類風濕關節(jié)炎患者抗核抗體類型及相關抗體的研究

劉衛(wèi)霞，龐愛梅，郭緒曉，張 恒

(山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院檢驗科，濟南 250011)

目前自身免疫性疾病的研究受到越來越多的重視。自身免疫性疾病的病因是患者的免疫機制紊亂導致體內(nèi)產(chǎn)生了自身抗體。類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一類常見的自身免疫性疾病，其病因的研究也受到廣泛關注[1-3]?？购丝贵w(antinuclear antibody,ANA)作為自身免疫性疾病常見的自身抗體，在多種自身免疫性疾病中有極高的陽性率[4-6]。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡陽性率占95%～100%，混合性結(jié)締組織病陽性率占80%～100%，全身性硬皮病占85%～90%，在RA中占20%～40%。但是對于ANA在類風濕發(fā)病中的作用尚未見報道。筆者主要就ANA在RA患者中的陽性率、熒光類型及其與RF和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,ACPA)的關系進行研究，該結(jié)果對于揭示ANA在RA發(fā)病中的作用有極大的幫助。

1 材料和方法

1.1 研究對象 收集2018年7月～2019年7月我院風濕免疫科確診的RA患者342例為病例組,收集同期普通骨關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)患者120例為對照組。RA患者均符合2009年ACR/EULAR制定的RA分類標準，OA患者符合骨關節(jié)炎診斷標準，排除并發(fā)其他結(jié)締組織病。

1.2 試劑和儀器 ANA類型分析采用間接免疫熒光法(歐蒙醫(yī)學實驗診斷試劑公司的試劑盒)，用Olympus熒光顯微鏡進行分析；ANA譜分析了采用免疫印跡法(歐蒙醫(yī)學實驗診斷試劑公司)；RF采用免疫散射比濁法進行檢測，使用的是西門子BN Prospec特種蛋白儀及原廠配套試劑；ACPA檢測采用ELISA法(上?？菩律锟萍加邢薰镜脑噭┖?。

1.3 研究方法 采集受檢者靜脈血3ml于真空采血管中，3 500r/min離心5min，用于ANA類型、ANA 譜、RF和ACPA的檢測。ANA熒光類型滴度<1∶100判斷為陰性，≥1∶100判斷為陽性。陽性熒光模型有核顆粒型、核均質(zhì)型、核仁型、核膜型和著絲點型。ANA譜可以檢測U1-nRNP，Sm，SS-A(Ro)，SS-B(La)，Scl-70，PCNA和dsDNA等14種高度純化的細胞核抗原。血清RF>15 IU/ml為陽性，ACPA>25U/ml為陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 RA患者ANA陽性率觀察結(jié)果 342例RA患者中男性57例，女性285例，年齡60.7±11.46歲，RF的平均值為321.12±292.38 IU/ml，ACPA的平均值為1 123±1 644 U/ml。RA組ANA陽性率64.04%(219/342)，普通骨關節(jié)炎組患者ANA陽性率4.17%(5/120)。RA組ANA陽性率與OA組比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=127.47,P<0.01)。

2.2 RA患者ANA類型分析 RA患者ANA類型分析發(fā)現(xiàn)，在219例ANA陽性病人中，核顆粒型85例(38.8%)，核均質(zhì)型72例(32.8%)，胞漿型33例(15.07%)，核仁型15例(6.85%)，核顆粒型合并胞漿型14例(6.39%)。ANA陽性滴度范圍1∶100～1∶3 200。其中滴度1∶100者83例(37.90%)，1∶320者86例(39.27%)，1∶10 00者49例(22.37%)，1∶3 200者1例(0.46%)。

2.3 RA患者ANA類型與ANA譜的關系 為了研究RA患者ANA陽性者對應的抗體，我們觀察了這些ANA陽性患者對應的ANA譜(共14種抗原)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些患者ANA譜有61%都是陰性的，另外11.5%是SS-A Ab陽性。說明RA患者ANA陽性對應的抗體不是我們檢測的這14種抗體，其對應的抗體尚不清楚。

2.4 RA患者ANA陽性率與血清RF和ACPA水平的關系 有大量的報道RA患者的嚴重程度與血清RF和ACPA的水平有關[7-8]。RF和ACPA水平越高，疾病越嚴重。為了研究ANA陽性率與血清RF和ACPA水平的關系，我們將血清RF的水平分為≤100 IU/ml和>100 IU/ml兩組，將ACPA水平分為≤400 U/ml和>400 U/ml兩組。發(fā)現(xiàn)在RF或ACPA水平比較低的RA患者中，ANA陽性率也較低(36.36%,36/99)，而在RF或ACPA水平較高的RA患者中，ANA陽性率較高(75.31%,183/243)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=46.33,P<0.01)。

3 討論

自身免疫性疾病的病因是患者產(chǎn)生了針對自身的自身抗體。人體的生長、發(fā)育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防御作用，即對自身組織、成分不發(fā)生反應。一旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為“異物”，而發(fā)生自身免疫反應，產(chǎn)生自身抗體?？购丝贵w是自身免疫性疾病常見的一種自身抗體。我們的研究發(fā)現(xiàn)RA患者的陽性率為64.04%，說明ANA在RA的發(fā)病中可能發(fā)揮著重要的作用。

類風濕因子(RF)和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(ACPA)作為自身抗體，已經(jīng)在RA患者的診斷和治療中得到廣泛的應用。在正常的免疫系統(tǒng)中RF發(fā)揮著重要的生理作用，比如RF的IgM亞型促進巨噬細胞的吞噬作用和感染時抗原抗體復合物的清除；補體的固定；促進B細胞對抗原的攝取和遞呈給CD4+T細胞。但是這些天然的IgM-RF親和力比較低，而病理類型的IgM-RF親和力大大增強，而且RF的IgG和IgA亞型似乎在RA的發(fā)病中發(fā)揮更大的作用。對ACPA的研究發(fā)現(xiàn)，對環(huán)瓜氨酸肽化的自身抗原特異的T細胞會被激活，導致病理性輔助T細胞的產(chǎn)生，這些病理性輔助T細胞會幫助機體產(chǎn)生更多的自身抗體[7]。研究發(fā)現(xiàn)RA患者疾病的嚴重程度與RF和ACPA的水平呈正相關，我們的研究發(fā)現(xiàn)RF和ACPA水平升高的RA患者抗核抗體的陽性率也升高。這進一步表明抗核抗體在類風濕的發(fā)病中可能發(fā)揮著重要的作用。但是我們觀察了RA患者ANA陽性病例對應的ANA譜，沒有發(fā)現(xiàn)陽性抗體，說明ANA在RA發(fā)病中作用的具體機制尚不清楚，需要進一步研究。