• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紫花蕓豆抗性淀粉對(duì)高脂血癥大鼠肝臟及腸屏障損傷的修復(fù)作用

    2020-11-27 10:47:22劉淑婷王志輝張艷莉佐兆杭王浩宇
    食品科學(xué) 2020年21期
    關(guān)鍵詞:蕓豆灌胃高脂血癥

    劉淑婷,王 穎,2,3,*,王志輝,2,王 迪,張艷莉,佐兆杭,王浩宇,鄧 薇

    (1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 大慶 163319;2.國(guó)家雜糧工程技術(shù)研究中心,黑龍江 大慶 163319;3.黑龍江省農(nóng)產(chǎn)品加工與質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江 大慶 163319)

    隨著消費(fèi)者生活方式和膳食結(jié)構(gòu)改變,高脂血癥患病率逐年攀升。大量數(shù)據(jù)表明,中國(guó)成年人高脂血癥患病率高達(dá)18.6%[1-2]。高脂血癥是心腦血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化、缺血/溢血性中風(fēng)等病癥的重要發(fā)病因素[3]。高脂血癥是指由體內(nèi)血脂代謝紊亂引發(fā)血脂異常的一類代謝綜合類疾病統(tǒng)稱,而肝臟作為身體代謝的重要器官,在調(diào)節(jié)機(jī)體能量平衡方面起關(guān)鍵作用[4-6]。當(dāng)人體攝入和消耗的能量不平衡時(shí),脂肪組織中過量的游離脂肪酸會(huì)將脂肪聚集在肝細(xì)胞中,使肝臟組織病變形成肝硬化、脂肪肝等病癥[7]。同時(shí),高脂血癥誘發(fā)機(jī)體自由基蓄積、免疫功能紊亂、腸道菌群失調(diào),進(jìn)而損傷腸道功能?,F(xiàn)階段針對(duì)高脂血癥及其并發(fā)癥的傳統(tǒng)方法一般采取多種降脂藥物聯(lián)合干預(yù)的方式,其成本高昂、毒副作用大[8-9]。因此,探尋一種可通過膳食補(bǔ)充降低血液中甘油三酯(triglyceride,TG)和總膽固醇(total cholesterol,TC)含量,有效改善高脂血癥的天然產(chǎn)物具有重要意義。

    抗性淀粉是指在健康人體小腸中不被吸收,但在結(jié)腸中能被微生物完全或部分利用發(fā)酵產(chǎn)生對(duì)人體有益的短鏈脂肪酸的淀粉及其降解物,具有降低餐后血糖濃度、控制體質(zhì)量、改善腸道健康等生理功能[10-11]。目前,對(duì)抗性淀粉生理功能的研究主要集中在其參與糖代謝、調(diào)節(jié)腸道菌群、預(yù)防結(jié)腸癌等方面,在脂質(zhì)代謝方面的研究則更偏向于高直鏈玉米來源的抗性淀粉,Polakof等[7]研究發(fā)現(xiàn)Hi-Maize 260玉米抗性淀粉能有效改善高脂血癥大鼠胰島素抵抗造成的肝臟損傷。而對(duì)于雜糧豆類抗性淀粉的降脂護(hù)肝功能,尤其是對(duì)高脂造成的腸屏障損傷修復(fù)方面研究報(bào)道較少。蕓豆,作為小宗雜糧豆類,具有極高的食用和藥用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)以墾區(qū)主產(chǎn)紫花蕓豆為原材料制備抗性淀粉,以高脂血癥大鼠模型為對(duì)象,研究蕓豆抗性淀粉對(duì)血脂異常導(dǎo)致的肝臟和腸屏障損傷的修復(fù)作用,旨在拓寬蕓豆的應(yīng)用領(lǐng)域,為蕓豆抗性淀粉在高脂血癥疾病方面的調(diào)節(jié)作用提供理論依據(jù)及數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物、材料與試劑

    清潔級(jí)雄性Wistar大鼠,體質(zhì)量(200±20)g,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(遼)2015-0001,購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司。

    紫花蕓豆抗性淀粉由實(shí)驗(yàn)室自制;高脂血癥飼料北京科澳協(xié)力飼料有限公司;TG測(cè)試盒、TC測(cè)試盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)測(cè)試盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)測(cè)試盒南京建成生物工程研究所;天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)試劑片、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)試劑片、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALKP)試劑片 北京安普生化科技有限公司;D-乳酸(D-lactic acid,D-LA)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)測(cè)試盒 蘇州卡爾文生物技術(shù)有限公司;辛伐他汀片 山東鑫齊藥業(yè)有限公司;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Vet Test 8008全自動(dòng)生化分析儀 北京安普生化科技有限公司;A360紫外分光光度計(jì) 上海翱藝儀器有限公司;Multiskan Sky全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司;SHP-250生化培養(yǎng)箱 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器公司;AL104型電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 紫花蕓豆抗性淀粉的制備

