基于Taqman微流控芯片技術(shù)高通量檢測(cè)17種轉(zhuǎn)基因玉米品系

徐君怡 曹際娟 鄭秋月 楊莉莉 王永 鄒明強(qiáng)

摘?要?將Taqman微流控芯片技術(shù)應(yīng)用于實(shí)時(shí)熒光PCR平臺(tái)的轉(zhuǎn)基因玉米17種品系高通量檢測(cè)。在一次PCR擴(kuò)增過(guò)程中，以2個(gè)玉米內(nèi)源基因 （hmgA基因、adh1基因）和1個(gè)上樣控制基因 （18S基因） 為內(nèi)參照，可同時(shí)完成17種轉(zhuǎn)基因玉米品系（TC1507、NK603、MON87640、MON863、MON810、MIR162、GA21、DAS40278、BT176、BT11、98140、59122、3272、MON89034、MIR604、MON88017、T25）的單孔單重?cái)U(kuò)增的并行檢測(cè)，檢出限可達(dá)10～20 copies。本方法特異性強(qiáng)，靈敏度高，與“金標(biāo)準(zhǔn)”單一的實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)結(jié)果完全吻合，具有可多樣品、多靶標(biāo)平行檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品多品系混雜鑒定檢測(cè)提供了高效、快速的方法。采用本方法，從16批進(jìn)境的實(shí)用玉米中檢出9批轉(zhuǎn)基因玉米樣品，且發(fā)現(xiàn)其中不同程度的混雜含有1～8種品系。本方法可用于口岸進(jìn)境實(shí)用農(nóng)產(chǎn)品中多品系混雜轉(zhuǎn)基因的高通量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞?Taqman微流控芯片; 轉(zhuǎn)基因玉米; 品系鑒定; 多品系平行檢測(cè)

1?引 言

玉米是世界上重要的糧食作物之一，其單位面積產(chǎn)量位居榜首[1]。近二十多年來(lái)，轉(zhuǎn)基因植物培育取得突破，推出了一批新品種[2～5]。截至2018年底，總計(jì)70個(gè)國(guó)家/地區(qū)批準(zhǔn)了可用于食物和飼料及釋放至環(huán)境中的轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)口，其中，玉米仍然是轉(zhuǎn)化體獲批數(shù)量最多的作物[6]。

轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)主要有蛋白質(zhì)檢測(cè)方法和核酸檢測(cè)方法。核酸檢測(cè)的目標(biāo)通常為插入的外源DNA片段（即鑒定是否為轉(zhuǎn)基因）或外源插入DNA同植物基因組之間的連接區(qū)序列（即轉(zhuǎn)基因品系鑒定）;蛋白檢測(cè)目標(biāo)通常為外源目標(biāo)基因表達(dá)的新蛋白。這兩種檢測(cè)方法因其較高的特異性和靈敏度，被用作轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的常用方法[7]。但是，基于蛋白檢測(cè)的方法有局限性，如目的蛋白穩(wěn)定性不及核酸，在一些加工處理的產(chǎn)品中，蛋白通常已變性，很難檢測(cè)到可能有的轉(zhuǎn)基因成分;此外，蛋白抗體的制備成本較高，制備過(guò)程復(fù)雜，不適用于目前全球貿(mào)易市場(chǎng)上出現(xiàn)的越來(lái)越多的轉(zhuǎn)基因作物品系及復(fù)合品系的篩查和檢測(cè)。

