厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

呂玲玲 謝松 張凱媛 鄭嵐

摘要?目的：為建立厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備方法，并進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法：采用標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備標(biāo)準(zhǔn)湯劑，制備15批次不同產(chǎn)地的厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，以厚樸酚和和厚樸酚作為定量檢測(cè)指標(biāo)，并進(jìn)行轉(zhuǎn)移率、出膏率計(jì)算及指紋圖譜研究，并建立其分析方法。結(jié)果：15批次厚樸樣品制成的標(biāo)準(zhǔn)湯劑中，厚樸飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率在7.13%～12.60%之間，平均值為10.65%;厚樸酚的轉(zhuǎn)移率在2.75%～4.44%之間，平均值為3.47%;和厚樸酚的轉(zhuǎn)移率在6.09%～9.62%之間，平均值為7.25%。采用軟件《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》進(jìn)行厚樸樣品的特征圖譜進(jìn)行分析，對(duì)15批厚樸飲片及標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，其相似度均大于0.9。結(jié)論：本研究中的樣品處理方法簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好，可用于厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

關(guān)鍵詞?厚樸飲片;標(biāo)準(zhǔn)湯劑;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);制備工藝;厚樸酚

Abstract?Objective：To establish the preparation method of standard decoction of Houpo Decoction pieces and to study the quality standard.Methods：Standard decoction was prepared by standardized process，and 15 batches of standard decoction of Houpo Decoction pieces from different regions were prepared.Magnolol and honokiol were used as quantitative detection indicators，and the transfer rate，paste rate calculation and fingerprint spectrum research were carried out，and the analysis method was established.Results：Among the standard decoctions made from 15 batches of Cortex Magnoliae Officinalis samples，the paste rate of the standard decoction of Cortex Magnoliae Officinalis was 7.13%～12.60%，with an average of 10.65%; the transfer rate of magnolol was 2.75%～4.44%，the average was 3.47%; the transfer rate of Cortex Magnoliae Officinalis was between 6.09%～9.62%，and the average was 7.25%.The software “Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System” was used to analyze the characteristic maps of Cortex Magnoliae Officinalis samples，and 15 batches of Houpo Decoction pieces and standard decoctions were evaluated for similarity.The similarities were all greater than 0.9.Conclusion：The sample treatment method in this study is simple，feasible，which can be used for preparation and quality standard study of Cortex Magnoliae Officinalis standard decoction.

Keywords?Houpo Decoction pieces; Standard decoction; Quality standard;Preparation process;Magnolol

中圖分類號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.008

厚樸中藥材為木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的枝皮、干燥干皮及根皮，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效，在我國(guó)已經(jīng)有兩千多年的藥用歷史。本文重在開(kāi)展厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑的研究，以期建立合理的厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?超高效液相色譜儀（Waters公司，美國(guó)，型號(hào)：Waters Acquity）;精密天平（梅特勒-托利多公司，瑞士，型號(hào)：PB1501-N）;數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，型號(hào)：KQ-500DE）;冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，型號(hào)：FD-1A-50）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海予華儀器有限公司，型號(hào)：DLSB）;色譜柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）（Agilent公司，美國(guó)，型號(hào)：Poroshell 120 EC-C18）;實(shí)驗(yàn)室級(jí)超純水器（南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司，型號(hào)：EPED-E2-10TF）;色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）（美國(guó)Agilent公司，型號(hào)：Eclipse plus C18）。

1.2?試劑?甲醇（AR，上海泰坦科技有限公司，批號(hào)：P1689731），甲醇（色譜級(jí)，美國(guó)ACS，批號(hào)：MA1292G），厚樸酚的對(duì)照品（純度98.8%，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110729-201511），和厚樸酚的對(duì)照品（純度99.3%，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110730-201614）。

1.3?樣品?本研究采用厚樸飲片共15批，分別產(chǎn)自湖北、福建、湖南、重慶、四川5個(gè)省份，所購(gòu)15批厚樸飲片均為厚樸的干燥樹(shù)皮。見(jiàn)表1。

2?方法與結(jié)果

2.1?厚樸飲片的水分，灰分和酸不溶性灰分測(cè)定?按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015版）（以下簡(jiǎn)稱《藥典》）通則0832第四法來(lái)測(cè)定15批厚樸飲片中的水分：含水量為8.31%～12.59%，平均含水量為10.05%，結(jié)果表明15批厚樸飲片含水量均小于15%，符合規(guī)定[1-2]。見(jiàn)表2。按照《藥典》通則2302來(lái)測(cè)定15批厚樸飲片中的總灰分：總灰分為4.15%～6.90%，平均總灰分為5.37%，結(jié)果表明15批厚樸飲片總灰分均小于7%，符合規(guī)定。見(jiàn)表2。按照《藥典》通則2302來(lái)測(cè)定15批厚樸飲片中的酸不溶性灰分，得酸不溶性灰分為0.94%～2.15%，平均酸不溶性灰分為1.42%，結(jié)果表明15批樣品酸不溶性灰分均小于3%，符合規(guī)定。見(jiàn)表2。