    工藝流程:紫花蕓豆粉→堿法提取[12]→淀粉→調(diào)漿→預(yù)糊化→超聲-微波協(xié)同處理[13]→壓熱→普魯蘭酶酶解[14]→滅酶→老化→烘干→粉碎過篩→純化[15]→紫花蕓豆抗性淀粉

    操作要點(diǎn): 1 ) 堿法提?。?氫氧化鈉溶液(0.2 g/100 mL)浸提時(shí)間3 h,固液比1∶7;2)超聲-微波協(xié)同壓熱酶解法制備紫花蕓豆抗性淀粉:淀粉懸浮液質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%,超聲-微波協(xié)同反應(yīng)儀溫度40 ℃,微波功率300 W,超聲-微波協(xié)同處理20 min后于121 ℃壓熱30 min,冷卻后調(diào)節(jié)至pH 5,酶添加量(9 ASPU/g,以干基質(zhì)量計(jì)),55 ℃恒溫酶解10 h,沸水浴滅酶。老化條件:4 ℃老化24 h。純化后抗性淀粉平均提取率為24.17%。

    1.3.2 動(dòng)物分組與造模

    健康Wistar大鼠(雄性)48 只,飼養(yǎng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)專用大鼠籠中。飼養(yǎng)條件:模擬循環(huán)光照12 h、室溫(24±2)℃、相對(duì)濕度(50±5)%。實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周,稱量體質(zhì)量并記錄。

    根據(jù)大鼠體質(zhì)量隨機(jī)分為6 組,即空白組、模型對(duì)照組、陽性藥物組、抗性淀粉處理組(高、中、低劑量組),每組8 只。所有大鼠每天自由飲水,空白組飼喂普通飼料,其余各組飼喂高脂血癥飼料,造模6 周。造模期間,每2 周剪尾取血一次,監(jiān)測(cè)血清TG和TC含量(與空白組相比,其余各組大鼠血清TC、TG含量升高2~3 倍即表示模型成立)。造模成功后,空白組和模型組大鼠每日灌胃生理鹽水;抗性淀粉處理組每日灌胃不同劑量蕓豆抗性淀粉;陽性藥物組灌胃辛伐他汀,具體灌胃劑量見表1。實(shí)驗(yàn)期間觀測(cè)大鼠日常精神、行為狀態(tài),連續(xù)灌胃6 周后,最后一天禁食不禁水12 h,稱量大鼠體質(zhì)量并記錄[16]。實(shí)驗(yàn)鼠采取肌肉注射方式麻醉后,解剖,取肝臟、腹腔脂肪、小腸黏膜等組織分別稱質(zhì)量并記錄。按下式計(jì)算肝臟指數(shù)。

    表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃藥劑設(shè)計(jì)Table 1 Grouping of experimental animals

    1.3.3 血清指標(biāo)測(cè)定

    大鼠解剖后,立即腹主動(dòng)脈取血,血液樣本室溫靜置30 min后4 ℃高速離心機(jī)離心,吸取上層血清分裝于滅菌EP管,于-80 ℃保存?zhèn)溆?。利用全自?dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血液TC、TG濃度以及AST、ALT、ALKP活力,采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血液中抗氧化酶活力、DAO質(zhì)量濃度及D-LA濃度。

    1.3.4 肝臟、小腸病理組織切片檢測(cè)

    取肝臟右小葉及小腸黏膜組織,生理鹽水沖洗后吸水紙吸拭表面,于10%中性甲醛溶液固定用以制作蘇木精-伊紅切片,光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織并采集圖像[19]。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    運(yùn)用SPSS 20軟件的方差分析法比較數(shù)據(jù)差異顯著性,P<0.05及P<0.01分別表示差異顯著和差異極顯著,用Origin軟件制作相關(guān)圖表。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蕓豆抗性淀粉對(duì)大鼠體質(zhì)量、肝臟指數(shù)及腹腔脂肪質(zhì)量的影響

    圖1 各組大鼠體質(zhì)量、肝臟指數(shù)及腹腔脂肪質(zhì)量Fig. 1 Body mass, liver index and abdominal fat mass of rats in each group

