牙齦卟啉單胞菌與細(xì)胞自噬相互作用研究進(jìn)展

郭藝博，劉怡文，孫 蔚，張秀森，孫玲云，張頂彧，原 翔，高社干

細(xì)菌已經(jīng)演化出多種入侵真核細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)定植、增殖的機(jī)制[1]。當(dāng)外來病原菌侵入細(xì)胞后，會通過多種機(jī)制來逃避宿主細(xì)胞的免疫及降解作用，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)定植生存。在細(xì)菌侵入細(xì)胞后，首先會被一個雙層膜的液泡，即吞噬小體包裹。在這一過程中，放線菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans，ACT)、李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes，Lm)等可通過溶解雙層膜的吞噬小體進(jìn)而在細(xì)胞中定植生存[2-3]；含有細(xì)菌的吞噬小體也可通過內(nèi)源性途徑轉(zhuǎn)運(yùn)至自噬小體從而進(jìn)入自噬途徑，此時如牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，Pg)、流產(chǎn)布魯氏菌(Brucellaabortus，Ba)和嗜肺軍團(tuán)菌(Legionellapneumophila，Lp)等便可通過對自噬小體進(jìn)行修飾調(diào)節(jié)，影響自噬途徑的正常進(jìn)行，阻礙自噬小體與溶酶體融合而影響自噬過程中的降解作用，實(shí)現(xiàn)自噬逃逸，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)細(xì)菌在宿主細(xì)胞內(nèi)定植生存[4-6]。本文將以Pg侵入正常牙齦細(xì)胞或食管上皮細(xì)胞為例，對外來病原菌侵入細(xì)胞后轉(zhuǎn)運(yùn)至自噬途徑并發(fā)生自噬逃逸這一過程進(jìn)行綜述，總結(jié)Pg在細(xì)胞內(nèi)定植生存及增殖的機(jī)制。

1 自噬

1.1 細(xì)胞與自噬

自噬是一種細(xì)胞內(nèi)的重要生理活動，用于降解受損細(xì)胞器和細(xì)胞質(zhì)組分，以維持其穩(wěn)態(tài)。從形成自噬小體到自噬小體向溶酶體轉(zhuǎn)運(yùn)最終形成自噬溶酶體，這一過程是細(xì)胞新陳代謝、發(fā)揮其降解作用、清除細(xì)胞質(zhì)組分及受損細(xì)胞器所必須的。其中自噬過程中被降解的細(xì)胞質(zhì)組分特指在細(xì)胞分化、應(yīng)激效應(yīng)或暴露于細(xì)胞毒素等因素造成的受損胞內(nèi)組分；被降解的細(xì)胞器特指在細(xì)胞受損或刺激后導(dǎo)致自身細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞及功能受損的細(xì)胞器[7-8]。目前已有大量研究證實(shí)了這一現(xiàn)象，比如，腦肝腎綜合征患者體內(nèi)細(xì)胞中所形成的異常過氧化物酶體就是通過自噬途徑而被降解[9]。在鎮(zhèn)靜劑苯巴比妥攝入后引起肝臟細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的異常增殖、安妥明等降血脂藥物攝入后引起過氧化物酶體的異常增殖等現(xiàn)象中，一旦終止藥物的攝入，這些異常增殖的細(xì)胞器便會通過自噬途徑而被降解掉[10-11]。當(dāng)細(xì)胞處于營養(yǎng)不良狀態(tài)時，通常通過對自身細(xì)胞內(nèi)組分的非選擇性降解，攝取其中的碳水化合物和氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)[12]。自噬本身就是細(xì)胞內(nèi)天然的維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)的一種重要的生理活動，在細(xì)胞受到刺激或處于營養(yǎng)不良狀態(tài)(缺乏氨基酸/生長因子等)時，細(xì)胞內(nèi)的自噬活性會進(jìn)一步得到加強(qiáng)[13]。在他莫昔芬治療乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞可在藥物的作用下誘導(dǎo)體內(nèi)自噬的發(fā)生，進(jìn)而對癌細(xì)胞進(jìn)行降解[14]。盡管自噬是可以高度調(diào)節(jié)地發(fā)揮降解作用的一種內(nèi)源性途徑，但目前已有研究報道，在一些因缺乏生長因子而死亡的神經(jīng)元以及X連鎖肌小管性肌病中，發(fā)生了不受自噬調(diào)控的細(xì)胞器降解甚至死亡的現(xiàn)象[15-16]。

