黃精地上部位化學成分及其胰脂肪酶抑制活性研究

王亞鳳，張祖湘，何瑞杰，陽丙媛，王 磊，黃永林

廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所 廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室，桂林 541006

黃精是百合科多年生草本植物，我國廣大地區(qū)均有分布，目前已發(fā)現(xiàn)該屬植物40余種，我國約有31種，種質(zhì)資源豐富[1]。黃精為我國傳統(tǒng)補益類中藥，藥理活性廣泛，具有降血糖、降血脂、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等作用[2]，具有很好的開發(fā)與應用價值。黃精屬植物的主要化學成分有糖類、皂苷、黃酮類、生物堿、木脂素等[3]。黃精多糖是中藥黃精的主要藥理活性成分，現(xiàn)代臨床常用于治療糖尿病、動脈硬化等疾病，中藥黃精的另一類主要藥理活性物質(zhì)是甾體皂苷，可改善慢性應激所致的抑郁癥[4,5]。黃精化學成分多樣，藥理活性廣泛[6,7]，但是作為多年生草本植物，關于黃精的地上部位化學成分的研究較少，地上部位并未得到有效利用。作為植株重要組成的地上部位的化學成分具有很好的研究價值，同時作為廣西具有較大開發(fā)潛能的藥用植物資源，全面系統(tǒng)地推進黃精的物質(zhì)基礎研究，將為黃精的綜合開發(fā)利用提供科學依據(jù)和方法指導，具有十分重要的理論意義和經(jīng)濟價值。胰脂肪酶是人體內(nèi)脂肪水解過程中的重要酶，抑制胰脂肪酶的活性可以降低人體內(nèi)對脂肪的吸收和水解，進而達到減重的作用[19,20]。已發(fā)現(xiàn)多種天然化合物具有胰脂肪酶抑制活性，例如，黃酮類，酚酸類等，但是目前關于黃精中碳苷黃酮類化合物胰脂肪酶的抑制活性還未見報道[19,20]。本研究對黃精地上部位80%乙醇提取物中分離鑒定的多個化合物，進行了豬胰脂肪酶抑制劑活性篩選，以期找到有較好胰脂肪酶抑制活性的單體化合物。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Brucker Avance 500 MHz超導核磁共振波譜儀(瑞典Bruck公司)；LCMS-IT-TOF (日本Shimadzu公司)；N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京理化公司)；CF810C冷卻水循環(huán)(日本Yamato公司)；半制備液相色譜儀(北京賽譜銳思)；WFH-203紫外分析儀(上海精科實業(yè)有限公司)；酶標儀(瑞士TECAN)；GF254 薄層色譜硅膠(德國Merck公司)；Sephadex LH-20(25～100 μm;GE Healthcare Bio-Science AB,Uppsala,Sweden)；Toyopearl HW-40F(TOSOH Co.,Tokyo,Japan)；MCI gel CHP 20P(75～150 μm;Mitsubishi Chemical,Tokyo,Japan)；Diaion HP20ss 75-150 μm;Mitsubishi Chemical,Tokyo,Japan)；Toyopearl Butyl-650C(TOSOH Co.,Tokyo,Japan)。奧利司他(美國MCE)；4-甲基傘形酮油酸酯(美國Sigma)；豬胰脂肪酶(美國Sigma)；磷酸鹽緩沖鹽水(北京Solarbio)；實驗所用試劑甲醇、乙醇等均為分析純(AR)。

樣品于2018年9月采集于廣西桂林，經(jīng)唐輝研究員鑒定為百合科黃精屬植物黃精(Polygonatumsibiricum)，憑證樣品存放于廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取分離