聚合酶鏈反應(yīng) （PCR） 是目前轉(zhuǎn)基因生物核酸檢測(cè)的主要方法，實(shí)時(shí)熒光定量PCR （qPCR） 已成為轉(zhuǎn)基因定性和定量檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)” [8，9]。轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)、鑒定和定量分析需采用復(fù)雜的多步驟程序。首先，初篩階段檢測(cè)樣品是否含有任何轉(zhuǎn)基因成分，即通過(guò)篩查檢測(cè)植物轉(zhuǎn)化體中廣泛使用的調(diào)控元件，如CaMV35S啟動(dòng)子、NOS終止子等[10];其次，當(dāng)篩查檢測(cè)到存在轉(zhuǎn)基因成分時(shí)，必須確定轉(zhuǎn)基因生物的品系，以便核查其生物安全證書狀態(tài)。此步驟使用的檢測(cè)方法是針對(duì)轉(zhuǎn)基因品系進(jìn)行特異性鑒定，即外源插入基因同植物基因組之間的連接區(qū)序列。對(duì)于未經(jīng)批準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因生物品系，則需按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理。不同國(guó)家對(duì)于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)閾值有不同的規(guī)定，但我國(guó)并沒(méi)有規(guī)定閾值限量，唯檢出或未檢出，未經(jīng)批準(zhǔn)商業(yè)化種植或未經(jīng)審批進(jìn)境的轉(zhuǎn)基因品系存在極大的生物安全性風(fēng)險(xiǎn)隱患，因此，開(kāi)展轉(zhuǎn)基因品系鑒定具有極其重要的現(xiàn)實(shí)意義。隨著食品和飼料產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)化事件數(shù)量的不斷增加，在一個(gè)PCR反應(yīng)中檢測(cè)多個(gè)轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)化事件將加快檢測(cè)速度并提高檢測(cè)效率[11～13]。然而，由于引物間的相互干擾和某些靶點(diǎn)的優(yōu)先擴(kuò)增，使得多重PCR的擴(kuò)增條件的優(yōu)化難度較大。實(shí)際上，多重qPCR并未被轉(zhuǎn)基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于常規(guī)檢測(cè)中。對(duì)于進(jìn)境玉米、大豆等實(shí)用農(nóng)產(chǎn)品業(yè)務(wù)量大的海關(guān)口岸檢測(cè)機(jī)構(gòu)， 實(shí)用農(nóng)產(chǎn)品中多種轉(zhuǎn)基因品系混雜的品系鑒定檢測(cè)是最普遍、最繁瑣的工作，因此，需要研發(fā)一種簡(jiǎn)單快捷、靈敏準(zhǔn)確的高通量品系鑒定檢測(cè)方法。

微流控芯片是由Manz等[14]在20世紀(jì)90年代首次提出并發(fā)展起來(lái)的跨學(xué)科分析技術(shù)。通過(guò)微加工技術(shù)，將常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的多個(gè)操作平臺(tái)集成在一張芯片完成，具有高度集成、樣品和試劑消耗量少、反應(yīng)速度快、可大量平行處理的優(yōu)點(diǎn)，在生物、化學(xué)和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域表現(xiàn)出巨大的發(fā)展?jié)摿15～19]。目前，微流控芯片技術(shù)已被廣泛用于細(xì)菌定量檢測(cè)[20]、基因擴(kuò)增與分析[21～23]和蛋白質(zhì)檢測(cè)[24]等領(lǐng)域。Kodani等[25]應(yīng)用微流控芯片在278個(gè)臨床樣品中同時(shí)檢測(cè)21種呼吸道病原體;Liu等[26]利用微流控芯片同時(shí)檢測(cè)19個(gè)腸道病原靶標(biāo);Rachwal等[27]利用微流控芯片同時(shí)檢測(cè)23種病原細(xì)菌;周杰等[21]利用微流控恒溫?cái)U(kuò)增碟式芯片在65℃恒溫條件下對(duì)轉(zhuǎn)基因樣品中的P-CaMV35S、T-NOS等10種篩選靶標(biāo)基因進(jìn)行同步檢測(cè)，檢出限可達(dá)到0.5% （m/m）， 實(shí)現(xiàn)一次上樣即可完成樣品的轉(zhuǎn)基因成分篩查。