早期自噬小體是一個由糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌的多層膜結(jié)構(gòu)的液泡，其中包裹著尚未降解的受損細(xì)胞器以及細(xì)胞質(zhì)成分[17-18]。隨后早期自噬小體通過獲得MAP-LC3微管結(jié)合蛋白以及溶酶體膜蛋白HsGsa7p和LAMP-1后演化為后期自噬小體，此時的自噬小體仍缺乏蛋白水解酶而無降解作用，須轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體并在微管蛋白介導(dǎo)下與溶酶體融合形成自噬溶酶體，進(jìn)而發(fā)揮自噬途徑中的降解作用，對其中的細(xì)胞質(zhì)成分及受損細(xì)胞器進(jìn)行降解，所得降解產(chǎn)物還可為細(xì)胞內(nèi)正常代謝活動提供能量[13]。

1.2 自噬相關(guān)的分子機(jī)制

肌動蛋白、異三聚體G蛋白、Ⅲ類磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及其伴隨的p150蛋白等均為自噬小體形成及成熟過程所必須的分子[19]。此外，機(jī)體內(nèi)同樣也存在抑制自噬發(fā)生的途徑，如FRAP/mTOR，是一種磷脂酰肌醇/蛋白激酶，可通過調(diào)節(jié)核糖體S6蛋白磷酸化水平升高而促進(jìn)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成[20]，抑制自噬的發(fā)生[21]；Ⅰ類PI3K蛋白同樣也是自噬的一個負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白[22]。還有文獻(xiàn)指出，由E1泛素激酶激活的一種蛋白結(jié)合系統(tǒng)同樣也是自噬小體形成所必須的[23]，這種蛋白結(jié)合系統(tǒng)已證明在包括人類在內(nèi)的所有真核生物中均有存在[24-25]。目前已在酵母和哺乳動物細(xì)胞中證明，E1泛素激酶家族中的Gsa7p/Apg7p[23]，可通過催化Apg12p與Apg5p蛋白結(jié)合、Apg8p與磷脂酰乙醇胺結(jié)合調(diào)節(jié)自噬小體的形成及成熟過程[26]。Apg12p與Apg5p結(jié)合所形成的蛋白復(fù)合物可通過調(diào)節(jié)糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌自噬小體前體這一過程影響自噬小體的形成；Apg8p作為一種脂溶性蛋白，可與自噬小體膜結(jié)合，是自噬小體成熟過程中的一個關(guān)鍵蛋白，與人類MAP-LC3蛋白是同系物且均可定位于自噬小體的外膜上[27]。MAP-LC3蛋白可定位于自噬小體的外膜上，是自噬小體形成的標(biāo)志，一旦加入渥曼青霉素、3-甲基腺嘌呤等抑制劑抑制自噬的發(fā)生，可發(fā)現(xiàn)MAP-LC3表達(dá)量明顯降低[27]。人類同源的Gsa7p和HsGsa7p蛋白可以促進(jìn)hApg12p與MAP-LC3蛋白結(jié)合，進(jìn)一步證明了蛋白結(jié)合系統(tǒng)對真核生物的自噬過程能夠起到一定的調(diào)控作用[24,28]。自噬小體形成后需要與溶酶體結(jié)合形成成熟的自噬小體，在微管蛋白、LAMP-2和SNAREs蛋白的共同作用下[19,29]，通過招募V-ATPase和溶酶體蛋白LAMP-1至自噬小體外膜，隨后與溶酶體融合形成富含酸性水解酶的成熟自噬小體，即自噬溶酶體進(jìn)而發(fā)揮其降解作用。

