非配套生化檢測系統(tǒng)酶類項目吸光度閾值與自動稀釋重測設定的臨床應用*

蔡永梅 劉 京 毛東英 王志偉*

在臨床生化檢驗中，當樣本中待測物濃度大于檢測系統(tǒng)線性范圍(analytical measurement range，AM R)時，需要稀釋重測(rerunon dilution)，尤其是在進行丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase，AST)、γ-谷氨酰基轉肽酶(γ-glutamyl transpeptidase，GGT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(alpha-hydroxybutyric dehydrogenase，HBDH)和肌酸激酶(creatine kinase，CK)等酶類項目檢測，當待測物濃度超過檢測系統(tǒng)線性區(qū)間時，出現(xiàn)底物耗盡導致結果不可靠[1]。使用配套生化系統(tǒng)時，制造商根據(jù)檢測系統(tǒng)的特點，在大量實驗數(shù)據(jù)的基礎上事先確定吸光度閾值和自動稀釋重測條件，實現(xiàn)超出線性范圍檢測結果的自動識別、篩選并通過稀釋重測(手動或自動)，獲得準確檢測結果[2]。使用第三方試劑組成非配套生化檢測系統(tǒng)時，往往忽視吸光度閾值和自動稀釋重測的設定，采用系統(tǒng)默認參數(shù)，存在潛在質量風險、影響檢驗工作效率。非配套生化檢測系統(tǒng)也應當根據(jù)所使用試劑特點正確設置吸光度閾值，自動識別并標記底物耗盡時的異常檢測結果，具備自動稀釋重測功能的全自動生化分析儀，還應正確設置稀釋倍數(shù)和稀釋重測條件，實現(xiàn)自動稀釋重測，避免異常高值結果漏檢和誤檢。本研究通過吸光度閾值和自動稀釋重測的設定和應用，保證酶類項目檢測結果的準確性，提高檢驗工作效率，實現(xiàn)對酶類反應過程的監(jiān)控，使非配套生化檢測系統(tǒng)具備媲美配套系統(tǒng)的檢測質量。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取2017年6-9月在寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院住院或門診患者，檢測其ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK7個項目結果接近試劑說明書提供線性高限(±10%)的樣本各10份；另選取超過線性上限的高值結果樣本各30份。

1.2 儀器與試劑

SIEMNES ADVIA 2400型全自動生化分析儀(德國西門子醫(yī)學診斷產(chǎn)品有限公司)，酶類項目檢測試劑、標準品(北京利德曼生化股份有限公司)。

1.3 檢測方法

利德曼酶類項目試劑檢測范圍分別為：ALT和AST各為0～600 U/L，ALP為25～750 U/L，GGT為10～500 U/L，CK為25～1000 U/L，LDH和HBDH各為25～750 U/L。將各項目大于線性上限結果按自動稀釋與手動稀釋方式分為兩組，并上機檢測。

1.3.1 吸光度閾值的獲取與設置

選取ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK接近說明書提供線性高限(±10%以內(nèi))各10份樣本上機檢測，讀取各項目起始讀點時主波長的吸光度并計算均值，將其設為北京利德曼試劑在ADVIA 2400型全自動生化分析儀吸光度閾值。ADVIA 2400設置樣品上升反應上限為“u”，下降反應下限為“d”。

1.3.2 吸光度閾值的驗證

將另選取并檢測的ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7個項目大于線性上限樣本各30份，確認所有超過線性的結果均被有效識別，驗證所設吸光度閾值的正確性。

1.3.3 自動稀釋重測設置

ADVIA 2400型全自動生化分析儀具有自動稀釋重測功能，根據(jù)實驗室驗證的不同項目最大稀釋倍數(shù)，進行自動稀釋重測倍數(shù)和自動稀釋重測條件的設置。分別用手工稀釋和自動稀釋的方式檢測ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH和CK的7個項目大于線性上限樣本各30份，進行兩種稀釋方式結果的比較。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS16.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，將兩種稀釋方式結果進行成對雙樣本均值分析的t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 吸光度閾值

正確設置北京利德曼生化試劑和ADVIA2400型全自動生化分析儀組成的非配套檢測系統(tǒng)酶類項目吸光度閾值參數(shù)后，儀器自動識別所有超線性上限的結果，上升反應結果并附帶警示標志“u”，下降反應結果并附帶警示標志“d”，提示檢測結果超過線性上線，可能存在底物耗盡而不可靠，需要稀釋重測。各檢測項目的吸光度閾值見表1。