Taqman微流控芯片是一種384孔板結(jié)構(gòu)的qPCR反應(yīng)板，芯片中包埋Taqman探針，可進(jìn)行qPCR反應(yīng)。本研究將Taqman微流控芯片技術(shù)應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因玉米品系鑒定的實(shí)時(shí)熒光PCR平臺(tái)進(jìn)行高通量檢測(cè)。在一次PCR擴(kuò)增過(guò)程中，2個(gè)玉米內(nèi)源基因 （hmgA基因、adh1基因）、1個(gè)上樣控制基因 （18S基因） 為內(nèi)參照，可同時(shí)鑒定17種轉(zhuǎn)基因玉米品系（TC1507、NK603、MON87640、MON863、MON810、MIR162、GA21、DAS40278、BT176、BT11、98140、59122、3272、MON89034、MIR604、MON88017、T25），實(shí)現(xiàn)了多品系平行檢測(cè)、擴(kuò)增檢測(cè)試劑體系的全封閉和微量化，減少了檢測(cè)成本，可為實(shí)用轉(zhuǎn)基因玉米混雜品系的快速鑒定檢測(cè)提供技術(shù)支持。

2?實(shí)驗(yàn)部分

2.1?儀器與試劑

ND-1000超微量分光光度計(jì)（美國(guó)Nanodrop公司）; 5910R高速冷凍離心機(jī) （德國(guó)Eppendorf公司）; SORVALL ST40 高速離心機(jī) （美國(guó)Thermo Scientific公司）;BLENDER 8011S型粉碎機(jī) （美國(guó)Waring公司）。

玉米基因組DNA大小為2292 Mb（106 堿基數(shù)），大豆的基因組大小為1115 Mb，油菜基因組大小為1100 Mb，馬鈴薯基因組大小為1597 Mb[29]。將提取的各標(biāo)準(zhǔn)品基因組DNA溶液測(cè)定濃度后，將濃度換算成DNA拷貝數(shù)，并用10 ng/μL非目標(biāo)DNA （λ DNA） 進(jìn)行10倍梯度稀釋，共稀釋5個(gè)梯度，梯度稀釋后的濃度分別為100、10、5、2.5和0.5 copies/μL。取濃度為100 copies/μL的基因組DNA模板，按照2.4節(jié)的條件進(jìn)行特異性實(shí)驗(yàn)。

2.6?Taqman微流控芯片的靈敏度測(cè)定

取2.5節(jié)稀釋獲得的10～0.5 copies/μL濃度梯度模板DNA進(jìn)行靈敏度實(shí)驗(yàn)。用于靈敏度實(shí)驗(yàn)的各濃度梯度樣品基因組DNA為2 μL，即每個(gè)Taqman微流控芯片反應(yīng)中各轉(zhuǎn)基因品系的拷貝數(shù)分別為20、10、5和1 copy/reaction。按照2.4節(jié)的條件進(jìn)行靈敏度實(shí)驗(yàn)。每個(gè)濃度進(jìn)行10次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。定義檢出限 （Limit of detection， LOD） 為未觀察到陰性結(jié)果的最低稀釋度水平 （即95%重復(fù)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的水平）。

2.7?Taqman微流控芯片的重復(fù)性評(píng)價(jià)

用于重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的各轉(zhuǎn)基因玉米品系模板DNA濃度為100 copies/μL，取各樣品基因組DNA 2 μL，即：200 copies/reaction，按照2.4節(jié)的條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。使用5塊Taqman微流控芯片反應(yīng)板進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試，每個(gè)濃度進(jìn)行10次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 （RSD），分析測(cè)試結(jié)果的精密度。各芯片反應(yīng)板間差異用p值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.8?實(shí)際樣品的檢測(cè)

以本實(shí)驗(yàn)室留存的從大連口岸進(jìn)境實(shí)用玉米貨物中抽取的16批玉米樣品為待檢對(duì)象，按照試劑盒的使用方法提取基因組核酸后，進(jìn)行Taqman微流控芯片和常規(guī)單一的qPCR檢測(cè)。