2.2?厚樸飲片中厚樸酚和和厚樸酚的含量測(cè)定?根據(jù)《藥典》含量測(cè)定的方法，采用Eclipse plus C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μ m）[3]，測(cè)定15批厚樸飲片中厚樸酚和和厚樸酚的含量，其中厚樸酚的含量為1.40%～2.43%，平均值為1.85%;和厚樸酚含量為1.50%～3.99%，平均值為2.37%;二者總含量為3.02%～6.01%，平均值為4.23%。結(jié)果表明15批樣品厚樸酚和和厚樸酚總含量均大于2%符合規(guī)定。見(jiàn)表3。

2.3?厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備?取厚樸飲片120 g，加入10倍量的去離子水浸泡30 min后，加熱至微沸并保持30 min，趁熱過(guò)濾，再加入8倍量的去離子水，加熱并保持微沸20 min，趁熱過(guò)濾。合并2次濾液，50 ℃下減壓濃縮至300 mL左右后，預(yù)冷過(guò)夜，凍干既得厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末，并計(jì)算各批次厚樸飲片出膏率。平行2次[4]。

2.4?厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中厚樸酚和和厚樸酚的含量測(cè)定

2.4.1?色譜條件?按照《藥典》含量測(cè)定的色譜條件，色譜柱Eclipse plus C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇∶水=78∶22，柱溫為35 ℃，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm，進(jìn)樣量4 μL[5]。在此條件下，厚樸酚和和厚樸酚分離良好。見(jiàn)圖1。

2.4.2?供試品制備方法建立?由于厚樸酚和和厚樸酚極性較弱，冷卻過(guò)程會(huì)有所析出，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文采用《藥典》含量測(cè)定所用溶劑——純甲醇對(duì)標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末進(jìn)行復(fù)溶，以保證厚樸酚和和厚樸酚能夠完全溶解，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。精密稱定厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的粉末0.2 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸潰24 h，濾過(guò)，搖勻，即得。

2.4.3?對(duì)照品制備?分別適量取厚樸酚和和厚樸酚的對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含厚樸酚500 μg、和厚樸酚500 μg的溶液。

2.4.4?線性關(guān)系考察?取“2.4.3”中對(duì)照品溶液，用純甲醇分別稀釋成每1 mL含對(duì)照品500、250、250、100、50、25、10、1 μg的溶液，按照“2.4.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣，測(cè)定厚樸酚和和厚樸酚的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)為濃度，縱坐標(biāo)為峰面積。厚樸酚Y=9.423 6X+3.809 9（R2=0.999 0），線性范圍為1～500 μg/mL;和厚樸酚Y=9.670 9X+18.684 9（R2=0.999 3），線性范圍為1～500 μg/mL[6]。

2.4.5?精密度實(shí)驗(yàn)?取同一批厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末（HP-01），供試品溶液制備方法按“2.4.2”，色譜條件方法按“2.4.1”，連續(xù)進(jìn)樣6次。計(jì)算供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的峰面積，得到RSD分別為1.00%和1.12%，說(shuō)明精密度良好[6-8]。

2.4.6?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?采取步驟“2.4.5”方法，計(jì)算供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的峰面積，得到RSD分別為1.97%和1.23%，說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.7?穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?采取步驟“2.4.5”方法，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，計(jì)算供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的峰面積RSD分別為2.20%和1.52%，說(shuō)明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定[9-11]。

2.4.8?回收試驗(yàn)?取已知含量的厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的粉末（HP-01）0.1 g，按1∶1添加混合對(duì)照品（厚樸酚0.48 mg，和厚樸酚0.79 mg）制備供試品溶液，平行六次，色譜條件方法測(cè)定，得到供試品溶液中厚樸酚和和厚樸酚的加樣回收率平均分別為101.25%和98.16%，RSD分別為0.26%和0.43%，說(shuō)明該方法的準(zhǔn)確度較好。

