌酯(甲氧基丙烯酸酯類(lèi)藥)具有高效、殺菌譜廣、毒性低等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)作物還具有增產(chǎn)效果。戊唑醇因長(zhǎng)期施用而致輪紋病菌已對(duì)其產(chǎn)生低水平抗性[10]，與多菌靈的混配制劑防效良好。杰效利是Silwet系列有機(jī)硅助劑產(chǎn)品之一，具有增加防效、提高農(nóng)藥利用率、耐雨沖刷、安全等優(yōu)點(diǎn)，在生產(chǎn)中逐漸得到應(yīng)用，有助于滿(mǎn)足農(nóng)業(yè)健康發(fā)展需求[11-14]。刮除病瘤后，噴施的殺菌劑混加杰效利比不加杰效利會(huì)大幅度提高對(duì)枝干輪紋病的防效。