黃精新鮮葉子1.91 kg，陰干，切碎后用70%乙醇在室溫下浸泡提取2次，每次7天，過濾，合并濾液并減壓濃縮回收乙醇，得到水溶液，水溶液經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析(9.5 cm × 50 cm，25～100 μm)，甲醇-水(0%→100% MeOH，20%為一個梯度，每一梯度2 L及60%的丙酮2 L)進行梯度洗脫，得到8個部分(Fr.1～8)。其中Fr.5(15.8 g)經(jīng)HP20ss柱層析(0%→100% MeOH，10%為一個梯度)得到10個流份(Fr5.1～10)；Fr51(1.35 g)經(jīng)Sephadex LH-20，HP 20ss，Toyopearl Butyl-650C(0%→100% MeOH，10%為一個梯度)進行梯度洗脫得到化合物4(118 mg)、化合物5(70 mg)、化合物6(58 mg)和化合物10(19 mg)。Fr.55(1.52 g)經(jīng)Sephadex LH-20，Toyopearl Butyl-650C柱層析(0→100% MeOH，10%為一個梯度)進行梯度洗脫，ODS C18柱層析等度洗脫(30% MeOH)得到化合物1(21 mg)、3(13 mg)、9(11 mg)。Fr.1(45.0 g)經(jīng)HP20ss柱層析(4 cm × 40 cm，75～150 μm)甲醇-水(0%→100% MeOH，10%為一個梯度，每一梯度0.5 L)進行梯度洗脫，過濾掉黃精多糖，再經(jīng)Sephadex LH-20，MCI gel CHP 20P得到化合物2(42 mg)、9(0.72 g)和11(42 mg)。Fr.2經(jīng)HP20ss，Sephadex LH-20(0%→100% MeOH，10%為一個梯度)進行梯度洗脫得到化合物7(18 mg)。Fr.3經(jīng)HP20ss(0%→100% MeOH,10%為一個梯度)進行梯度洗脫得到化合物8(0.98 g)。Fr.6(7.02 g)經(jīng)HP20ss、Toyopearl HW-40F、ODS C18(0%→100% MeOH，10%為一個梯度)進行梯度洗脫得到化合物13(15 mg)。Fr.7(6.34 g)經(jīng)MCI gel CHP 20P、ODS C18(0%→100% MeOH，10%為一個梯度)進行梯度洗脫得到化合物12(13 mg)、14(9 mg)。

1.2.2 抑酶活性篩選

采用豬胰脂肪酶抑制劑活性篩選模型對化合物2、3、6、7、8、10、11、13進行活性測試，實驗方法參照相關文獻[19,20]，以奧利司他(orlistat)為陽性對照，以4-甲級傘形酮油酸酯(4-MUO)為底物。將胰脂肪酶溶解于PBS緩沖液配置成1 mg/mL的溶液，離心取上清液備用。準確稱取1 mmol 4-MUO溶解于10 mL PBS緩沖液配置成0.1 mmol/mL溶液備用。準確稱取10 mmol樣品溶解于PBS緩沖液并定容至1 mL備用。取25 μL不同濃度的樣品與25 μL胰脂肪酶溶液孵育五 min后再加入50 μL 4-MUO底物，反應20 min后加入100μL 0.1 mol/mL檸檬酸鈉溶液終止反應，在320 nm激發(fā)波長和450 nm發(fā)射波長下測量吸光度，抑制率的計算公式為：胰脂肪酶抑制率=[1-(A樣品-A樣品對照)/(A空白-A空白對照)]×100%，式中，A樣品為加入樣品和活性酶反應后的吸光值；A樣品對照為加入樣品和失活酶反應后的吸光值；A空白為加入活性酶和PBS反應后的吸光值；A空白對照為加入失活酶和PBS反應后的吸光值，所有反應組中均有4-MUO。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色無晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z193.048 5 [M-H]-，相對分子質(zhì)量為194.057 9，分子式為C10H10O4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.61(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)， 7.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.08(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-6)，6.83(1H，dd，J=8.4，2.9 Hz，H-5)，6.33(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，3.91(3H，s，H-OCH3);13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：169.6(C-9)，149.1(C-4)，148.0(C-7)，145.5(C-3)，126.4(C-1)，122.6(C-6)，115.1(C-5)，114.6(C-8)，110.4(C-2)，55.1(C-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[8]報道的一致，故鑒定化合物1為咖啡酸甲酯。

