宮頸癌對(duì)陰道內(nèi)環(huán)境及常見菌群的影響

劉曉霞 何茵芳

宮頸癌對(duì)陰道內(nèi)環(huán)境及常見菌群的影響

劉曉霞 何茵芳

目的比較正常人群與宮頸癌人群陰道內(nèi)環(huán)境及常見菌群的差異性，為預(yù)防和診斷宮頸癌提供一種新型的標(biāo)志物或手段。方法采用病例對(duì)照研究方法進(jìn)行配對(duì)樣本量設(shè)計(jì)，選取經(jīng)過(guò)病理檢查確診的50名宮頸癌患者，按照年齡、文化程度、收入水平、婚姻及性生活情況進(jìn)行配對(duì)選取50名健康體檢者，共同采集陰道內(nèi)分泌物樣本，利用五聯(lián)檢試劑及非厭氧的菌群培養(yǎng)方式檢測(cè)陰道內(nèi)環(huán)境及陰道內(nèi)常見菌群，數(shù)據(jù)分析采用t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)。結(jié)果宮頸癌組的PH值為(4．8±0．03)，明顯高于對(duì)照組的(4．0±0．03)。乳酸桿菌、霉菌、滴蟲在宮頸癌患者中的檢出率分別為88%、74%和42%，與對(duì)照組比較都存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;但在革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌的對(duì)比上無(wú)明顯差異性。在宮頸癌患者和健康人群中都可檢出大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、表皮葡萄球菌、糞腸球菌和尿腸球菌，但宮頸癌患者中檢出的特殊類型的菌種有奇異變形桿菌、陰溝腸桿菌和易變微球菌等。宮頸癌患者革蘭氏陰性菌需氧菌群多樣性指數(shù)低于對(duì)照組，但革蘭氏陽(yáng)性菌需氧菌群多樣性卻高于對(duì)照組。結(jié)論宮頸癌患者陰道PH值較正常人群明顯升高，且不同微生物的檢出比例和菌群多樣性與正常人群存在明顯不同。

宮頸癌;陰道內(nèi)環(huán)境;菌群

(The Practical Journal of Cancer，2015，30:1135～1138)

子宮頸癌是常見的婦科腫瘤之一，發(fā)生發(fā)展是一個(gè)由量變到質(zhì)變、漸變到突變的反應(yīng)過(guò)程，這個(gè)過(guò)程存在很多年，是預(yù)防和篩查宮頸癌的絕好時(shí)機(jī)［1］。乳酸桿菌是陰道內(nèi)的主導(dǎo)菌種，現(xiàn)已有研究發(fā)現(xiàn)利用乳酸桿菌攜帶VLPs病毒顆粒進(jìn)行黏膜疫苗可治療宮頸癌［2］，提示陰道環(huán)境內(nèi)菌種的組成與特性很有可能會(huì)給宮頸癌患者帶來(lái)新的治療思路。

1 資料與方法

1．1 對(duì)象選取

取自2010至今來(lái)我院婦科確診的50例宮頸癌患者為實(shí)驗(yàn)組，并根據(jù)年齡、經(jīng)濟(jì)狀況、文化程度和婚姻

及性生活史采取配對(duì)條件，選取這段時(shí)間來(lái)我院進(jìn)行常規(guī)體檢的50名婦女作為對(duì)照組，具體情況見表1。

表1 2組人員基本配對(duì)資料

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 采集方法婦科醫(yī)生用女性專用無(wú)菌拭子在陰道后穹窿處及宮頸管內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)周后，停留數(shù)秒，采集分泌物置密閉無(wú)菌管內(nèi)送檢驗(yàn)科檢測(cè)，每個(gè)患者上采集得到2份相同含有分泌物的試管，分別標(biāo)號(hào)1、2號(hào)。

1．2．2 檢測(cè)方法五聯(lián)試劑由鄭州安圖生物公司提供，將樣本1號(hào)滴于潔凈試管內(nèi)，把所采集的分泌物拭子置入試管內(nèi)并將其中的水分?jǐn)D壓干凈，測(cè)定其PH值，后將其滴入專用反應(yīng)卡各孔中，按要求滴加試劑或放入37℃溫箱，判定結(jié)果;樣本2號(hào)接種于血平板等，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行操作，菌落生長(zhǎng)后經(jīng)初步分類，根據(jù)需要采取API鑒定條，培養(yǎng)48～72 h后不生長(zhǎng)判定為陰性。所用平板和鑒定條及微生物鑒定儀均為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用EPI data3．1進(jìn)行錄入及邏輯糾錯(cuò)，采用SPSS 18．0進(jìn)行數(shù)據(jù)t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)，取P＜0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 陰道內(nèi)環(huán)境及菌種情況