    由圖1A可知,各組大鼠體質(zhì)量較空白組明顯升高,模型組與空白組體質(zhì)量差異極顯著(P<0.01),表明高脂血癥大鼠建模成功。經(jīng)灌胃辛伐他汀及蕓豆抗性淀粉后,陽性對(duì)照組和抗性淀粉處理組大鼠體質(zhì)量均明顯下降;與模型組相比,蕓豆抗性淀粉低劑量組大鼠體質(zhì)量差異顯著(P<0.05),其余各組大鼠體質(zhì)量差異極顯著(P<0.01)。由圖1B可知,模型組大鼠肝臟指數(shù)與空白組大鼠相比存在極顯著差異(P<0.01);灌胃后,與模型組大鼠相比,除低劑量組,其他各灌胃組大鼠肝臟指數(shù)較模型組不同程度升高,差異顯著(P<0.05)。由圖1C可知,模型組大鼠腹腔脂肪質(zhì)量較空白組大鼠存在極顯著差異(P<0.01)。經(jīng)灌胃處理后,除低劑量組外,抗性淀粉中、高劑量組和陽性對(duì)照組大鼠腹腔脂肪質(zhì)量較模型組相比存在顯著性差異(P<0.05,P<0.01)。

    2.2 蕓豆抗性淀粉對(duì)大鼠血脂和肝功能相關(guān)指標(biāo)的影響

    圖2 蕓豆抗性淀粉對(duì)各組大鼠血清TC、TG濃度及ALKP、AST、ALT活力的影響Fig. 2 Effect of resistant starch from purple speckled kidney beans on serum total cholesterol and triglyceride concentrations and alkaline phosphatase, aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase activity in each group

    如圖2所示,飼喂高脂飼料的模型組大鼠與空白組大鼠之間血清TC、TG濃度存在極顯著差異(P<0.01),且模型組大鼠血清ALKP、AST、ALT活力顯著升高(P<0.01)。與模型組相比,陽性對(duì)照組大鼠血清TC、TG濃度降低,其中TG濃度差異極顯著(P<0.01),ALKP、AST、ALT活力極顯著降低(P<0.01)??剐缘矸酃辔父深A(yù)后,與模型組相比,中、高劑量組大鼠TC、TG濃度及ALKP、AST活力差異極顯著(P<0.01),ALT活力差異顯著(P<0.05);低劑量組大鼠血清ALKP、ALT活力雖有一定程度下降,但不存在顯著性差異(P>0.05)。

    2.3 蕓豆抗性淀粉對(duì)高脂血癥大鼠氧化應(yīng)激的影響

    如圖3所示,高脂血癥模型組大鼠血清SOD、GSH-Px活力相比于空白組大鼠極顯著降低(P<0.01),MDA濃度極顯著升高(P<0.01)。灌胃給藥后,與模型組大鼠相比,各灌胃組大鼠血清SOD和GSH-Px活力顯著回升(P<0.05,P<0.01),MDA濃度不同程度降低(P<0.05,P<0.01),但低劑量組MDA濃度差異不顯著。

    圖3 蕓豆抗性淀粉對(duì)各組大鼠血清SOD、GSH-Px活力和MDA濃度的影響Fig. 3 Effect of resistant starch from purple speckled kidney beans on serum SOD, GSH-Px activity and MDA concentration in each group

    2.4 蕓豆抗性淀粉對(duì)高脂血癥大鼠腸屏障損傷的影響

    由圖4可知,模型組大鼠血清DAO及D-LA水平較空白組大鼠極顯著升高(P<0.01),灌胃后,各組大鼠血清DAO及D-LA水平較模型組呈不同程度降低(P<0.05,P<0.01),說明蕓豆抗性淀粉能在一定劑量下抑制DAO及D-LA的釋放。

    圖4 蕓豆抗性淀粉對(duì)各組大鼠血清DAO、D-LA水平的影響Fig. 4 Effect of resistant starch from purple speckled kidney beans on serum DAO and D-LA levels in rats

    2.5 大鼠肝臟及小腸病理組織切片觀察結(jié)果

    圖5 大鼠肝臟病理組織蘇木精-伊紅染色觀察結(jié)果(×100)Fig. 5 HE staining of liver tissues of rats (× 100)