化合物2白色無晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z353.088 8 [M-H]-，相對分子質(zhì)量為354.095 1，分子式為C16H18O9。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.42(1H，d，J=15.9 Hz，H-7′)，7.05(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，6.98(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-6′)，6.77(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.17(1H，d，J=15.9 Hz，H-8′)，5.08(1H，td，J=7.1，4.1 Hz，H-3)，3.93(1H，dt，J=7.1，3.4 Hz，H-5)，3.57(1H，dt，J=7.5，3.7 Hz，H-4)，2.06～1.78(4H，m，H-2，6);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：175.5(C-7)，166.3(C-9′)，148.7(C-4′)，146.0(C-7′)，145.4(C-3′)，126.1(C-1′)，121.9(C-6′)，116.2(C-5′)，115.1(C-8′)，114.8(C-2′)，74.1(C-1)，71.3(C-4)，71.0(C-5)，68.8(C-3)，37.7(C-6)，36.9(C-2)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[9]報道的一致，故鑒定化合物2為綠原酸。

化合物3黃色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z433.103 8 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為432.105 6，分子式為C21H20O10。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.68(2H，d，J=7.9 Hz，H-2′，6′)，6.86(2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′)，6.43(1H，d，J=5.0 Hz，H-3)，6.38(1H，d，J=4.2 Hz，H-8)，4.90(1H，d，J=9.9 Hz，H-1″)，4.25(1H，t，J=9.0 Hz，H-4″)，3.94 (1H，dd，J=12.4，2.2 Hz，H-6″a)，3.80(1H，dd，J=12.2，5.4 Hz，H-6″b)，3.54(2H，dt，J=9.0，4.7 Hz，H-3″，5″)，3.48(1H，dp，J=7.7，2.4 Hz，H-2″);13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：182.5(C-4)，164.6(C-2)，163.4(C-7)，161.1(C-5)，157.2(C-9)，157.1(C-4′)，128.0(C-2′，6′)，121.6(C-1′)，115.7(C-3′，5′)，107.6(C-6)，103.7(C-10)，102.3(C-3)，94.1(C-8)，81.1(C-5″)，78.7(C-1″)，73.8(C-2″)，71.2(C-3″)，70.3(C-4″)，61.4(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[10]報道的一致，故鑒定化合物3為異牡荊素。

化合物4黃色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z449.094 2 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為448.100 5，分子式為C21H20O11。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.42(1H，dd，J=8.3，2.3 Hz，H-6′)，7.40(1H，d，J=2.3 Hz，H-2′)，6.90(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.68(1H，s，H-3)，6.50(1H，s，H-8)，4.60(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，4.06(1H，t，J=9.2 Hz，H-4″)，3.73～3.68(2H，m，H-3″，6″a)，3.42(1H，dd，J=11.9，6.1 Hz，H-6″b)，3.24～3.11(2H，m，H-2″，5″);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.3(C-4)，164.2(C-2)，163.8(C-7)，161.1(C-5)，156.7(C-9)，150.2(C-4′)，146.2(C-3′)，121.9(C-1′)，119.4(C-6′)，116.5(C-5′)，113.7(C-2′)，109.3(C-6)，103.9(C-10)，103.3(C-3)，94.0(C-8)，82.0(C-5″)，79.4(C-1″)，73.5(C-2″)，71.0(C-3″)，70.7(C-4″)，61.9(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[11]報道的一致，故鑒定化合物4為異葒草素。