宮頸癌組的PH值為(4．8±0．03)，明顯高于對(duì)照組的(4．0±0．03)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。乳酸桿菌在宮頸癌患者中的檢出率為88%，低于對(duì)照組乳酸菌的檢出率(χ2=6．383，P＜0．05)，并且宮頸癌患者中霉菌和滴蟲的檢出比例分別為74%和42%，都高于對(duì)照組，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=33．980、9．722，P均＜0．05)，但在革蘭陽(yáng)性需氧菌和革蘭陰性需氧菌上分別占到72%和82%，與對(duì)照組未表現(xiàn)出差異性(χ2=0．421、1．974，P均＞0．05)。見表2。

2．2 菌種情況

2組人員的陰道分泌物經(jīng)過(guò)菌培養(yǎng)后，表現(xiàn)出了不同的菌種特點(diǎn)。宮頸癌患者革蘭陰性菌中檢出大腸埃希菌、奇異變形桿菌、陰道加德納菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌，而對(duì)照組革蘭陰性菌中檢出大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、嗜麥芽窄食單胞菌、普通變形桿菌、醋酸鈣不動(dòng)桿菌和摩根摩根菌，相比于各組的革蘭陰性菌，革蘭陽(yáng)性菌的種類較少，宮頸癌組患者主要為表皮葡萄球菌、糞腸球菌、尿腸球菌、易變微球菌和金黃色葡萄球菌，但對(duì)照組除了前三者共同以外，也存在一種特殊類型的細(xì)菌為紋帶棒狀菌。見表3。

表2 2組人員陰道內(nèi)環(huán)境及菌種比較(例，%)

表3 2組人員菌種分類

2．3 菌群多樣性情況

菌群多樣性的計(jì)算是運(yùn)用Shannon指數(shù)進(jìn)行計(jì)算，把每個(gè)菌種的檢出比例當(dāng)成菌種濃度，計(jì)算公式為H＇=-∑c*Inc，c指菌種濃度。按革蘭染色的不同分別進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果顯示宮頸癌患者革蘭陰性菌群多樣性指數(shù)為1．763，低于對(duì)照組的1．905;而革蘭陽(yáng)性菌群的多樣性系數(shù)為1．470，高于對(duì)照組的1．246。

3 討論

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種與宮頸癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的乳突病毒，近年來(lái)關(guān)于其基因分型檢測(cè)與宮頸癌的關(guān)系研究比較成熟［3］，但卻還沒有研究探討陰道內(nèi)菌群與宮頸癌的相關(guān)關(guān)系。人類是與其身體內(nèi)存在的復(fù)雜微生物群共同相互依存的生命體，并且人體內(nèi)有些部位的細(xì)菌種類，如腸道和口腔也表現(xiàn)出了其特殊的菌種，現(xiàn)已確定的是與人體密切相關(guān)的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)是人體本身細(xì)胞總數(shù)的10倍，細(xì)菌所代表的基因組信息是人類全基因組的1000倍，而且現(xiàn)如今的研究表明這些細(xì)菌與人類的健康以及部分疾病的發(fā)生密切相關(guān)［4］。

自1892年Doderlein從正常懷孕的女性陰道內(nèi)分離出乳酸桿菌后［5］，婦科醫(yī)生一直認(rèn)為陰道內(nèi)細(xì)菌的變化與某些有癥狀的女性分泌型疾病存在聯(lián)系，并且研究發(fā)現(xiàn)一種陰道加德納菌與非特異性的女性陰道炎存在明顯相關(guān)［6］，來(lái)自美國(guó)華盛頓研究小組的發(fā)現(xiàn)重新證實(shí)了這種非特異性陰道炎不僅與加德納菌的豐富度增加有關(guān)，而且與一系列厭氧菌和支原體的數(shù)量增高存在明顯關(guān)系，基于此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，研究者將伴有此種細(xì)菌改變的綜合征稱為“細(xì)菌性陰道炎”［7］，并根據(jù)不同的主導(dǎo)菌種進(jìn)行了劃分和標(biāo)準(zhǔn)的指定。正常情況下，乳酸桿菌占到陰道內(nèi)全部微生物的90%，它能分解陰道上皮糖原變成乳酸，控制陰道PH值在3．5～4．5，使條件致病菌難以繁殖。楊仙芳的研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后血性惡露的時(shí)間越長(zhǎng)，陰道PH值越高，更易遭受條件致病菌的繁殖和陰道疾病的發(fā)生［8］。本次研究中宮頸癌患者的陰道內(nèi)PH值要明顯高于正常人群，提示陰道內(nèi)PH值與女性健康情況存在聯(lián)系。其次，乳酸桿菌的數(shù)量使其能大量粘附于陰道上皮上，維持陰道的定植能力，阻止有害微生物的入侵;再者，乳酸桿菌可以產(chǎn)生過(guò)氧化氫，從而抑制部分細(xì)菌生長(zhǎng)［9］。所以一般情況下，陰道內(nèi)存在大量的乳酸桿菌經(jīng)常被認(rèn)為是健康的象征［10］，醫(yī)院就女性泌尿生殖道感染常用抗生素治療，但抗生素的過(guò)度使用會(huì)造成乳酸桿菌數(shù)量的下降，造成陰道內(nèi)天然屏障的破壞和耐藥性的增高［11］，所以，研究陰道內(nèi)微生物的情況，研發(fā)益生菌合劑來(lái)替代抗生素治療有望成為一種新型且有效的治療模式。

