血液的冷凍保存

文丨李興華（攀枝花市中心血站）

導(dǎo)讀冷凍保存是血液保存的主要方式之一，目前，血液冷凍保存工藝已經(jīng)比較成熟，冷凍血已經(jīng)開始被應(yīng)用與臨場治療當中。血液冷凍保存方法在解決血液長期儲存、稀有血液儲存以及保障供血等方面具有重要意義。事實上，早在上世紀40年代就已經(jīng)開始了關(guān)于冷凍血液的相關(guān)研究，PIige、Smith發(fā)現(xiàn)甘油可以對牛精子冷凍保存形成一定的保護，由此得到啟示，在次年就利用甘油制作出冷凍保護劑，實現(xiàn)了紅細胞的冷凍保存。此后，TuIIis經(jīng)過研究解決了如何去除冷凍保護液的問題，使得冷凍保存的紅細胞初步應(yīng)用與臨床當中，但是由于操作比較復(fù)雜，未能實現(xiàn)大范圍推廣。Huggins于1963年改進了去除冷凍保護劑的方法，自此之后，冷凍保存紅細胞開始大范圍在臨床當中應(yīng)用。后續(xù)隨著各項工藝的不斷完善，成功地開創(chuàng)出了一項保存血液的新途徑。

血液冷凍保存法的優(yōu)點

其一，采用冷凍保存法可以使血液的保存期限延長至10年，這對于緩解血液供不應(yīng)求的問題有極大的作用，尤其是對需要輸入稀有血液的患者來說是一大福音。采用冷凍法保存血液，需要使用時只需要進行解凍洗滌即可，極為便捷，并且保存期限長，可以使一些稀有血液得到妥善保存。

其二，經(jīng)過洗滌操作的血液，其中大部分白細胞、血漿蛋白以及血小板被去除，可以有效減輕輸血造成的不良反應(yīng)，尤其是對于患有血液病、腎功能異常、心功能不全等患者極為適用，對于存在過敏性輸血反應(yīng)的患者也是比較理想的選擇。

其三，冷凍保存的血液2、3-DPG含量和冷凍之前沒有明顯的變化，基本接近與正常血液的含量，輸血后其氧釋放能力要優(yōu)于保存血，可以快速糾正患者缺氧的情況，在胸外科手術(shù)以及新生兒換血手術(shù)中具有較高的應(yīng)用價值。

其四，冷凍保存的血液由于去除了其中的細胞代謝產(chǎn)物、可能存在的肝炎病毒以及抗凝劑，因此，即使大量輸血也可以有效避免出現(xiàn)酸中毒、肝炎以及鉀血癥的情況，并且由于去除了血液中的抗體A和B，使得O型血成為了真正意義上的萬能血。

冷凍保存血液的工藝雖然相對比較繁瑣，需要一定的設(shè)備輔助，但是其在實際當中所取得的效果極為明顯，在搶救需要輸血的患者方面發(fā)揮了重要作用，挽救了很多生命，并且也使得很多稀有血液可以長期有效保存。

制備冷凍紅細胞的方法

目前，制備冷凍紅細胞比較普遍的方法有兩種，分別是快速冷凍法以及慢速冷凍法?？焖倮鋬鲋饕抢玫蜐舛鹊母视蛯t細胞進行處理，使得紅細胞當中的甘油濃度保持在18%（W/V）左右，然后需要將處理后的紅細胞放置在液氮（溫度為-196℃）當中迅速冷凍，最后將冷凍后的紅細胞放置液氮蒸汽（溫度為-156℃）當中儲存。其需要使用到制氮設(shè)備以及大容量的液氮罐，這種方法目前尚未在國內(nèi)全面普及。慢速冷凍法主要是利用高濃度的甘油對紅細胞進行處理，使紅細胞當中的甘油濃度保持在40（W/V）左右，對于冷凍的速率沒有嚴格的要求，采用機械冰箱冷凍即可。其操作相對比較簡單，也不需要使用復(fù)雜的設(shè)備，主要采用的設(shè)備是大容量的冰箱，溫度需要保持在-65℃以下，這種方法易于操作，且成本相對較低，因此普及范圍較廣。慢速冷凍法按照去除冷凍保護劑的方法又可以分為兩種，其一是鹽業(yè)離心洗滌，其二是糖業(yè)聚集洗滌，二者洗脫甘油的方法雖然存在差異，但是其基本原理一致，首先以高漲溶液促使已融化的高滲紅細胞滲透壓保持平衡狀態(tài)；其次采用逐漸下降的高漲溶液開始分次洗滌；最后以含有葡萄糖的等滲NaCI懸浮。

慢速冷凍法洗滌制備的方法

其一，糖業(yè)聚集洗滌法首先，將冷凍保存的血液放置在溫度為37～40℃的水浴中慢慢融化；其次，采用500ml10%蔗糖溶液進行洗脫，持續(xù)3次，去除上清血紅蛋白；再次，加入0.9%NaCI100ml進行懸浮，離心去除上清血紅蛋白，在重新加入0.9%NaCI100ml懸??；最后檢測上清血紅蛋白符合輸血標準后應(yīng)用于臨床。

其二，鹽業(yè)離心洗滌法。首先，將冷凍保存的血液放置在溫度為37～40℃的水浴中慢慢融化；其次去除甘油紅細胞，加入9%NaCI40ml，再加入0.9%NaCI250ml，離心去除上清血紅蛋白，再加入500mL0.9%NaCI再次離心去除上清血紅蛋白，并用0.9%NaCI洗滌；再次懸浮紅細胞，采用0.9%NaCI100ml進行懸浮；最后檢測上清血紅蛋白符合輸血標準后應(yīng)用于臨床。

冷凍紅細胞質(zhì)量標準

一般來說，采用的洗滌方法不一樣，紅細胞的質(zhì)量標準也會存在一定的差異，并且隨著冷凍保存的工藝越來越完善，質(zhì)量標準也在不斷變化，目前，普遍使用的質(zhì)量標準包括以下幾方面。其一是紅細胞的回收率要超過80%以上；其二是冷凍保存的血液解凍后輸入人體，在24h以內(nèi)，紅細胞的存活率不低于70%；其三是執(zhí)行洗滌操作后，懸浮液當中上清血紅蛋白的含量在1g/L以下；其四是懸浮紅細胞甘油含量不超過1%；其五是懸浮紅細胞體外溶血實驗，上清血紅蛋白的增加量在50%以下；其六是ATR和2、3-DPG以及紅細胞脆性接近與正常狀態(tài)下的血液。