化合物5黃色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z449.042 5 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為448.100 6，分子式為C21H20O11。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.55(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H-6′)，7.49(1H，s，H-2′)，6.89(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.67(1H，s，H-3)，6.29(1H，s，H-6)，4.70(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，3.88～3.78(2H，m，H-5″，6″a)，3.57(1H，dd，J=12.0，6.4 Hz，H-6″b)，3.40(1H，t，J=9.2 Hz，H-4″)，3.28(2H，t，J=8.8 Hz，H-3″，2″);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.5(C-4)，164.6(C-2)，163.1(C-7)，160.9(C-5)，156.5(C-9)，150.1(C-4′)，146.3(C-3′)，122.5(C-1′)，119.9(C-6′)，116.2(C-5′)，114.5(C-2′)，105.0(C-10)，104.5(C-8)，102.9(C-3)，98.6(C-6)，82.4(C-5″)，79.2(C-1″)，73.9(C-2″)，71.3(C-3″)，71.2(C-4″)，62.1(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[12]報道的一致，故鑒定化合物5為葒草素。

化合物6黃色無晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z581.172 2 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為580.142 8，分子式為C26H28O15。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.59(2H，d，J=7.6 Hz，H-2′，6′)，7.15(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.78(1H，s，H-3)，6.74(1H，s，H-6)，4.90(2H，m，H-1″，1?)，4.15(1H,dd，J=12.4，2.2 Hz，H-6″a)，4.01(1H，dd，J=12.5，5.5 Hz，H-6″b)，3.97～3.02(9H，m，糖上質(zhì)子);13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：182.6(C-4)，164.8(C-2)，163.6(C-7)，160.5(C-5)，157.4(C-9)，149.5(C-4′)，145.4(C-3′)，122.1(C-1′)，119.2(C-6′)，115.6(C-5′)，112.9(C-2′)，107.8(C-6)，105.3(C-1?)，103.7(C-10)，102.5(C-3)，93.6(C-8)，81.1(C-2″)，80.4(C-5″)，78.4(C-3″)，76.1(C-3?)，74.1(C-2?)，72.1(C-1″)，70.1(C-4″)，69.5(C-4?)，65.4(C-5?)，61.4(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[13]報道的一致，故鑒定化合物6為葒草素 2″-O-木糖甙。