3?結(jié)果與討論

3.1?引物和探針設(shè)計(jì)

本研究所用引物和探針序列在SN/T 1196-2018[30]中轉(zhuǎn)基因玉米品系鑒定引物和探針序列基礎(chǔ)上，進(jìn)行多品系通用并行擴(kuò)增條件分析，重新調(diào)整設(shè)計(jì)引物和探針序列，詳見(jiàn)電子版文后支持信息表S1。在應(yīng)用Taqman微流控芯片技術(shù)進(jìn)行qPCR擴(kuò)增檢測(cè)時(shí)，不能將用于單一qPCR反應(yīng)的引物和探針直接結(jié)合到Taqman微流控芯片反應(yīng)板上，而應(yīng)調(diào)整引物的長(zhǎng)度、G+C量值等以適應(yīng)在卡板上的通用并行檢測(cè)條件。本研究結(jié)合Taqman微流控芯片的實(shí)際擴(kuò)增條件，重新設(shè)計(jì)了轉(zhuǎn)基因玉米17種品系鑒定的引物和探針序列。此外，在SN/T 1196-2018[30]中，轉(zhuǎn)基因玉米品系鑒定用探針通常為TAMRA淬滅熒光標(biāo)記的Taqman探針，適合于單一的qPCR反應(yīng)。MGB標(biāo)記的探針比TAMRA標(biāo)記的Taqman探針更短，通常為10～15 bp;MGB探針具有特異性更高的優(yōu)勢(shì)，可區(qū)分一個(gè)模板堿基的差異，模板只有一個(gè)堿基的差別探針不能與之雜交，可以更好地防止假陽(yáng)性結(jié)果;此外，淬滅基團(tuán)MGB本身不產(chǎn)生熒光，所有熒光背景低，靈敏度就高，可避免假陰性結(jié)果;相反，TAMRA本身會(huì)產(chǎn)生熒光，背景相對(duì)高，靈敏度略差，因而MGB探針更適合于微量化檢測(cè)的微流控芯片。本研究除MON88017品系、T25品系和adh1內(nèi)參照檢測(cè)探針設(shè)計(jì)為常用的TAMRA熒光標(biāo)記Taqman探針外，其余探針均設(shè)計(jì)為MGB淬滅熒光探針。

3.2?特異性評(píng)價(jià)

Taqman微流控芯片用于快速鑒定檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米17種品系，是基于空間上的qPCR反應(yīng)平臺(tái)，結(jié)果也應(yīng)符合qPCR方法的判定標(biāo)準(zhǔn)[30]。測(cè)試樣品外源基因檢測(cè)Ct≥40，內(nèi)源基因檢測(cè)Ct≤28，則可判定該樣品不含所檢品系;測(cè)試樣品外源基因檢測(cè)Ct≤36，內(nèi)源基因檢測(cè)Ct≤28，則可判定該樣品含有所檢品系;測(cè)試樣品外源基因檢測(cè)Ct=36～40，應(yīng)調(diào)整模板濃度，重做檢測(cè)。再次擴(kuò)增后外源基因檢測(cè)Ct=36～40，則可判定該樣品含有所檢品系。再次擴(kuò)增后外源基因檢測(cè)Ct≥40，則可判定該樣品不含所檢品系。