2.4.9?樣品測(cè)定及轉(zhuǎn)移率計(jì)算?取各批次厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末，步驟方法同“2.4.5”，測(cè)定15個(gè)批次，每批次平行2份，外標(biāo)一點(diǎn)法得到厚樸酚和和厚樸酚含量。厚樸飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率在7.13%～12.60%之間，平均值為10.65%;厚樸酚的轉(zhuǎn)移率在2.75%～4.44%之間，平均值為3.47%;和厚樸酚的轉(zhuǎn)移率在6.09%～9.62%之間，平均值為7.25%。見(jiàn)表4。

2.5?指紋圖譜的建立

2.5.1?色譜條件建立?對(duì)不同流動(dòng)相、流速、柱溫和波長(zhǎng)進(jìn)行了考察，最終確定色譜條件如下：

Poroshell 120 EC-C18（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）色譜柱，流速0.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量：4 μL;流動(dòng)相為0.1%磷酸（A）-甲醇（B），梯度洗脫程序，B：0～20 min，14%～35%;20～25 min，35%～85%;25～32 min，85%。對(duì)照品和供試品譜圖如圖2[12-13]。

2.5.2?供試品制備方法建立?對(duì)標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末的提取溶劑（純水、20%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、純甲醇）進(jìn)行了考察，綜合考慮峰的數(shù)目及峰形，最終確定為50%甲醇。

精密稱定厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的粉末0.2 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸潰24 h，濾過(guò)，搖勻，即得。

2.5.3?精密度實(shí)驗(yàn)?取厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末（HP-10），按“2.5.2”制備供試品溶液，色譜條件方法按“2.5.1”，連續(xù)進(jìn)樣6次。以厚樸酚峰（8號(hào)峰）為參比，結(jié)果顯示各峰相對(duì)保留時(shí)間RSD<0.10%，相對(duì)峰面積RSD<1.78%，說(shuō)明該指紋圖譜方法的精密度良好。

2.5.4?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?取厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末（HP-10），按“2.5.2”制備供試品溶液，平行六次，按“2.5.1”下色譜條件方法進(jìn)樣。以厚樸酚峰（8號(hào)峰）為參照峰，結(jié)果顯示各峰相對(duì)保留時(shí)間RSD<0.70%，相對(duì)峰面積RSD<2.56%，說(shuō)明該指紋圖譜方法的重復(fù)性良好。

2.5.5?穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?取厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末（HP-10），按“2.5.2”制備供試品溶液，按“2.5.1”下色譜條件方法，分別在0，、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣。以厚樸酚峰為參照峰，計(jì)算各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD，結(jié)果表明各峰相對(duì)保留時(shí)間RSD<1.30%，相對(duì)峰面積RSD<3.01%，說(shuō)明該方法性質(zhì)穩(wěn)定。

2.5.6?樣品測(cè)定及分析?取各批次厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末，步驟方法同上，記錄色譜圖，導(dǎo)入2012版《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》軟件，設(shè)置時(shí)間窗口為0.1 min，以中位數(shù)的方式生成對(duì)照指紋圖譜。見(jiàn)圖3。相似度結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明，15批厚樸飲片來(lái)源于不同產(chǎn)地，其相似度有所差異，但相似度均大于0.9，說(shuō)明各批次的厚樸飲片相似度良好。

3?討論

中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，可謂對(duì)傳統(tǒng)煎煮的中藥湯劑的傳承和創(chuàng)新，其標(biāo)準(zhǔn)參照體系主要從3個(gè)參數(shù)進(jìn)行表征：出膏率、有效（或指標(biāo)）成分的含量測(cè)定及轉(zhuǎn)移率、指紋或特征圖譜等分析[14]。本試驗(yàn)以15批次厚樸飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑為研究對(duì)象，通過(guò)測(cè)定其指標(biāo)成分厚樸酚和和厚樸酚的含量、轉(zhuǎn)移率、及標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率，確定各參數(shù)的變化范圍，方法學(xué)考察均符合要求，表明本方法穩(wěn)定可行、重復(fù)性良好，為中藥配方顆粒質(zhì)量控制提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，更好的完成中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。

本試驗(yàn)建立了厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的含量測(cè)定方法及特征圖譜分析方法，能夠較全面地反映厚樸飲片的內(nèi)在質(zhì)量，可為厚樸配方顆粒的質(zhì)控和評(píng)價(jià)提供參考[15]。

中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的研究系統(tǒng)深入，逐步推廣應(yīng)用于臨床，可為中藥飲片制備標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究奠定基礎(chǔ)，并有效的提高中醫(yī)藥治療的臨床療效，具有重要意義。

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（2019-11-26收稿?責(zé)任編輯：王明）