    由圖5可知,空白組大鼠肝臟小葉組織細(xì)胞整體形態(tài)結(jié)構(gòu)完整,胞核清晰可見,肝細(xì)胞圍繞中央靜脈以散射狀規(guī)整排列形成細(xì)胞索胞間,無明顯邊界分隔。而模型組大鼠肝臟組織腫大變性,損傷嚴(yán)重。肝細(xì)胞膨大腫脹,細(xì)胞核清晰可見但分布偏離,細(xì)胞漿質(zhì)間充盈著大量形狀大小各異的脂肪滴空泡,可觀察到大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和脂肪性病變。灌胃處理后,辛伐他汀組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對(duì)清晰完整,肝細(xì)胞索排列整齊,僅存在極少量脂滴空泡,接近空白組大鼠肝臟切片結(jié)果。與模型組相比,蕓豆抗性淀粉各劑量組大鼠肝臟損傷程度顯著減輕,中、高劑量組大鼠肝細(xì)胞腫脹程度改善明顯,未出現(xiàn)明顯細(xì)胞變性壞死現(xiàn)象,雖偶見脂肪空泡,但肝細(xì)胞索排列清晰,而低劑量組大鼠可見清晰肝細(xì)胞索但排列紊亂,空泡數(shù)量減少,但仍存在較大脂滴空泡,表明不同劑量蕓豆抗性淀粉對(duì)大鼠肝臟損傷的修復(fù)程度不同。

    圖6 各組大鼠小腸組織蘇木精-伊紅染色觀察結(jié)果(×100)Fig. 6 HE staining of small intestine tissues of rats in each group (× 100)

    由圖6可知,模型組大鼠小腸組織形態(tài)受損,腸絨毛倒伏、脫落缺失,絨毛高度降低且參差不齊;腸黏膜肌層厚度降低,間隙寬大,隱窩深度增加。灌胃給藥后,各組大鼠小腸組織形態(tài)較為完整,層次分明,與模型組大鼠相比,各灌胃組大鼠小腸絨毛高度顯著增加,腸黏膜間連接緊密,肌層厚度增加,隱窩深度降低,表明蕓豆抗性淀粉能在一定程度減緩高脂血癥對(duì)大鼠小腸黏膜機(jī)械屏障損傷。

    3 討 論

    長(zhǎng)期高脂飲食會(huì)影響肝臟代謝,打破能量平衡,破壞脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)。Stancu等[20]研究發(fā)現(xiàn),飲食中的飽和脂肪和過量膽固醇可能會(huì)激活小腸和肝臟的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和氧化應(yīng)激,引發(fā)肝臟及腸道功能損傷??剐缘矸郾徽J(rèn)為是功能性膳食纖維的一種,可抵抗人體小腸消化,被結(jié)腸菌群利用發(fā)酵對(duì)機(jī)體產(chǎn)生積極作用[21]。研究表明,多食用富含抗性淀粉等膳食纖維類食物能降低高脂血癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[22]。

    臨床研究發(fā)現(xiàn),高脂血癥與血清中TC和TG水平密切相關(guān)[23]。當(dāng)血液TC、TG水平高于正常水平時(shí),血液內(nèi)附著物增多,黏稠度升高,堵塞血管造成組織缺血性壞死,誘發(fā)大鼠肥胖致使腹腔脂肪堆積。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠基本狀況指標(biāo)及血脂水平,結(jié)果表明灌胃蕓豆抗性淀粉后,中、高劑量組大鼠體質(zhì)量、肝臟指數(shù)、腹腔脂肪質(zhì)量顯著降低。這與Lockyer等[24]的研究結(jié)果相似,該研究發(fā)現(xiàn)抗性淀粉能量值為一般碳水化合物熱量的10%,約為8.37 kJ/g,其可作為低能量物質(zhì)減少機(jī)體能量攝入。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),抗性淀粉是3 個(gè)或3 個(gè)以上單體單元的碳水化合物聚合物,由大量的直鏈淀粉分子經(jīng)歷老化重結(jié)晶過程形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu),難以在體內(nèi)被酶解消化,說明抗性淀粉的攝入可延緩胃排空率、縮短其在腸道運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)間、控制體內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)化,在結(jié)腸內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸,刺激膽汁酸分泌增加,干預(yù)TG和膽固醇的合成,從而降低血清TG和TC的濃度,與本實(shí)驗(yàn)中灌胃組大鼠血脂濃度降低結(jié)果一致,證實(shí)紫花蕓豆抗性淀粉能在一定劑量下控制體質(zhì)量,減輕腹腔脂肪質(zhì)量,改善血脂水平。

