流式細(xì)胞儀篩選環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的技術(shù)方法分析

張 雯 趙 康 汪梅花

（延安大學(xué)附屬醫(yī)院 陜西延安 716000）

引言

微核實踐研究是臨床用于細(xì)致檢查被檢測物所含遺傳性毒物的專業(yè)性測驗形式，目前在臨床實踐病毒檢測中使用效果顯著，已得到較大范圍的使用。由于傳統(tǒng)人工方式在微核數(shù)值檢測的具體性檢測中工作量較大，找尋相對準(zhǔn)確的微核率較為困難，且存在一定程度上的干擾因素。流式細(xì)胞儀在實際使用中效率高、操作簡便等優(yōu)勢較為突出，且其實際檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確，因此常用于骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的數(shù)值檢驗之中。

一、資料與方法

（一）一般資料

本次實踐探究的主要研究對象包括符合研究條件的雄性SD 大鼠和雄性KM 小鼠各10 只，小鼠的實際體重在20 克左右，大鼠的實際體重在200 克左右，大鼠與小鼠的最大生存月齡為一個半月。抽調(diào)的所有實踐研究對象經(jīng)檢測全部符合相關(guān)研究標(biāo)準(zhǔn)，對參與實踐研究的對象進行標(biāo)識處理，同時進行科學(xué)化的小組分配，確保實踐研究效率的充分保障。

（二）研究方法

本次實踐研究中涉及的主要試劑包括：環(huán)磷酰胺、Sorensen’s 緩沖液、AO 水溶液、氯化鈉、戊二醛水溶液等。主要使用儀器包括：臨床流式細(xì)胞儀、離心機械、顯微鏡等。環(huán)磷酰胺藥物使用時需配合生理鹽水進行調(diào)和。對分配完成的各個實驗小組進行差異性的藥物劑量投入，明確注射體積，對實驗對象的腹部進行藥物注射，藥物注射完成24 小時后進行標(biāo)本樣本收集[1]，以此為基礎(chǔ)進行后續(xù)實踐研究。借助單一性質(zhì)的AO 與FCM 進行骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的數(shù)值檢測，與此同時，將流式細(xì)胞儀篩選出來的環(huán)磷酰胺用以處理SD大鼠和KM 小鼠，將二者體內(nèi)骨髓內(nèi)部含有的骨髓嗜多染紅細(xì)胞以及較為成熟的骨髓紅細(xì)胞的微核數(shù)量進行測定，計算出相應(yīng)微核率后及時進行對比分析。

（三）實驗觀察指標(biāo)

借助流式細(xì)胞儀對相關(guān)實驗提取物進行細(xì)胞數(shù)值分析，將流式細(xì)胞儀篩選出來的環(huán)磷酰胺用以處理SD 大鼠和KM 小鼠，將二者體內(nèi)骨髓內(nèi)部含有的骨髓嗜多染紅細(xì)胞以及較為成熟的骨髓紅細(xì)胞的微核數(shù)量進行測定。借助流式細(xì)胞儀進行相關(guān)監(jiān)測的同時，醫(yī)療技術(shù)人員同時借助顯微鏡完成鏡檢工作。

二、結(jié)果

實踐研究過程中當(dāng)環(huán)磷酰胺的實際含量升高時，SD 大鼠和KM小鼠骨髓中的骨髓嗜多染紅細(xì)胞以及較為成熟的骨髓紅細(xì)胞的實際數(shù)值逐漸增加，并且呈現(xiàn)出具有一定規(guī)律性的數(shù)量關(guān)系，采用多種計數(shù)方式進行實踐研究環(huán)節(jié)的數(shù)值評定，并未發(fā)現(xiàn)較大的數(shù)據(jù)研究差異（P＞0.05）。參與實踐調(diào)查研究的小鼠中檢測到多數(shù)的細(xì)胞群分布現(xiàn)象[2]，其中包括：骨髓嗜多染紅細(xì)胞、較為成熟的骨髓紅細(xì)胞、含微核的較為成熟的骨髓紅細(xì)胞等。通過觀察可有效區(qū)分微核細(xì)胞與未含微核細(xì)胞之間的區(qū)別。以此確定流式細(xì)胞儀對于此類微核細(xì)胞的區(qū)分存在一定程度上的主管性質(zhì)。與此同時，借助實踐研究發(fā)現(xiàn)不同使用劑量的環(huán)磷酰胺對于實驗對象的影響。實踐研究樣本經(jīng)AO 試劑染色后，待觀察的細(xì)胞狀態(tài)顯示為良好，骨髓嗜多染紅細(xì)胞與較為成熟的骨髓紅細(xì)胞相比二者在染色后存在顯著差異，其中骨髓嗜多染紅細(xì)胞可發(fā)出熒光，而較為成熟的骨髓紅細(xì)胞無此類現(xiàn)象。人工鏡檢檢測中發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)性的細(xì)胞相比，含有微核的紅細(xì)胞實際體積較大，借助WinMDI 軟件對細(xì)胞群體的占據(jù)比例進行檢測過程中，可發(fā)現(xiàn)當(dāng)CP 的實際含量增多且其濃度上升到一定程度后，隨機出現(xiàn)了細(xì)胞抑制性情況。

三、討論

AO 作為一種熒光性染料劑，因其對生物基因所具有的親和度，當(dāng)與單鏈核算或者雙鏈核酸進行有效結(jié)合后將產(chǎn)生差異性的熒光反應(yīng)。環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide）在進入生物體內(nèi)后將于生物肝臟內(nèi)部進行分子轉(zhuǎn)化，其在生物體外并無明顯的抗腫瘤活性功能，但在生物體內(nèi)將氧化酶轉(zhuǎn)化為醛磷酰胺后，存在一定程度上的不穩(wěn)定性，其在生物腫瘤細(xì)胞中還可進一步分解成丙烯醛、酰胺氮芥等。探究臨床流式細(xì)胞儀篩選環(huán)磷酰胺以此誘導(dǎo)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的有效技術(shù)形式的主要目標(biāo)為提升流式細(xì)胞儀器在臨床探究中的實際使用性能。臨床探究中生物的骨髓細(xì)胞與其他細(xì)胞相比極具特異性，有核細(xì)胞的實際數(shù)值將在一定程度上對MN 的檢測數(shù)值進行存在影響，本次實踐探究活動中借助借助單一性質(zhì)的AO 與FCM 進行骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的數(shù)值檢測，可在保存檢測樣本完整性的同時進行數(shù)值測定，有效對微核及不微核的紅細(xì)胞進行測定，檢測大鼠骨髓中的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量，將醫(yī)療器械檢測結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果相對比，其統(tǒng)計學(xué)上的數(shù)值差異不大。

綜上所述，臨床流式細(xì)胞儀在臨床應(yīng)用中具有一定程度上的實用價值[3]，可用以篩選環(huán)磷酰胺以此誘導(dǎo)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的具體數(shù)值檢測，并值得在醫(yī)療服務(wù)研究領(lǐng)域進行更深一步的拓展。