化合物7黃色無晶形固體;HR-ESI-MS：m/z595.162 7 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為594.168 4，分子式為C27H30O15。1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.42(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.39(1H，dd，J=8.4，2.3 Hz，H-6′)，6.95(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.60(1H，s，H-3)，6.59(1H，s，H-8)，4.90(1H，d，J=9.9 Hz，H-1″)，4.44(1H，d，J=7.8 Hz，H-1?)，3.85～3.08(12H，m，糖上質(zhì)子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，164.6(C-2)，163.5(C-7)，159.7(C-5)，157.2(C-9)，149.5(C-4′)，145.5(C-3′)，122.3(C-1′)，119.4(C-6′)，115.9(C-5′)，113.3(C-2′)，107.8(C-6)，104.5(C-1?)，103.9(C-10)，103.0(C-3)，94.5(C-8)，80.9(C-5″)，80.2(C-2″)，78.3(C-3″)，76.1(C-3?)，75.9(C-5?)，74.5(C-2?)，72.0(C-4?)，69.9(C-1″)，69.7(C-4″)，61.2(C-6″)，61.1(C-6?)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[12]報道的一致，故鑒定化合物7為木犀草素6-C-β-D-吡喃半乳糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8黃色無晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z611.257 7 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為610.153 4，分子式為C27H30O16。1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.89(2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′)，6.56(1H，s，H-8)，6.53(1H，s，H-3)，4.92(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，4.47(1H，d，J=7.9 Hz，H-1?)，4.51～3.13 (12H，m，糖上質(zhì)子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，164.5(C-2)，163.2(C-7)，160.9(C-5)，157.2(C-9)，157.1(C-4′)，128.4(C-2′，6′)，121.6(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，107.7(C-6)，104.4(C-1?)，104.0(C-10)，102.7(C-3)，94.6(C-8)，80.8(C-5″)，80.1(C-2″)，78.3(C-3″)，76.1(C-3?)，75.9(C-5?)，74.4(C-2?)，72.0(C-4?)，69.9(C-1″)，69.7(C-4″)，61.3(C-6″)，61.3(C-6?)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[12]報道的一致，故鑒定化合物8為芹菜素6-C-β-D-吡喃半乳糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9黃色油狀固體;C26H28O14，1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：7.89～7.80 (2H，m，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′)，6.62(1H，s，H-8)，6.58(1H，s，H-3)，4.88(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″)，4.33(1H，s，H-1?)，3.91～2.80(11H，m，糖上質(zhì)子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.5(C-4)，164.4(C-2)，164.0(C-7)，161.2(C-5)，157.3(C-9)，157.3(C-4′)，128.4(C-2′，6′)，121.7(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，107.9(C-6)，105.5(C-1?)，103.7(C-10)，102.7(C-3)，94.2(C-8)，80.9(C-5″)，80.7(C-2″)，78.4(C-3″)，76.0(C-3?)，74.0(C-2?)，72.1(C-1″)，69.9(C-4?)，69.4(C-4″)，65.3(C-5?)，61.2(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[13]報道的一致，故鑒定化合物9為芹菜素-6-C-β-D-吡喃木糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10黃色膠狀固體;HR-ESI-MS：m/z611.108 9 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為610.155 6，分子式為C27H30O16。1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：7.43(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.40(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H-6′)，6.95(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.61(1H，d，J=4.6 Hz，H-3)，4.89(1H，d，J=9.9 Hz，H-1?)，4.42(1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.85～2.92(12H，m，糖上質(zhì)子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，164.6(C-2)，163.3(C-7)，160.2(C-5)，157.2(C-9)，149.6(C-4′)，145.6(C-3′)，122.3(C-1′)，119.4(C-6′)，115.9(C-5′)，113.3(C-2′)，107.9(C-6)，104.5(C-3)，103.9(C-10)，102.9(C-8)，80.9(C-2″)，80.3(C-5″)，78.4(C-3″)，76.2(C-3?)，75.9(C-5?)，74.5(C-2?)，72.0(C-1″)，72.0(C-1?)，69.9(C-4″)，69.7(C-4?)，61.2(C-6?)，61.2(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[14]報道的一致，故鑒定化合物10為葒草素-6-C-β-D-葡萄糖苷。

化合物11黃色無晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z595.106 9 [M+H]+，相對分子質(zhì)量為594.158 5，分子式為C27H30O15。1H NMR(600 MHz，(CD3)2CO)δ：7.80(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.58(1H，s，H-8)，6.57(1H，s，H-3)，4.90(1H，d，J=9.9 Hz，H-1″)，4.45(1H，d，J=7.9 Hz，H-1?)，3.85-3.01(12H，m，糖上質(zhì)子);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：182.6(C-4)，163.7(C-2)，163.7(C-7)，161.1(C-5)，157.2(C-9)，157.2(C-4′)，128.5(C-2′，6′)，121.7(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，107.9(C-6)，104.5(C-3)，103.8(C-10)，102.8(C-8) 80.9(C-2″)，80.1(C-5″)，78.3(C-3″)，76.1(C-3?)，75.9(C-5?)，74.4(C-2?)，72.0(C-1″)，72.0(C-1?)，69.8(C-4″)，69.4(C-4?)，61.2(C-6″)，61.2(C-6?)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[13，14]報道的基本一致，故鑒定化合物11為異牡荊素8-C-β-D-葡萄糖苷。

化合物12黃色無晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z299.062 0 [M-H]-，相對分子質(zhì)量為300.063 3，分子式為C16H12O6。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.57(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.55(1H，s，H-6′)，6.94(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.88(1H，s，H-3)，6.52(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=1.4 Hz，H-6)，3.89(3H，s，H-OCH3);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.3(C-4)，164.6(C-2)，164.2(C-7)，161.9(C-5)，157.8(C-9)，151.2(C-3′)，148.5(C-4′)，122.0(C-1′)，120.9(C-6′)，116.5(C-5′)，110.7(C-2′)，104.2(C-10)，103.7(C-3)，99.3(C-6)，94.5(C-8)，56.5(C-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[15]報道的基本一致，故鑒定化合物12為金圣草黃素(chrysoeriol)。