1.3 細(xì)菌感染與細(xì)胞自噬

許多細(xì)菌已經(jīng)演化出多種入侵真核細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生定植、增殖的機(jī)制[1]。細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞后首先會被吞噬小體包裹，接著在Rab GTPases蛋白的調(diào)控下介導(dǎo)吞噬小體與核內(nèi)體發(fā)生動態(tài)轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而與溶酶體融合形成成熟的吞噬小體即吞噬溶酶體，發(fā)揮其降解作用[30-31]。吞噬溶酶體中富集大量蛋白水解酶，促使其包裹的大多數(shù)病原體的死亡和降解，抵御了胞內(nèi)病原體的進(jìn)一步擴(kuò)增。而一些研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)入胞內(nèi)的病原體可通過干擾吞噬小體向吞噬溶酶體成熟這一過程，逃逸宿主細(xì)胞的降解作用，以實(shí)現(xiàn)病原體在胞內(nèi)的定植生存。如包裹結(jié)核桿菌的吞噬小體，由于缺乏V-ATPase，使得吞噬小體無法與溶酶體結(jié)合而形成成熟吞噬小體的過程，繼而使得結(jié)核桿菌在胞內(nèi)逃逸被降解的過程，實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)的定植生存[32]。因此，一些進(jìn)入胞內(nèi)的病原體可能通過干擾吞噬小體的形成及成熟過程而逃逸宿主細(xì)胞的降解作用，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)定植生存。

進(jìn)入胞內(nèi)后的病原體除了被吞噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體之外，還能被轉(zhuǎn)運(yùn)至自噬小體進(jìn)入自噬途徑。如Pg感染食管上皮細(xì)胞，在加入渥曼青霉素或3-甲基腺嘌呤等抑制劑預(yù)處理食管上皮細(xì)胞后，再用Pg感染細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌在胞內(nèi)無一存活[6,20,33-34]。這些數(shù)據(jù)表明外來病原體進(jìn)入胞內(nèi)后，通過刺激細(xì)胞的自噬發(fā)生，使得病原體侵入細(xì)胞后由吞噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入自噬途徑，繼而在自噬過程中逃逸宿主細(xì)胞的降解作用，實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)的定植生存。目前已經(jīng)有研究表明自噬水平會隨著侵入病原體的增多而升高[35]。此外還有研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在受病原體感染引起的細(xì)胞自噬中，其中的自噬相關(guān)蛋白HsGsa7p的分布明顯不同于由饑餓而引起的細(xì)胞自噬。在細(xì)胞由饑餓而引起的自噬中，HsGsa7p蛋白相對分散，分布于整個細(xì)胞質(zhì)當(dāng)中，當(dāng)加入渥曼青霉素抑制自噬途徑時，HsGsa7p蛋白則定位于高爾基體上。在細(xì)胞由病原體感染而引起的自噬中，HsGsa7p聚集明顯，附著于自噬小體外膜上。當(dāng)加入渥曼青霉素抑制自噬途徑時，HsGsa7p同樣定位于高爾基體上[36]。因此，進(jìn)入胞內(nèi)的病原體同樣也可能通過干擾自噬小體的形成及成熟過程擺脫其被降解的命運(yùn)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)定植生存。

2 細(xì)菌侵入細(xì)胞后能夠向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)