用建立的Taqman微流控芯片的方法分別對(duì)17種轉(zhuǎn)基因玉米品系的基因組DNA進(jìn)行交叉反應(yīng)擴(kuò)增檢測(cè)，僅對(duì)相對(duì)應(yīng)的品系產(chǎn)生熒光擴(kuò)增曲線，內(nèi)參照基因和空白對(duì)照均正常;其它品系及物種標(biāo)準(zhǔn)品均未出現(xiàn)擴(kuò)增，曲線經(jīng)歸一化處理后，對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增曲線處于基線水平。此結(jié)果表明，Taqman微流控芯片各個(gè)反應(yīng)孔之間相互獨(dú)立，無(wú)交叉污染，本方法可特異性地并行鑒定檢測(cè)17種轉(zhuǎn)基因玉米品系。此外，在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因玉米品系MON810 （Ct=29.12） 和T25 （Ct=36.27） 偶爾會(huì)有輕微的交叉反應(yīng)，MON87460 （Ct=28.35） 和59122 （Ct=36.81） 也會(huì)有偶爾輕微的交叉反應(yīng)。與MON810的擴(kuò)增Ct值比較， T25的Ct值延后7個(gè)循環(huán);與MON87460的擴(kuò)增Ct值比較，59122的Ct值延后8個(gè)循環(huán)。如果將陽(yáng)性結(jié)果Ct值限定在36個(gè)循環(huán)，則這兩個(gè)交叉反應(yīng)是可以忽略的。此結(jié)果也可能是由于玉米基因組相對(duì)較大，基因繁雜干擾、MGB探針高靈敏性能等原因所致。

3.3?靈敏度測(cè)定

為了確定Taqman微流控芯片的實(shí)時(shí)熒光PCR方法的靈敏度，將待測(cè)物模板梯度稀釋進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果表明，本方法最低可將10～20 copies/reaction的靶標(biāo)分子擴(kuò)增至可檢測(cè)程度;隨著濃度降低，擴(kuò)增曲線起峰時(shí)間逐漸延長(zhǎng);當(dāng)模板濃度太低時(shí)，單個(gè)拷貝數(shù)在此條件下無(wú)法完成擴(kuò)增反應(yīng)，因而并未出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，具體靈敏度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，在10次重復(fù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，17種轉(zhuǎn)基因玉米品系的LOD 均可達(dá)到20 copies/reaction，其中7種品系LOD 可達(dá)到10 copies/reaction。此靈敏度結(jié)果符合歐盟轉(zhuǎn)基因食品和飼料參考實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合研究中心 （Joint research centre of European Union reference laboratory for GM food and feed， EURL GMFF） 指導(dǎo)文件[31]所定義的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)方法最低性能要求，即LOD < 25 copies/reaction。

3.4?重復(fù)性分析結(jié)果

方法的重復(fù)性 （即穩(wěn)定性，RSD） 是影響Taqman微流體芯片檢測(cè)結(jié)果的重要指標(biāo)。在轉(zhuǎn)基因品系濃度為200 copies/reaction的條件下，本研究中轉(zhuǎn)基因玉米17個(gè)品系鑒定基因和3個(gè)內(nèi)參照在2個(gè)平行樣本之間的RSD值在0.01%～1.82%范圍內(nèi)，符合EURL GMFF指導(dǎo)文件[31]的要求（RSD≤25%）。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中， 5個(gè)微流體芯片反應(yīng)板間的差異采用p值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。轉(zhuǎn)基因玉米17個(gè)品系鑒定基因和3個(gè)內(nèi)參照在5個(gè)反應(yīng)板間的p值均大于0.05，表明本研究建立的Taqman微流控芯片方法差異性不顯著，重復(fù)性較好，方法穩(wěn)定。重復(fù)性分析結(jié)果見(jiàn)電子版文后支持信息表S2。

3.5?進(jìn)境實(shí)用玉米的品系檢測(cè)