化合物13黃色晶形粉末;HR-ESI-MS：m/z447.096 8 [M-H]-，相對分子質(zhì)量為448.100 5，分子式為C21H20O11。1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：7.44(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.34(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6′)，6.99(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.46(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.25(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，5.39(1H，d，J=1.6 Hz，H-1″)，4.25(1H，dd，J=3.4，1.8 Hz，H-5″)，3.82～3.77(1H，m，H-2″)，3.40～3.35(2H，m，H-3″，4″)，0.87(3H，d，J=5.7 Hz，H-6″);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：178.3(C-4)，164.4(C-7)，161.6(C-5)，157.8(C-9)，157.1(C-2)，148.4(C-4′)，144.9(C-3′)，134.9(C-3)，121.7(C-6′)，121.6(C-1′)，116.0(C-5′)，115.4(C-2′)，104.6(C-10)，102.0(C-1″)，98.8(C-6)，93.8(C-8)，71.7(C-4″)，70.9(C-3″)，70.6(C-2″)，70.4(C-5″)，16.8(C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[16]報道的基本一致，故鑒定化合物13為槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷。

圖1 化合物1～14的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1-14

化合物14白色晶形粉末;C21H42O2，1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：2.28(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，1.60(2H，q，J=7.2 Hz，H-3)，1.31(34H，s，H-4～H-20)，0.89(3H，t，J=6.8 Hz，H-21);13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：173.9(C-1)，33.3(C-2)，31.8(C-19)，29.4(C-6～C-16)，29.3(C-17)，29.2(C-18)，29.1(C-5)，29.0(C-4)，24.8(C-3)，22.4(C-20)，13.7(C-21)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[17，18]報道的基本一致，故鑒定化合物14為正二十一烷酸?；衔?～14的結(jié)構(gòu)如圖1所示。

2.2 抑酶活性篩選結(jié)果

以上述標準方法平行測定三次取平均值，結(jié)果顯示陽性藥奧利司他的IC50=0.017 mM，共篩選八個化合物的胰脂肪酶抑制活性，顯示較弱的抑制活性，其中化合物3的IC50=1.08 mM，其他化合物的IC50相差不大，結(jié)果如表1所示。

表1 不同化合物抑制胰脂肪酶活性的IC50值Table 1 IC50 values of different compoundsinhibiting pancreatic lipase activity

3 結(jié)論

從黃精地上部位共分離得到化合物14個，主要為酚酸和黃酮類化合物，化合物1、2為酚酸類化合物，化合物3～13為黃酮類化合物，黃酮類化合物以碳苷黃酮為主。化合物6～14為首次從該植物分離得到，目前還沒有關于此化合物胰脂肪酶抑制活性的報道。篩選了分離得到含量較大純度較高的化合物2、3、6、7、8、10、11、13的胰脂肪酶抑制活性，結(jié)果顯示具有一定抑制活性，對胰脂肪酶的抑制率隨著化合物濃度的增加而升高，當化合物濃度為5 mM時，抑制率均達到75%以上，其中化合物3的抑制率達到83.67%。目前已發(fā)現(xiàn)多種黃酮類、酚酸類化合物或者富含此類化合物的粗提物具有較強的胰脂肪酶抑制活性，但是對于其中碳苷黃酮類單體化合物的胰脂肪酶抑制活性報道較少。從體外活性實驗研究結(jié)果可知，黃精地上部位提取物可能具有降脂作用，此類化合物對胰脂肪酶的抑制類型及活性位點需要進一步探究。

致謝：衷心感謝廣西植物研究所黃永林研究員的悉心教導，感謝廣西植物研究所何瑞杰博士和王磊博士的細心指導和數(shù)據(jù)解析，感謝桂林醫(yī)學院張祖湘和廣西植物研究所陽丙媛的幫助。