目前對于細(xì)菌在侵入細(xì)胞后是直接被轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體中進(jìn)行降解還是進(jìn)入自噬途徑，仍沒有一個明確的結(jié)論。如Pg在其進(jìn)入細(xì)胞被包裹于吞噬小體后，能直接向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入自噬途徑，而不是直接被溶酶體降解，進(jìn)入自噬途徑后的Pg就能夠利用自身的Ⅸ型蛋白分泌系統(tǒng)對自噬小體進(jìn)行修飾調(diào)節(jié)[37]，利用自噬小體所包裹的內(nèi)源性蛋白為其在胞內(nèi)定植生存供給能量[38-40]；此外如嗜肺假單胞菌，在侵入細(xì)胞后被吞噬小體包裹，可通過icm/dotⅣ型蛋白分泌系統(tǒng)介導(dǎo)下轉(zhuǎn)導(dǎo)順式作用信號，激活自噬途徑，將細(xì)菌由吞噬小體向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)并在自噬過程中誘發(fā)自噬逃逸，最終實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)的定植及增殖[41-43]；Ba同樣也可以在icm/dotⅣ型蛋白分泌系統(tǒng)的介導(dǎo)下實(shí)現(xiàn)其在胞內(nèi)的定植及增殖[44-45]。這些研究說明細(xì)菌侵入細(xì)胞被吞噬小體包裹后，可以通過一系列蛋白分泌系統(tǒng)激活自噬途徑，介導(dǎo)細(xì)菌從吞噬小體向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)，并誘發(fā)自噬逃逸，最終實(shí)現(xiàn)細(xì)菌在胞內(nèi)定植增殖[46]。而如果細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞后沒有自身蛋白分泌系統(tǒng)的調(diào)控，那么細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞被吞噬小體包裹后將直接轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入自噬途徑，激活自噬的發(fā)生，由自噬小體將外來細(xì)菌包裹起來，并通過自噬途徑轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體中形成自噬溶酶體，發(fā)揮對細(xì)菌的降解作用。自噬常會因外界病原體感染、高溫、輻射、饑餓、藥物等作用而被激活[14,47-49]。因此，受到外來病原體侵入的細(xì)胞均可通過激活自噬途徑形成自噬小體，并與溶酶體結(jié)合形成自噬溶酶體，在蛋白水解酶的作用下實(shí)現(xiàn)對外來病原體的清除降解作用。

3 細(xì)菌在自噬小體中發(fā)生自噬逃逸

正常情況下，細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后首先會被吞噬小體所包裹，繼而再通過與核內(nèi)體相互作用演化成具有核內(nèi)體特征的液泡，隨后通過與溶酶體結(jié)合，在溶酶體水解酶的作用下實(shí)現(xiàn)宿主細(xì)胞對胞內(nèi)細(xì)菌的降解[22]。然而對于Pg而言，在進(jìn)入細(xì)胞后能夠通過吞噬小體迅速與早期核內(nèi)體結(jié)合，隨后向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)，而避免了進(jìn)入細(xì)胞后直接被溶酶體降解的命運(yùn)[6,50-51]。包含細(xì)菌的核內(nèi)體能夠向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)這一現(xiàn)象說明細(xì)胞內(nèi)存在著介導(dǎo)內(nèi)吞與自噬相互作用的機(jī)制[9,17,52]，這一機(jī)制同樣也介導(dǎo)核內(nèi)體與自噬小體的融合[53]。核內(nèi)體與自噬小體融合，揭示了Pg進(jìn)入細(xì)胞后向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)的這一重要途徑。

早期的自噬小體是由糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(rough endoplasmic reticulum，RER)內(nèi)陷而形成的具有多層膜結(jié)構(gòu)的液泡，包裹著尚未降解的細(xì)胞質(zhì)成分及受損的細(xì)胞器[13]。利用免疫熒光方法檢測Pg侵入細(xì)胞后與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的共定位實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，胞內(nèi)的細(xì)菌與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白存在大量的共定位現(xiàn)象[6,54]，說明侵入細(xì)胞后的細(xì)菌能夠與早期自噬小體結(jié)合。此外Garin還利用免疫熒光檢測了胞內(nèi)細(xì)菌和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中其他與核內(nèi)體相關(guān)的蛋白(鈣網(wǎng)蛋白、鈣聯(lián)接蛋白、GRP78、Erp29)的共定位情況，發(fā)現(xiàn)胞內(nèi)細(xì)菌能夠與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白結(jié)合產(chǎn)生共定位的同時，還改變了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在細(xì)胞質(zhì)中的分布：被細(xì)菌感染后的細(xì)胞在其細(xì)胞質(zhì)中可見自噬小體周圍富集了大量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而未被細(xì)菌感染的細(xì)胞其自噬小體周圍并未發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。

HsGsa7p作為一種介導(dǎo)早期自噬小體形成的關(guān)鍵蛋白，在免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，檢測在經(jīng)Pg感染后的細(xì)胞中胞內(nèi)細(xì)菌與HsGsa7p共定位的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)[6]，HsGsa7p同樣也能與胞內(nèi)細(xì)菌發(fā)生大量共定位。隨著自噬小體的成熟，HsGsa7p與Pg的共定位逐漸減少。當(dāng)加入渥曼青霉素抑制自噬的發(fā)生時，可見Pg與溶酶體蛋白cathepsin L發(fā)生大量共定位。這表明，HsGsa7p作為自噬小體的關(guān)鍵蛋白，同樣也是在細(xì)菌通過自噬途徑建立細(xì)菌生存所需的微環(huán)境這一過程中的重要因子。