研究表明，陰道內(nèi)菌群可受到多種外界因素影響，如環(huán)境中暴露因素、菌種之間的競(jìng)爭(zhēng)作用或衛(wèi)生條件及個(gè)人健康狀況等［12］，并且PH值和細(xì)菌種類的變化會(huì)增加感染HPV的風(fēng)險(xiǎn)［13］，而HPV是已知的引發(fā)宮頸癌的重要危險(xiǎn)因素。本研究中宮頸癌患者的陰道內(nèi)菌群變化明顯，但未檢驗(yàn)患者感染HPV情況，故缺乏驗(yàn)證。一項(xiàng)動(dòng)物學(xué)研究結(jié)果顯示，乳酸桿菌活菌治療細(xì)菌性和真菌性混合感染陰道炎的療效明顯［14］，同樣一項(xiàng)關(guān)于宮頸癌患者陰道微生物分布情況的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，正常宮頸和慢性宮頸炎組中乳酸桿菌定植密度較高，各種病原體感染率較低，而在CIN或?qū)m頸癌組中乳酸桿菌定植密度較低且伴有各種病原體感染率較高，可見乳酸桿菌與其他病原體存在拮抗作用［15］。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組中乳酸桿菌檢出率下降，而霉菌、滴蟲的感染率升高，也部分支持了乳酸桿菌對(duì)陰道菌群的影響，其機(jī)制可能是因?yàn)槠洚a(chǎn)生乳酸維持陰道內(nèi)酸環(huán)境或產(chǎn)生其他抑制其余微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)引起。

此外，陰道菌群在預(yù)防婦科疾病，如細(xì)菌性陰道炎、真菌性陰道炎、性傳播疾病，甚至是艾滋病中也起到關(guān)鍵作用［16］。盡管多項(xiàng)研究已表明了陰道菌群的重要性，但其具體機(jī)制的研究尚在起步階段。陰道菌群的動(dòng)力學(xué)變化會(huì)隨著婦女月經(jīng)周期的改變而發(fā)生變化，而且在女性不同的生理時(shí)期，比如出生、懷孕或絕經(jīng)等不同時(shí)間段，陰道內(nèi)菌群也在動(dòng)態(tài)變化著，它與機(jī)體內(nèi)激素水平及健康狀態(tài)相互影響，并反映出結(jié)構(gòu)和功能的改變，研究其變化和功能將有助于我們深入了解什么才是真正的“健康”。

本文研究結(jié)果在支持了以上眾多觀點(diǎn)的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)了宮頸癌患者在需氧菌的多樣性系數(shù)上存在差異，并且檢驗(yàn)出了部分特殊菌種形態(tài)，比如陰道加德納菌、陰溝腸桿菌等，但宮頸癌患者卻只在革蘭陽(yáng)性需氧菌的多樣性上顯示增高，革蘭陰性多樣性的系數(shù)較健康人群有所降低，提示陰道內(nèi)菌種可能存在相互制約的現(xiàn)象，并且革蘭陽(yáng)性菌的種類的增多可能與其強(qiáng)侵襲型及細(xì)菌壁厚的高環(huán)境適應(yīng)性有關(guān)，但此次研究?jī)H限于實(shí)驗(yàn)室可培養(yǎng)的細(xì)菌種類，細(xì)菌之間的關(guān)系作用多變復(fù)雜，更何況有超過(guò)99%的細(xì)菌現(xiàn)如今無(wú)法得到體外培養(yǎng)，所以，利用基因分析技術(shù)，提高對(duì)菌群的檢出率將是今后研究人體內(nèi)部微生物群落組成及功能的重要方向。

綜上所述，宮頸癌患者陰道PH值較正常人群明顯升高，且不同微生物的檢出比例和菌群多樣性與正常人群存在明顯不同。

［1］李翠玲，李晶，張瑩，等．宮頸癌早期篩查3種方法的比較研究〔J〕．中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)，2013，21(11):151-152．

［2］Aires KA，Cianciarullo AM，Carneiro SM，et al．Production of human papillomavirus type 16 L1 virus-like particles by recombinant Lacto-bacillus casein cells〔J〕．Appl Environ Microbiol，2006，72(1):745-752．