    高脂血癥病發(fā)時(shí)體內(nèi)產(chǎn)生過量脂類物質(zhì)進(jìn)入肝臟,肝臟超負(fù)荷運(yùn)轉(zhuǎn)使脂肪堆積,造成肝臟脂肪性病變,引發(fā)肝功能異常。ALKP和ALT主要分布在肝細(xì)胞中,AST分布在線粒體中,三者作為肝臟內(nèi)關(guān)鍵的功能性酶,可從受損的肝細(xì)胞質(zhì)分泌進(jìn)入血液[25],因此血液中ALKP、AST、ALT活力可衡量肝臟損傷程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與模型組大鼠相比,不同劑量組大鼠血清中ALKP、AST、ALT活力均呈不同程度下降。結(jié)合肝臟病理切片結(jié)果可知,各灌胃劑量組大鼠肝臟組織損傷程度較模型組大鼠顯著減輕,說明蕓豆抗性淀粉對(duì)高脂血癥大鼠肝功能損傷具有一定的修復(fù)作用,可減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn),提升細(xì)胞活力。

    高脂血癥會(huì)引發(fā)機(jī)體游離脂肪酸和自由基增多,破壞體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)[26],加劇肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)和脂肪酸過氧化,造成肝臟損傷。而肝臟是第一個(gè)通過門靜脈獲得內(nèi)源性代謝產(chǎn)物和外源性代謝產(chǎn)物的器官,也是血脂與脂蛋白結(jié)合和代謝關(guān)鍵場(chǎng)所[27],其借助肝門靜脈與腸道互聯(lián),兩者通過血液回流和肝腸循環(huán)的方式相互調(diào)節(jié),使得肝臟疾病與腸屏障功能密切相關(guān)。當(dāng)腸道功能受損時(shí),腸黏膜上皮細(xì)胞緊密連接被破壞,導(dǎo)致機(jī)械屏障通透性增加,D-LA和DAO分別作為腸內(nèi)微生物發(fā)酵產(chǎn)物及細(xì)胞漿中高活性酶被分泌到血液中。實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定機(jī)體氧化酶活性及血清D-LA和DAO判斷機(jī)體氧化應(yīng)激及腸屏障損傷程度,結(jié)果表明SOD和GSH-Px活力升高,MDA水平、DAO及D-LA活力降低。分析可能是機(jī)體攝入抗性淀粉時(shí),抗性淀粉進(jìn)入結(jié)腸,產(chǎn)生的短鏈脂肪酸被機(jī)體吸收進(jìn)而影響腸道激素合成。此時(shí)外源性代謝產(chǎn)物從腸道通過門靜脈循環(huán)進(jìn)入肝臟潛在地調(diào)節(jié)肝臟代謝[28],抑制了膽固醇合成并刺激脂肪酸分解代謝,通過減少脂質(zhì)過氧化物的形成,緩解機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng),減輕對(duì)腸道內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響,提高腸道上皮細(xì)胞活性[29]。結(jié)合小腸黏膜切片可知,蕓豆抗性淀粉組大鼠小腸黏膜組織完整,絨毛高度增加,隱窩深度降低,說明一定劑量的蕓豆抗性淀粉可通過清除機(jī)體自由基起到抗氧化應(yīng)激作用,從而減緩高脂血癥造成的肝臟損傷,近一步修復(fù)肝臟代謝障礙所致的腸屏障損傷。

    綜上所述,蕓豆抗性淀粉具有良好的控制大鼠體質(zhì)量,降低血脂,修復(fù)高脂血癥大鼠肝臟及腸道屏障損傷作用,且中、高劑量組較低劑量組效果更顯著。本研究可為雜糧豆類抗性淀粉在高脂血癥造成的肝損傷及腸屏障修復(fù)方面的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)及數(shù)據(jù)支持。

