不同方式核黃素-藍(lán)光交聯(lián)對(duì)兔眼鞏膜組織生物力學(xué)和成纖維細(xì)胞影響分析

韓寶雁，米強(qiáng)，賈冠美

（1.廊坊愛爾眼科醫(yī)院，河北 冀州 065000；2.定州市人民醫(yī)院，河北 定州 065000；3.保定市第二中心醫(yī)院，河北 涿州 065000）

0 引言

近視是全球范圍內(nèi)都非常常見的一種眼部疾病，該疾病所產(chǎn)生的危害性會(huì)對(duì)患者的日常生活、工作、學(xué)習(xí)等產(chǎn)生諸多不便[1]。近年來，隨著電子產(chǎn)品的廣泛應(yīng)用，不合理的使用方式使得越來越多的人患有近視，而且近視發(fā)生率逐漸年輕化。隨著臨床研究不斷發(fā)展，國外的一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)通過核黃素-A 波紫外線（UVA）交聯(lián)法，可以增加角膜基質(zhì)的機(jī)械強(qiáng)度，從而阻止圓錐角膜的病理進(jìn)程，成為新型治療圓錐角膜的非手術(shù)方法[2]。

當(dāng)前國際上通用的兔眼虹膜交聯(lián)術(shù)普遍采取370 nm 的A 波紫外線，照射時(shí)間30 min，功率為3 mW/cm2。本次研究中，對(duì)兩種總能量相同但是方式不同的照射方式進(jìn)行分析，以了解不同方式核黃素-藍(lán)光交聯(lián)對(duì)兔眼鞏膜組織生物力學(xué)以及成纖維細(xì)胞的影響，以下是詳細(xì)內(nèi)容。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

取新西蘭大白兔24 只作為研究樣本，研究時(shí)間為：2019 年1 月到2019 年5 月。所有大白兔均無眼疾，而且雌雄均有，應(yīng)用隨機(jī)分組法將24 例大白兔分組：A、B 組，每組大白兔12 只。將每組左眼視為實(shí)驗(yàn)眼、右眼視為對(duì)照眼。

1.2 方法

2組均使用波長為370 nm的紫外線燈進(jìn)行照射，A 組的照射時(shí)間為30 分鐘，功率為3.0 mW/cm2，B組的照射時(shí)間為9 分鐘，功率為10.0 mW/cm2。具體的方法步驟如下：①術(shù)前麻醉：向?qū)嶒?yàn)兔腹腔內(nèi)注射水合氯醛合劑3 mL/kg。②將實(shí)驗(yàn)大白兔置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，擺好頭部位置，使用開瞼器開瞼，加入丁卡因眼液（5 mg+生理鹽水注射液5 mL）[3]。③充分分離球結(jié)膜與筋膜，并在上方角膜緣使用6-0 縫線做一條牽引線，拉向顳下方，暴露鼻上方鞏膜后，使用薄棉片覆蓋角膜，并在鞏膜暴露位置滴加0.1%核黃素5-磷酸鈉溶液，浸潤5 min。④照射時(shí)間隔2 min 滴加一次0.1% 5-磷酸核黃素溶液，保證鞏膜濕潤。⑤去除牽引縫線，讓筋膜、結(jié)膜復(fù)位，滴加氯霉眼藥水，涂抹紅霉素眼膏。

1.3 觀察指標(biāo)

分別于術(shù)后早期1 d、7 d、30 d，耳緣靜脈注射空氣處死兔子，每次處死4 只。在無菌條件下立即摘除實(shí)驗(yàn)眼球及對(duì)照眼球，實(shí)驗(yàn)眼球摘除前用6/0無菌縫線做交聯(lián)照射部位標(biāo)記。取實(shí)驗(yàn)眼交聯(lián)部位及對(duì)照眼相應(yīng)部位的鞏膜組織提取并培養(yǎng)鞏膜成纖維細(xì)胞，用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定成纖維細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞微管吸吮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)交聯(lián)術(shù)后早期不同時(shí)間鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行準(zhǔn)確核對(duì)和錄入，采用SPSS 22.0 軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料使用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組大白兔眼鞏膜生物力學(xué)參數(shù)均在治療后提高，但是1、7、30 d 大白兔眼鞏膜生物學(xué)力度參數(shù)比較并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：P＞0.05，詳細(xì)見表1。

表1 比較A、B 組大白兔眼鞏膜生物力學(xué)參數(shù)（±s）

注：*表示與A 組比較：P＞0.05。

經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定顯示虹膜成纖維細(xì)胞Vimentin 染色呈陽性，而Desmin 染色、Keratin、S-100 染色均為陰性。

3 討論

目前臨床上治療高度近視的主要方法是采取傳統(tǒng)的鞏膜加固術(shù)進(jìn)行治療，這種治療方式往往會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生較大的風(fēng)險(xiǎn)，而且部分患者術(shù)后可能還會(huì)出現(xiàn)并發(fā)癥。針對(duì)近視非手術(shù)治療方式，有關(guān)學(xué)者也作出了大量的實(shí)驗(yàn)和研究，利用動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行鞏膜膠原交聯(lián)，證實(shí)了該治療方式能夠增加鞏膜生物力學(xué)性能，為高度近患者的治療提供新的思路[4]。

如今，諸多研究表明膠原交聯(lián)法能夠增強(qiáng)生物組織力學(xué)強(qiáng)度，隨著核黃素A-波紫外線的角膜膠原交聯(lián)治療圓錐角膜研究不斷的深入，膠原交聯(lián)法逐漸被證實(shí)具有較高的安全性和有效性。因?yàn)殪柲づc角膜結(jié)構(gòu)相似，因此采取該方法對(duì)鞏膜膠原進(jìn)行交聯(lián)以治療高度近視，能夠成為新的研究方向[5-6]。

從在本次研究中，可以看出鞏膜交聯(lián)能夠?qū)Ω鹘M功能成纖維細(xì)胞的生物力學(xué)特性進(jìn)行改變，表明了鞏膜成纖維細(xì)胞的力學(xué)特點(diǎn)改變必然會(huì)對(duì)其形態(tài)、結(jié)構(gòu)、組成功能產(chǎn)生影響。

總之不同方式的核黃素-藍(lán)光交聯(lián)能夠提高兔眼鞏膜組織纖維生物力學(xué)性。