［3］王建紅．526例女性人乳頭瘤病毒與陰道內(nèi)三種微生物感染狀況相關(guān)性分析〔J〕．中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)(中旬刊)，2013，23(7):667．

［4］Martin DH．The Microbiota of the vagina and its influence on women＇s health and disease〔J〕．Am J Med Sci，2012，343(1):2-9．

［5］Hillier S，Marrazzo J，Holmes KK，et al．Sexually transmitted diseases〔M〕．4th ed．New York:McGraw Hill Medical，2008:737-768．

［6］Gardner HL，Dukes CD．Haemophilus vaginalis vaginitis:a newly defined specific infection previously classified nonspecific vaginitis〔J〕．Amer J Obstet and Gyn，1955，69 (5):962-976．

［7］Spiegel CA，Amsel R，Eschenbach D，et al．Anaerobic bacteria in nonspecific vaginitis〔J〕．New Eng J Med，1980，303(11):601-607．

［8］楊仙芳．468例產(chǎn)褥期婦女陰道pH值檢測(cè)情況〔J〕．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，32(3):274．

［9］戴鐘英．陰道內(nèi)環(huán)境的形成、生活行為和習(xí)慣與陰道炎的關(guān)系〔J〕．中華全科醫(yī)師雜志，2006，5(12):718-719．

［10］Hickey RJ，Zhou X，Pierson JD，et al．Understanding vaginal microbiome complexity from an ecological perspective〔J〕．Transl Res，2012，160(4):267-282．

［11］Iannitti T，Palmieri B．Therapeutical use of probiotic formulations in clinical practice〔J〕．Clin Nutr，2010，29(6): 701-725．

［12］Bolton M，Van Der Straten A，Cohen C．Probiotics:potential to prevent HIV and sexually transmitted infections in women〔J〕．Sex Transm Dis，2008，35(3):214-225．

［13］于妍妍，金哲，劉艷霞，等．宮頸高危HPV感染與陰道內(nèi)環(huán)境相關(guān)因素分析〔J〕．疑難病雜志，2011，10(9): 673-675．

［14］李新宇，高紀(jì)偉，徐蘭芳，等．乳桿菌活菌對(duì)金葡菌、大腸埃希菌和白色假絲酵母菌實(shí)驗(yàn)性混合感染陰道炎的療效研究〔J〕．抗感染藥學(xué)，2011，8(3):183-187．

［15］逯彩虹，李保紅，李小斌，等．宮頸癌患者陰道微生物的分布特點(diǎn)〔J〕．中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，40(3):267-271．

［16］王小林，李胡斌，陳秀平，等．宮頸癌患者腔內(nèi)后裝放療后陰道分泌物的細(xì)菌學(xué)調(diào)查及藥敏分析〔J〕．現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2009，21(7):765-766．

The Effect of Cervical Cancer on Vaginal Environment and Common Flora

LIU Xiaoxia，HE Yinfang．The Affiliated Hospital of Shangluo Vocational＆Technical College，Shangluo，726000

ObjectiveTo compare the differences of vaginal environment and common flora between cervical cancer patients and healthy patients，and provide a new indicator or method in preventing and curing cervical cancer．MethodsA casecontrol study was conducted in all 50 cervical cancer patients and 50 paired healthy patients．The paired criteria were age，degree of education，income，marriage and sexual life．The vaginal environment and common flora were detected and analyzed by 5 inspection reagents and non-anaerobic bacteria culture．T test and χ2test were used to compare the differences between the 2 groups．ResultsPH value(4．8±0．03)in cervical cancer patients was higher than that(4．0±0．03)in healthy patients．The detection rate of lactic acid bacillus，mould and trichomonad were 88%，74%，42%respectively，which showed significant differences between the 2 groups．However，there were no differences in gram-positive aerobic bacteria and gram-negative aerobic bacteria between the 2 groups．The common floras in both groups were E．coli，klebsiella oxytoca，staphylococcus epidermidis，enterococcus faecalis and enterococcus faecium．But some unique types of bacteria were also found in cervical cancer patients，such as bacillus milabilis，enterobacter cloacae，micrococcus varians et al．The Shannon index of gram-negative bacteria in cervical cancer patients was lower than that of the control group，but showed higher values in Shannon index of gram-positive bacteria．ConclusionVaginal PH value in cervical cancer patients is much higher than the healthy patients．There has significant difference in vaginal environment and diversity of bacteria between cervical cancer patients and healthy patients．

Cervical cancer;Vaginal environment;Flora

10．3969/j．issn．1001-5930．2015．08．009

R737．33

A

1001-5930(2015)08-1135-04

2015-01-23

2015-05-28)

(編輯:甘艷)

726000陜西省商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院(劉曉霞); 726000陜西省商洛市中心醫(yī)院(何茵芳)