    猜你喜歡
    蕓豆灌胃高脂血癥
    拯救愛情的蕓豆豆
    如何科學(xué)播種蕓豆
    小鼠、大鼠灌胃注意事項(xiàng)
    蕓豆 減肥者理想的食物
    保健與生活(2016年5期)2016-04-11 19:49:03
    高脂血癥對(duì)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目的干擾及消除
    來曲唑灌胃后EM大鼠病灶體積及COX-2 mRNA、survivin蛋白表達(dá)變化
    食物不耐受與高脂血癥的關(guān)系
    社區(qū)健康促進(jìn)模式降低老年高脂血癥的效果
    蕓豆蛋白的理化功能特性研究
    實(shí)驗(yàn)小鼠的灌胃給藥技巧
    桃花免费在线播放| 欧美97在线视频| 亚洲,欧美精品.| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产免费一级a男人的天堂| 国产成人精品久久久久久| 天天操日日干夜夜撸| 成年美女黄网站色视频大全免费| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美日韩成人在线一区二区| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲美女视频黄频| 99热网站在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 中文字幕最新亚洲高清| 美女福利国产在线| 久久午夜福利片| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品国产av蜜桃| 99久久人妻综合| 国产精品久久久av美女十八| 久久久欧美国产精品| 黄色配什么色好看| 日本-黄色视频高清免费观看| 2022亚洲国产成人精品| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女人精品久久久久毛片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 91精品国产国语对白视频| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品一二三区在线看| 国产在线一区二区三区精| 日韩一区二区视频免费看| 久久鲁丝午夜福利片| 精品熟女少妇av免费看| 久久99精品国语久久久| 色婷婷av一区二区三区视频| 97在线视频观看| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲国产精品成人久久小说| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲国产精品999| 九九在线视频观看精品| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产成人精品婷婷| 久久久久久久精品精品| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久人人爽人人片av| 99久久人妻综合| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线| 人妻系列 视频| 伊人久久国产一区二区| 日韩一区二区视频免费看| 女人久久www免费人成看片| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日韩中字成人| 午夜久久久在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 九色亚洲精品在线播放| 中文字幕亚洲精品专区| 男人添女人高潮全过程视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美xxⅹ黑人| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美精品亚洲一区二区| 久久人妻熟女aⅴ| 国产 精品1| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| videos熟女内射| 麻豆乱淫一区二区| 国产亚洲精品久久久com| 日韩av免费高清视频| 久久久久久久久久久久大奶| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲久久久国产精品| 国产淫语在线视频| 考比视频在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久久网色| 人妻人人澡人人爽人人| 大片免费播放器 马上看| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲av福利一区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| av免费观看日本| 国产精品无大码| 国产黄频视频在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产高清不卡午夜福利| 波野结衣二区三区在线| 国产精品.久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久精品免费免费高清| 精品视频人人做人人爽| 男人添女人高潮全过程视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产色婷婷99| h视频一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲伊人色综图| 国内精品宾馆在线| 久久精品久久精品一区二区三区| 一级a做视频免费观看| 久久青草综合色| av播播在线观看一区| 制服丝袜香蕉在线| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲国产av影院在线观看| 国产永久视频网站| 欧美最新免费一区二区三区| 赤兔流量卡办理| 伊人久久国产一区二区| 韩国高清视频一区二区三区| 婷婷色综合www| 精品第一国产精品| 十分钟在线观看高清视频www| 91aial.com中文字幕在线观看| 全区人妻精品视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产xxxxx性猛交| 高清毛片免费看| 韩国av在线不卡| 亚洲精品国产av成人精品| 国产综合精华液| 一边亲一边摸免费视频| 极品人妻少妇av视频| av播播在线观看一区| 伊人亚洲综合成人网| 免费av不卡在线播放| 熟女av电影| 精品国产一区二区三区四区第35| 午夜影院在线不卡| kizo精华| 国产日韩欧美在线精品| 国产日韩欧美在线精品| 丝瓜视频免费看黄片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产片特级美女逼逼视频| 99久久精品国产国产毛片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 人人澡人人妻人| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美精品国产亚洲| 99热网站在线观看| 美女主播在线视频| 观看av在线不卡| a级毛片在线看网站| 制服丝袜香蕉在线| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 人妻一区二区av| 国产色爽女视频免费观看| 晚上一个人看的免费电影| 丝袜在线中文字幕| 少妇熟女欧美另类| 久久久久网色| 9热在线视频观看99| 一本大道久久a久久精品| 日日爽夜夜爽网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 有码 亚洲区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 少妇人妻 视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲经典国产精华液单| 久久av网站| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 欧美最新免费一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 两个人免费观看高清视频| 午夜影院在线不卡| 国产色爽女视频免费观看| 伊人久久国产一区二区| 国产爽快片一区二区三区| 超碰97精品在线观看| 