4 Pg自噬途徑與胞內(nèi)定植、增殖

4.1 Pg通過自噬途徑在胞內(nèi)定植

在早期自噬小體成熟過程中，通過獲得一個溶酶體相關(guān)的膜蛋白LAMP-1(同樣也被稱作溶酶體糖蛋白-LGP120)和一個保留糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的V-ATP酶從而形成后期自噬小體。后期自噬小體通過與溶酶體結(jié)合形成成熟的自噬小體即自噬溶酶體，由其中的酸性水解酶對自噬小體中的內(nèi)容物進(jìn)行降解[17]。自噬溶酶體是單層膜結(jié)構(gòu)，包含著被降解的細(xì)胞器及細(xì)胞質(zhì)成分，其降解內(nèi)容物后所產(chǎn)生的多肽及氨基酸可重新回收利用合成新的蛋白。然而對于Pg而言，在其感染細(xì)胞后，會通過阻礙自噬小體與溶酶體結(jié)合形成自噬溶酶體這一過程來實(shí)現(xiàn)自噬逃逸，避免被降解。Pg在侵入細(xì)胞后在一個由單層膜包裹的液泡中實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)的定植及增殖，且該液泡周圍無后期自噬小體標(biāo)志蛋白LAMP-1和溶酶體標(biāo)志蛋白cathepsin D附著，表面僅有糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白附著，此時的單層膜液泡很可能是一個被細(xì)菌修飾后的自噬小體，無法再與溶酶體結(jié)合形成自噬溶酶體，發(fā)揮其降解作用[6]。此外根據(jù)嗜肺假單胞菌感染細(xì)胞后的免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示[55]，嗜肺假單胞菌周圍有大量后期自噬小體標(biāo)志蛋白LAMP-1和溶酶體標(biāo)志蛋白cathepsin D附著，也就意味著嗜肺假單胞菌侵入細(xì)胞進(jìn)入自噬途徑后，很可能是被轉(zhuǎn)運(yùn)至自噬溶酶體中，通過對自噬溶酶體進(jìn)行調(diào)節(jié)修飾，從而避免被宿主細(xì)胞降解實(shí)現(xiàn)自噬逃逸。因此外來細(xì)菌病原體侵入細(xì)胞后，不僅能在自噬小體中發(fā)生逃逸，還能在富集多種水解酶的自噬溶酶體中發(fā)生自噬逃逸，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)在胞內(nèi)定植。

4.2 Pg通過自噬途徑在胞內(nèi)增殖

細(xì)菌侵入細(xì)胞后轉(zhuǎn)入到自噬途徑，不僅逃避了直接被宿主細(xì)胞降解清除的命運(yùn)，實(shí)現(xiàn)自噬逃逸，同時在自噬小體中還能募集蛋白底物，為細(xì)菌在胞內(nèi)的增殖代謝等活動供給能量。尤其是對于Pg而言，其在胞內(nèi)定植需要大量多肽和氨基酸作為碳源，為其增殖代謝活動提供能量[10,12]。而細(xì)菌在胞內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)，對真核生物的正常生理功能也造成了影響。