為了驗(yàn)證Taqman微流控芯片方法的準(zhǔn)確性，采用本研究建立的檢測(cè)體系，對(duì)進(jìn)境的16批次實(shí)用玉米樣品進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)以采用“金標(biāo)準(zhǔn)”單一的qPCR方法的結(jié)果進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果如圖2所示。16批次實(shí)用玉米樣品中，9批次樣品檢出含有轉(zhuǎn)基因玉米成分，其中8批次樣品混雜有多種轉(zhuǎn)基因玉米品系。由圖2可見(jiàn)，#1玉米樣品僅含有1個(gè)外源重組品系T25;#5玉米樣品含有2個(gè)外源重組品系MIR604、MON88017;#11玉米樣品含有3個(gè)外源重組品系Bt11、GA21、MIR604;#10玉米樣品含有6個(gè)外源重組品系Bt11、NK603、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#12玉米樣品含有6個(gè)外源重組品系NK603、TC1507、59122、MON88017、MON89034、MON810;#14玉米樣品含有7個(gè)外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON810;#3玉米樣品含有8個(gè)外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#4玉米樣品含有8個(gè)外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#13玉米樣品含有8個(gè)外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810。Taqman微流控芯片方法的部分檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，Taqman微流控芯片方法的檢測(cè)結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光PCR方法結(jié)果完全一致，因此，建立的Taqman微流控芯片方法特異性良好，能夠滿足對(duì)口岸進(jìn)境實(shí)用玉米中轉(zhuǎn)基因玉米品系的高效并行快速檢測(cè)需求。Taqman微流控芯片方法與單一的qPCR方法相比，操作簡(jiǎn)單，僅需加入一次DNA模板的預(yù)混液即可完成多靶標(biāo)的檢測(cè)，極大地提高了檢測(cè)效率，降低了檢測(cè)試劑用量;與多重PCR擴(kuò)增相比，單孔單重?cái)U(kuò)增，可避免樣品間相互干擾，具有更高的檢測(cè)靈敏度。Taqman微流控芯片的不足之處是芯片制造成本較高，單孔的檢測(cè)成本約是普通實(shí)時(shí)熒光PCR的8倍。

在ISAAA已獲批準(zhǔn)的238個(gè)轉(zhuǎn)基因玉米品系名錄中[6]，有192個(gè)是多種重組性狀雜交的復(fù)合品系。目前，很多復(fù)合品系轉(zhuǎn)基因作物尚未獲得我國(guó)生物安全性審批許可。本研究在一份樣品進(jìn)境實(shí)用玉米樣品中同時(shí)檢出1～8種外源重組品系，這可能是多個(gè)單一品系混雜，也有可能是幾個(gè)復(fù)合品系混雜造成的。如#11玉米樣品可能是Bt11 × MIR604 × GA21復(fù)合品系，而# 3玉米樣品則可能是Bt11 × 59122 × MIR604 × TC1507、MON89034 × NK603、MON89034 × 59122、MON89034 × 59122 × MON88017、MON810 × MON88017、MON810 × NK603 × MIR604等多種復(fù)合品系的混雜，存在生物安全性風(fēng)險(xiǎn)。目前，還未見(jiàn)轉(zhuǎn)基因作物復(fù)合品系的鑒定方法，因而，未來(lái)可以利用Taqman微流控芯片技術(shù)的多靶標(biāo)同時(shí)并行檢測(cè)的特點(diǎn)，進(jìn)一步研究建立轉(zhuǎn)基因作物復(fù)合品系鑒定方法。

4?結(jié) 論

采用Taqman微流控芯片技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因玉米17種品系的高通量鑒定?；趒PCR平臺(tái)集成建立的Taqman微流控芯片檢測(cè)方法，可在一次PCR擴(kuò)增過(guò)程中，同時(shí)完成17種轉(zhuǎn)基因玉米外源重組品系的鑒定檢測(cè)，特異性強(qiáng)，靈敏度高，與qPCR檢測(cè)結(jié)果完全吻合，為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品多品系混雜鑒定檢測(cè)提供了高效快速、單孔單重?cái)U(kuò)增、多樣品多靶標(biāo)平行通量檢測(cè)的新方法。未來(lái)可設(shè)計(jì)出適應(yīng)于轉(zhuǎn)基因大豆、轉(zhuǎn)基因油菜等品系鑒定引物和探針，將其修飾固定于Taqman微流控芯片反應(yīng)板中，可用于口岸進(jìn)境實(shí)用農(nóng)產(chǎn)品中多品系混雜轉(zhuǎn)基因的高通量檢測(cè)。

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