秋霞在线观看毛片| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 色婷婷久久久亚洲欧美| www日本在线高清视频| 大片免费播放器 马上看| 中文字幕av电影在线播放| 黄片播放在线免费| 丰满乱子伦码专区| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产亚洲欧美精品永久| 国产男人的电影天堂91| 午夜激情久久久久久久| 亚洲av.av天堂| 女人精品久久久久毛片| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 免费观看性生交大片5| 一级黄片播放器| 欧美变态另类bdsm刘玥| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费大片18禁| 国产乱来视频区| 午夜免费观看性视频| 满18在线观看网站| 一本色道久久久久久精品综合| 大片免费播放器 马上看| 丝瓜视频免费看黄片| av有码第一页| av福利片在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 香蕉精品网在线| 免费在线观看完整版高清| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久综合国产亚洲精品| 天堂俺去俺来也www色官网| 精品一品国产午夜福利视频| 永久免费av网站大全| √禁漫天堂资源中文www| 9热在线视频观看99| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件 | 久久久久视频综合| 久久国产亚洲av麻豆专区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 大片免费播放器 马上看| 国产深夜福利视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 成人国产av品久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久久久久久久久成人| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美成人午夜精品| 18禁国产床啪视频网站| 2022亚洲国产成人精品| 久久影院123| 激情视频va一区二区三区| a级片在线免费高清观看视频| 丝袜人妻中文字幕| 久久久久人妻精品一区果冻| 在线观看www视频免费| 精品少妇黑人巨大在线播放| av福利片在线| 美女内射精品一级片tv| 91成人精品电影| 国产av码专区亚洲av| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产精品久久久久成人av| 日韩视频在线欧美| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩一区二区三区影片| 国产一区二区三区综合在线观看 | 韩国精品一区二区三区 | 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久久久亚洲中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 国产激情久久老熟女| 99热这里只有是精品在线观看| 18+在线观看网站| 超色免费av| 国产综合精华液| 成年av动漫网址| 亚洲成人av在线免费| 国产精品人妻久久久影院| 女性被躁到高潮视频| 日韩一区二区视频免费看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 男女高潮啪啪啪动态图| 中文字幕制服av| 日本黄色日本黄色录像| 日本wwww免费看| 热99国产精品久久久久久7| 成年女人在线观看亚洲视频| 母亲3免费完整高清在线观看 | 日韩中字成人| 好男人视频免费观看在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 2022亚洲国产成人精品| av国产精品久久久久影院| 97在线人人人人妻| 永久免费av网站大全| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 多毛熟女@视频| 久久久久久人人人人人| 插逼视频在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 韩国高清视频一区二区三区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲av免费高清在线观看| tube8黄色片| 在线看a的网站| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久国产精品大桥未久av| 九色成人免费人妻av| 久久久精品区二区三区| 老司机影院毛片| 国产亚洲欧美精品永久| 另类精品久久| 亚洲人成77777在线视频| 一级片'在线观看视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产成人精品在线电影| 日韩中文字幕视频在线看片| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产成人精品福利久久| 亚洲国产欧美在线一区| 少妇人妻精品综合一区二区| 成年人免费黄色播放视频| 少妇的丰满在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 97在线人人人人妻| 亚洲第一av免费看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 高清av免费在线| 欧美精品亚洲一区二区| 捣出白浆h1v1| 各种免费的搞黄视频| 在线 av 中文字幕| 深夜精品福利| 亚洲伊人久久精品综合| 午夜激情av网站| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲综合色惰| 五月天丁香电影| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品一区www在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 桃花免费在线播放| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久精品人妻al黑| av免费在线看不卡| 最近手机中文字幕大全| 成年女人在线观看亚洲视频| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲国产色片| 九草在线视频观看| 午夜激情久久久久久久| 国产成人欧美| 免费观看av网站的网址| 黄片播放在线免费| 国产精品久久久av美女十八| 黄片无遮挡物在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲人成网站在线观看播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品一二三区在线看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一级a做视频免费观看| 久热久热在线精品观看| 大陆偷拍与自拍| av一本久久久久| 丝瓜视频免费看黄片| 男女免费视频国产| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产免费又黄又爽又色| 18在线观看网站| 一本大道久久a久久精品| 99国产精品免费福利视频| 国产一区二区三区av在线| 黄色毛片三级朝国网站| h视频一区二区三区| 一区二区av电影网| 久久精品夜色国产| 国产av精品麻豆| 国产成人av激情在线播放| 欧美97在线视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久久久精品性色| 国产成人精品福利久久| 一级毛片电影观看| 丁香六月天网| 欧美精品一区二区免费开放| av不卡在线播放| 大香蕉久久网| 97在线视频观看| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久ye,这里只有精品| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲av中文av极速乱| 午夜91福利影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产成人欧美| 国产黄色免费在线视频| 久久国内精品自在自线图片| 国产成人精品福利久久| 久久久久人妻精品一区果冻| 日本欧美视频一区| 国产麻豆69| 亚洲五月色婷婷综合| 大陆偷拍与自拍| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 七月丁香在线播放| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲综合精品二区| 成年人免费黄色播放视频| 久久ye,这里只有精品| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲国产av新网站| 国产69精品久久久久777片| 男的添女的下面高潮视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 伦精品一区二区三区| 97在线视频观看| 在线观看一区二区三区激情| 国产极品粉嫩免费观看在线| 少妇熟女欧美另类| 男女下面插进去视频免费观看 | 一区二区日韩欧美中文字幕 | 午夜激情av网站| av.