基于含有Pg的自噬小體因無法與溶酶體融合而缺乏酸性水解酶發(fā)揮其降解作用這一現(xiàn)象，細(xì)菌在胞內(nèi)自噬過程中對蛋白底物的招募很可能是通過細(xì)菌自身的蛋白激酶來進(jìn)行。有研究報道，Pg在侵入人類冠狀動脈上皮細(xì)胞后，與未感染細(xì)菌的人類冠狀動脈上皮細(xì)胞相比，長壽內(nèi)源性蛋白酶的量明顯增加[56]。此外在含有Pg的后期自噬小體內(nèi)可觀察到大量分泌液泡富集，這是由于Pg的牙齦孢囊正在分泌并傳遞其蛋白酶至自噬小體中攝取胞內(nèi)蛋白為自己供能[57]，同時這也是一種細(xì)菌降解并攝取宿主細(xì)胞蛋白為自己在胞內(nèi)生存所必要的方式。這些蛋白酶大部分被包裹于后期自噬小體中，為宿主細(xì)胞供能并維持宿主細(xì)胞活力。對于Pg而言，可能是通過自身的蛋白酶降解并攝取宿主細(xì)胞中的蛋白作為碳源，為它們在胞內(nèi)的代謝活動提供能量。因此，侵入胞內(nèi)的Pg可能是通過在自噬小體中降解并攝取其中的細(xì)胞質(zhì)成分及受損細(xì)胞器成分中的多肽，從而為其在胞內(nèi)的代謝活動提供營養(yǎng)，供給能量。

5 結(jié)論與展望

細(xì)菌侵入細(xì)胞后，可以通過逃避宿主細(xì)胞的降解作用來實(shí)現(xiàn)胞內(nèi)定植，大部分的細(xì)菌都是被包裹于吞噬小體，通過阻礙吞噬小體向溶酶體轉(zhuǎn)運(yùn)這一過程來逃逸宿主細(xì)胞的降解。Pg在進(jìn)入細(xì)胞被吞噬小體包裹后，能夠向自噬小體轉(zhuǎn)運(yùn)而非溶酶體，進(jìn)入自噬途徑后，通過吞噬小體與自噬小體融合，促進(jìn)早期自噬小體的形成，將Pg連同細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白一起包裹于早期自噬小體中。隨著早期自噬小體上不斷富集大量溶酶體膜蛋白，便完成了由早期自噬小體向后期自噬小體進(jìn)化的過程。包裹著Pg的后期自噬小體可通過與溶酶體結(jié)合獲得其中的酸性水解酶，形成成熟的自噬小體，即自噬溶酶體，發(fā)揮對其內(nèi)容物的降解作用。而一旦自噬途徑受到PgⅨ型蛋白分泌系統(tǒng)的調(diào)控修飾作用，包裹著Pg的后期自噬小體便無法與溶酶體融合形成自噬溶酶體，反而在自噬小體內(nèi)形成了適宜Pg在胞內(nèi)定植生存的微環(huán)境，同時Pg可通過自身的蛋白激酶降解并攝取自噬小體中所包裹的細(xì)胞質(zhì)成分，為Pg在胞內(nèi)的定植生存提供能量。

若將待感染的細(xì)胞中加入阻礙自噬發(fā)生的藥物或抑制劑，再用Pg感染細(xì)胞可發(fā)現(xiàn)胞內(nèi)細(xì)菌活力明顯下降，此時的細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞后仍被包裹于吞噬小體中，但由于自噬途徑受到抑制，此時胞內(nèi)的細(xì)菌只能在吞噬小體的作用下被轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體中進(jìn)行降解，最終被宿主細(xì)胞清除。因此對于Pg而言，侵入細(xì)胞后，只有通過進(jìn)入自噬途徑在蛋白分泌系統(tǒng)的作用下對自噬小體進(jìn)行一系列調(diào)控修飾，才能避免被宿主細(xì)胞降解，實(shí)現(xiàn)自噬逃逸。這一機(jī)制為清除Pg提供了新思路：在Pg感染細(xì)胞后，使用藥物或抑制劑阻礙細(xì)胞自噬的發(fā)生，便能夠大大降低Pg的活力，阻礙其在胞內(nèi)定植生存。

目前仍有一些細(xì)菌在胞內(nèi)的定植生存機(jī)制尚未揭示，有些可能仍與自噬途徑有著密不可分的關(guān)系。在由細(xì)菌侵入細(xì)胞而引起的自噬逃逸中所涉及的蛋白及細(xì)胞器也仍需繼續(xù)探索和驗(yàn)證?？梢酝ㄟ^對病原菌在胞內(nèi)定植生存的機(jī)制及其相關(guān)蛋白等方面進(jìn)行研究，加深對病原菌發(fā)生自噬逃逸相關(guān)機(jī)制的理解，同時也為臨床相關(guān)治療提供新的方向和思路。