銀屑病小鼠抑郁樣行為學(xué)檢測與分析

何 磊，陳麗莉，陳 軍，陸海濤，王 皓，郭 建，吳景良，秦樹存，李保強(qiáng)，段昕所

銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，可累及心血管等多個(gè)系統(tǒng)[1]。銀屑病嚴(yán)重影響著患者的身心健康，甚至可以出現(xiàn)抑郁等精神癥狀[2]，增加了社會(huì)和家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。最新的研究表明10%以上的銀屑病患者患有臨床抑郁癥[3]，其較正常人群更容易出現(xiàn)抑郁癥狀[4]。雖然銀屑病與心肌梗死、腦卒中和心血管死亡有關(guān)，但是患銀屑病抑郁的患者患這些疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高[5]。因此，本研究擬使用體重變化率、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)評(píng)估銀屑病小鼠模型抑郁行為學(xué)改變，從而探討銀屑病對(duì)心理健康的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF 級(jí)雄性 C57BL /6J 小鼠20 只，10 月齡，體重18 ～25 g [北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（京）2016-0006]。實(shí)驗(yàn)期間喂養(yǎng)于泰山醫(yī)學(xué)院動(dòng)脈粥樣硬化研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房：12 h 晝夜交替，室溫（24±2）℃，空氣濕度50%±10%，除造模及必要的斷水?dāng)嗍惩?，小鼠均可自由進(jìn)水進(jìn)食。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物先適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。本實(shí)驗(yàn)遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3R 原則。

1.1.2 主要試劑與儀器 5%咪喹莫特（四川明欣藥業(yè)有限公司），凡士林（河北蘭煉飛天石化有限公司），小鼠水迷宮實(shí)時(shí)測試系統(tǒng)（TopScan 美國CSI）。

1.2 方法

1.2.1 銀屑病小鼠模型制備 參考 van der Fits 等[6]銀屑病樣動(dòng)物模型制備方法。將小鼠通過腹腔注射4%水合氯醛（0.1 ml /kg）進(jìn)行麻醉，并將其背部約 2 cm × 2 cm 毛發(fā)剃除。 C57BL/6J 小鼠20 只按體重分成2 組：正常對(duì)照組10 只， 外用凡士林；銀屑病模型組 10 只，背部脫毛后給予5%咪喹莫特62.5 mg每日1 次外涂，為期1 周。

1.2.2 體重變化率 于造模前及造模后第7天上午9:00 測量小鼠體重，計(jì)算體重變化率，體重變化率（%）＝（造模后測量體重－造模前體重）÷造模前體重×100%。

1.2.3 糖水偏好實(shí)驗(yàn)[7]實(shí)驗(yàn)前禁水 24 h，進(jìn)行基礎(chǔ)糖水/純水消耗試驗(yàn)，給予每只小鼠 1 瓶純水及 1 瓶1% 蔗糖水，12 h 后調(diào)換一次糖水和自來水的位置，24 h 后進(jìn)行稱重，計(jì)錄小鼠總液體消耗量、糖水消耗量。糖水偏愛率＝糖水消耗量÷總液體消耗量×100%。

1.2.4 懸尾實(shí)驗(yàn)[8]將小鼠尾部( 距尾尖約 1.5 cm)用醫(yī)用膠布固定在水平木板上， 小鼠頭部距離實(shí)驗(yàn)臺(tái)10 cm 左右，小鼠保持倒懸狀態(tài) 2 min 后， 連續(xù)觀察 4 min 內(nèi)實(shí)驗(yàn)小鼠倒懸活動(dòng)狀態(tài)， 記錄小鼠身體下垂、完全不動(dòng)的總時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用 SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均選用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察體重變化率顯示，銀屑病模型組小鼠體重明顯下降，而正常對(duì)照組小鼠體重升高（P＜0.001）（圖1），提示銀屑病小鼠存在抑郁樣表現(xiàn)。

圖1 銀屑病對(duì)小鼠體重的影響

圖2 銀屑病對(duì)小鼠糖水偏好實(shí)驗(yàn)及懸尾實(shí)驗(yàn)的影響

糖水實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，銀屑病模型組小鼠總進(jìn)水量減少，糖水飲水量減少，消耗率明顯下降（P＜0.001）（圖2A-2C），提示銀屑病小鼠存在抑郁樣表現(xiàn)。

懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，銀屑病模型組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間延長（P＜0.05）（圖2D），提示銀屑病小鼠存在抑郁樣表現(xiàn)。

3 討論

銀屑病與心理疾病密切相關(guān)[9]。國內(nèi)外研究表明，銀屑病患者具有較高的抑郁患病率，我國的發(fā)病率高達(dá)13.9%[10]，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[11]?？旄腥狈?、自主行為學(xué)和體重變化都是臨床中評(píng)定診斷抑郁癥的漢密爾頓抑郁量表中的觀察項(xiàng)目[12]?？旄腥笔侵阁w驗(yàn)快樂的能力下降，是抑郁癥的核心癥狀，也是重要的診斷指標(biāo)之一。體重變化率是評(píng)價(jià)小鼠抑郁癥模型常用的指標(biāo)，由于快感缺失等原因，導(dǎo)致抑郁小鼠進(jìn)食量減少，從而出現(xiàn)體重下降。糖水偏好實(shí)驗(yàn)，是抑郁癥模型行為學(xué)評(píng)價(jià)的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)的原理是通過抑郁患者所表現(xiàn)出的快感缺失。糖水消耗實(shí)驗(yàn)通過比較一定時(shí)間內(nèi)小鼠飲用糖水量的改變，反應(yīng)快感缺失的程度。抑郁小鼠快感缺失的程度增加，則對(duì)糖水的興趣降低，從而導(dǎo)致糖水消耗率降低。本研究采用糖水偏好實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)評(píng)價(jià)銀屑病對(duì)小鼠行為學(xué)的影響。這兩種經(jīng)典的方法被廣泛應(yīng)用于小鼠抑郁行為的評(píng)價(jià)，包括抑郁行為機(jī)制的研究，如小清蛋白神經(jīng)元對(duì)抑郁樣行為的調(diào)控[13]；不同疾病對(duì)抑郁行為的影響，如分析黃褐斑小鼠模型在肝郁證的行為學(xué)變化[14]，先天性白內(nèi)障對(duì)小鼠行為學(xué)影響[15]；抗抑郁藥物的篩選，如沃頓膠改善小鼠腦損傷后的抑郁情緒[16]。本研究表明，銀屑病模型組體重明顯下降，銀屑病模型組小鼠糖水消耗明顯減少，懸尾實(shí)驗(yàn)中銀屑病模型組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間延長，表明銀屑病小鼠存在抑郁癥狀，也從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的角度再次證實(shí)了銀屑病對(duì)心理健康的影響。綜上所述，銀屑病小鼠存在抑郁樣行為表現(xiàn)，提示臨床上需進(jìn)一步觀察銀屑病患者心理狀態(tài)，同時(shí)為進(jìn)一步探討銀屑病伴隨心理疾病的研究提供新的理論依據(jù)。