在线天堂| 卡戴珊不雅视频在线播放| 深夜精品福利| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲国产av影院在线观看| 久热久热在线精品观看| 最新的欧美精品一区二区| 在现免费观看毛片| 99国产综合亚洲精品| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲,欧美精品.| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲在久久综合| 制服人妻中文乱码| 久热这里只有精品99| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日日啪夜夜爽| 日韩中字成人| 亚洲成人一二三区av| 丝袜人妻中文字幕| 国产 精品1| 亚洲av欧美aⅴ国产| 热99国产精品久久久久久7| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久韩国三级中文字幕| 不卡视频在线观看欧美| 久久热在线av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩av免费高清视频| 午夜影院在线不卡| 亚洲av男天堂| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩中字成人| 亚洲精品456在线播放app| 91国产中文字幕| 亚洲精品第二区| a级毛片在线看网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费观看av网站的网址| 日本欧美国产在线视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 一二三四中文在线观看免费高清| 人妻一区二区av| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品国产av在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日本av手机在线免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 中国三级夫妇交换| 十八禁高潮呻吟视频| 日本wwww免费看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩伦理黄色片| 18禁动态无遮挡网站| 国产黄频视频在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 交换朋友夫妻互换小说| 精品一区二区三区视频在线| 日本免费在线观看一区| 99九九在线精品视频| 伦理电影大哥的女人| 91精品国产国语对白视频| 久久鲁丝午夜福利片| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲综合色网址| 久久狼人影院| 大片电影免费在线观看免费| 精品国产一区二区三区四区第35| 各种免费的搞黄视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人免费观看mmmm| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 亚洲国产精品国产精品| 日韩精品有码人妻一区| 另类精品久久| 成人黄色视频免费在线看| 久热久热在线精品观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 成人二区视频| 国产精品无大码| 丝袜在线中文字幕| 日本色播在线视频| 久久久久久人人人人人| 欧美bdsm另类| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲国产av影院在线观看| 97在线人人人人妻| 亚洲精品色激情综合| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 一个人免费看片子| 大码成人一级视频| 亚洲第一av免费看| 国产男女内射视频| 久热这里只有精品99| 国产高清国产精品国产三级| 中国美白少妇内射xxxbb| 天堂8中文在线网| 在线天堂中文资源库| 午夜福利视频精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲国产最新在线播放| 老司机影院毛片| 春色校园在线视频观看| av.在线天堂| 亚洲国产色片| 1024视频免费在线观看| 久久99热6这里只有精品| 欧美日韩视频精品一区| 久久久久久久国产电影| 色婷婷av一区二区三区视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 最近最新中文字幕免费大全7| 一级爰片在线观看| 国产成人精品婷婷| av视频免费观看在线观看| 9色porny在线观看| 91精品三级在线观看| 在线观看免费高清a一片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 咕卡用的链子| 国产在线视频一区二区| 亚洲高清免费不卡视频| 最近中文字幕2019免费版| 免费日韩欧美在线观看| 中文天堂在线官网| 三级国产精品片| 亚洲熟女精品中文字幕| 纯流量卡能插随身wifi吗| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产日韩欧美在线精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲精品一二三| 人人澡人人妻人| 看十八女毛片水多多多| 高清欧美精品videossex| 久久久久久久久久久久大奶| 天堂俺去俺来也www色官网| 最黄视频免费看| 91成人精品电影| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲性久久影院| av卡一久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 熟女人妻精品中文字幕| av在线观看视频网站免费| 亚洲精品456在线播放app| 精品久久久久久电影网| 国产色婷婷99| av一本久久久久| 亚洲国产日韩一区二区| 最近手机中文字幕大全| 美女大奶头黄色视频| 国产乱来视频区| 视频区图区小说| 午夜福利视频在线观看免费| √禁漫天堂资源中文www| 欧美激情 高清一区二区三区| 中文字幕av电影在线播放| av.在线天堂| 一级黄片播放器| 99热国产这里只有精品6| 国产色爽女视频免费观看| 一级毛片电影观看| 在线天堂中文资源库| 国产在视频线精品| 一级,二级,三级黄色视频| 久久久久久人人人人人| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久热这里只有精品99| 久久青草综合色| av.在线天堂| 久久人人爽人人片av| 美女主播在线视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久ye,这里只有精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 欧美xxⅹ黑人| 久久久久国产精品人妻一区二区| 69精品国产乱码久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 欧美国产精品一级二级三级| 精品少妇黑人巨大在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频 |