表1 各檢測項目的吸光度閾值

2.2 自動稀釋與手工稀釋濃度比較

設置吸光度閾值可實現(xiàn)超高限酶類檢測結果自動識別，在此基礎上設置自動稀釋重測倍數(shù)和自動稀釋重測條件，可完成此類結果的自動識別、自動稀釋重測，重測過程不需要人為干預，進一步提高工作效率。所有項目P值均＞0.05，自動稀釋結果與手動稀釋結果無顯著性差異，一致性良好，可優(yōu)先選用自動稀釋方式重測酶類超高限異常結果。儀器自動稀釋與手工稀釋濃度見表2。

表2 儀器自動稀釋與手工稀釋濃度比較()

表2 儀器自動稀釋與手工稀釋濃度比較()

注：表中ALT為丙氨酸氨基轉移酶；AST為天門冬氨酸氨基轉移酶；GGT為γ-谷氨?；D肽酶；ALP為堿性磷酸酶；LDH為乳酸脫氫酶；HBDH為α-羥丁酸脫氫酶；CK為肌酸激酶

3 討論

國內(nèi)許多臨床實驗室選用由進口全自動生化分析儀和國產(chǎn)第三方試劑組成非配套(開放)生化檢測系統(tǒng)。第三方試劑應用于不同制造商多種型號儀器，其工程技術人員只能給用戶提供基本分析參數(shù)設置，僅滿足第三方試劑在各種分析儀上的基本使用要求，而不能針對每種分析儀的特征更進一步對相關參數(shù)進行優(yōu)化設置，一些高階參數(shù)均選用儀器默認值，不能對分析檢測過程進行有效監(jiān)控，這是目前非配套系統(tǒng)應用存在的普遍問題和主要缺陷[3]?；诖?，本研究開展非配套生化檢測系統(tǒng)酶類項目吸光度閾值與自動稀釋重測設定和臨床應用。

全自動生化分析儀速率法一般設定在固定循環(huán)點讀取吸光度，由于方法學及檢測系統(tǒng)的限制，當待測物酶活度高于檢測線性上限時，吸光度每分鐘的變化率急劇增大，底物迅速耗盡、反應提前結束進入平臺期，讀點區(qū)間內(nèi)反應曲線不成線性而“失真”，導致結果計算錯誤[4-5]。這種異常高值結果約占每日檢測數(shù)的千分之幾，在非配套系統(tǒng)應用中若無設置吸光度閾值參數(shù)，實驗室工作人員通過查閱歷史結果、查看儀器反應曲線以及儀器結果是否有異常標志[6-7]以及臨床診斷并結合工作經(jīng)驗等措施，進行超線性異常檢測結果的篩選與復查，工作效率低，容易漏檢，導致檢驗結果錯誤報告[8]。針對此現(xiàn)象，高小文等[9]報道，設置檢測項目的線性范圍上限值進行攔截或通過反應曲線斜率進行結果的糾正計算，但仍存在漏檢或誤差。依據(jù)酶類檢測項目的反應原理，進行吸光度閾值參數(shù)的優(yōu)化設置，通過設定上升反應(u)或下降反應(d)[10]進行超高限結果的識別，攔截效率高，可杜絕漏檢和誤檢。

ADVIA 2400全自動生化分析儀具有自動稀釋重測功能，根據(jù)ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH及CK檢測方法的反應類型，設置自動稀釋重測倍數(shù)和條件[12]。結合吸光度閾值的應用，實現(xiàn)超限結果自動識別、攔截，自動稀釋重測，提高了檢驗工作效率[13]。通過儀器自動稀釋與手動方式稀釋比較，證實兩者結果無顯著性差異，一致性良好，保證檢測結果的正確性[13-14]。

4 結論

通過吸光度閾值的設定和應用，有效攔截、標識超過線性上限酶類結果的同時，實現(xiàn)對非配套生化檢測系統(tǒng)酶類項目反應過程的監(jiān)控，結合自動稀釋重測，實現(xiàn)自動識別、自動稀釋重測。杜絕異常高值結果的漏報、誤報，保證檢測結果準確、可靠，提高檢驗質量；有效自動篩選出高于限值的檢測結果減少繁復、無必要的工作，降低工作人員勞動強度，縮短樣本TAT，提高檢驗工作效率，使非配套生化檢測系統(tǒng)具備媲美配套系統(tǒng)的檢測質量和檢測效率。