桂西北地區(qū)女性HR-HPV、HPVE6/E7mRNA感染調(diào)查及其與陰道微生態(tài)的關(guān)系

陳慧峰 潘琦文 李建湘

摘要：目的? 調(diào)查女性高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）及其早期基因（HPVE6/E7mRNA）感染情況，探究其與陰道微生態(tài)的關(guān)系。方法? 收集2018年7月～2020年6月于河池市人民醫(yī)院婦科就診的HPV病毒感染女性1000例，根據(jù)生殖道HR-HPV和HPV E6/E7mRNA實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，分為對照組1（HR-HPV陽性、HPV E6/E7mRNA陰性）300例，對照組2（HR-HPV陰性、HPV E6/E7mRNA陽性）300例，實(shí)驗(yàn)組（HR-HPV和HPV E6/E7mRNA均陽性）400例;另選取我院同期體檢健康婦女15例，作為空白組。分析四組HR-HPV、HPVE6/E7mRNA感染情況及HR-HPV感染與陰道微生態(tài)的關(guān)系。結(jié)果? 1000例HR-HPV陽性患者中單一型感染821例高于復(fù)合型感染179例，單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復(fù)合型感染以16+18型占比最多;空白組未檢出假菌絲陰道炎（VVC）、滴蟲陰道炎（TV）、需氧菌陰道炎（AV），對照組1、2與實(shí)驗(yàn)組的VVC、TV、AV檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;四組清潔度異常、pH值異常、細(xì)菌性陰道炎（BV）、乳酸菌產(chǎn)H2O2陽性、菌群密度陽性、菌群多樣性陽性的檢出率比較，空白組<對照組1<對照組2<實(shí)驗(yàn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? HR-HPV單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復(fù)合型感染以16+18型占比最多，感染HR-HPV女性存在陰道微生態(tài)異常情況，與BV、乳酸菌異常、菌群密度及多樣性改變有關(guān)。

關(guān)鍵詞：桂西北地區(qū);HR-HPV;HPVE6/E7mRNA;陰道微生態(tài)

中圖分類號：R737.33? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.20.036

文章編號：1006-1959（2020）20-0119-03

Investigation of Female HR-HPV and HPVE6/E7mRNA Infection in Northwestern Guangxi

and Its Relationship with Vaginal Microecology

CHEN Hui-feng，PAN Qi-wen，LI Jian-xiang

（Department of Gynecology，Hechi People's Hospital，Hechi 547000，Guangxi，China）

Abstract：Objective? To investigate the infection of female high-risk human papillomavirus （HR-HPV） and its early genes （HPVE6/E7mRNA）， and explore its relationship with vaginal microbiota.Methods? A total of 1，000 HPV-infected women who attended the Department of Gynecology， Hechi People's Hospital from July 2018 to June 2020 were collected. According to the laboratory test results of HR-HPV and HPV E6/E7 mRNA in the reproductive tract，they were divided into control group 1 （HR-HPV positive， HPV E6/E7mRNA negative） 300 cases， control group 2 （HR-HPV negative， HPV E6/E7mRNA positive） 300 cases， experimental group （HR-HPV and HPV E6/E7mRNA both positive） 400 cases; 15 cases of healthy women in our hospital during the same period of physical examination were selected as the blank group. Analyze the four groups of HR-HPV， HPVE6/E7mRNA infection and the relationship between HR-HPV infection and vaginal microecology.Results? Among 1000 HR-HPV-positive patients， 821 had single infections and 179 had multiple infections. Single infections accounted for the largest proportion of type 16， 52， 58， and 51， and multiple infections accounted for 16+18 most; no pseudohyphatic vaginitis （VVC）， trichomonas vaginitis （TV）， aerobic vaginitis （AV） were detected in the blank group， and the detection rates of VVC， TV， AV in the control group 1， 2 and the experimental group comparison， the difference was not statistically significant （P>0.05）; the four groups have abnormal cleanliness， abnormal pH， bacterial vaginitis （BV）， lactic acid bacteria producing H2O2 positive， flora density， and flora diversity detection rate in comparison， the blank group

Key words：Northwest Guangxi;HR-HPV;HPVE6/E7mRNA;Vaginal microecology

宮頸癌（cervical cancer）是婦科常見的惡性疾病，發(fā)病率居我國女性生殖系統(tǒng)惡性疾病之首。目前臨床認(rèn)為反復(fù)感染高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)，因此HR-HPV的檢測成為篩查宮頸癌的必要手段。由于現(xiàn)有的HPV檢測特異性不高，結(jié)果存在假陽性，可能導(dǎo)致不必要的治療和檢查增多，加重患者心理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。HR-HPV的早期基因E6/E7的原癌蛋白是引發(fā)宮頸癌變的重要因素，病毒基因在體內(nèi)整合時出現(xiàn)調(diào)節(jié)異常，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)E6/E7過度表達(dá)，可針對細(xì)胞內(nèi)HPV E6/E7mRNA的表達(dá)量進(jìn)行檢測[1，2]。近年來與陰道微生態(tài)改變和HR-HPV感染相關(guān)的研究報(bào)道增多，但目前臨床尚未廣泛應(yīng)用HPVE6/E7mRNA作為檢測方式。我院為桂西北地區(qū)最大型以及唯一開展HPV E6/E7mRNA檢測醫(yī)院，積累了大量的臨床檢測資料。本研究通過檢測桂西北地區(qū)就診女性高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）及其早期基因（HPVE6/E7mRNA）感染情況與陰道微生態(tài)，旨在探究女性HR-HPV、HPVE6/E7mRNA與陰道微生態(tài)的關(guān)系。

1對象與方法

1.1研究對象? 選擇2018年7月～2020年6月于河池市人民醫(yī)院婦科就診HPV病毒感染女性1000例，根據(jù)生殖道HR-HPV和HPV E6/E7mRNA實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果分為對照組1（HR-HPV陽性、HPV E6/E7mRNA陰性）300例，年齡20～53歲，平均年齡（40.05±5.79）歲;對照組2（HR-HPV陰性、HPV E6/E7mRNA陽性）300例，年齡22～55歲，平均年齡（40.15±5.14）歲;實(shí)驗(yàn)組（HR-HPV和HPV E6/E7mRNA均陽性）400例，年齡23～52歲，平均年齡（40.21±5.29）歲。另選取我院同期體檢健康婦女15例作為空白組，年齡19～53歲，平均年齡（39.68±5.82）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①有性生活史，月經(jīng)規(guī)律;②既往或目前有HPV感染;③伴有接觸性出血、異常陰道出血、排液者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕期、哺乳期或已絕經(jīng)婦女;②全子宮切除者;③就診7d內(nèi)有陰道沖洗、給藥、性生活或使用抗生素者;④伴有免疫系統(tǒng)或嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者。本研究已經(jīng)過本院倫理委員會審批，研究對象知曉本次研究內(nèi)容并簽字同意。各組年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可比較。

1.2方法? 所有研究對象均先后進(jìn)行HPV及陰道微生態(tài)檢測。①采用第二代雜交捕獲技術(shù)（HC2）法檢測14種HR-HPV（即16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、66型、68型）病毒感染情況，每份宮頸細(xì)胞標(biāo)本均檢測兩次并取其平均值;②采用支鏈DNA（branch-DNA）技術(shù)定量檢測14種（即16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、58型、66型、68型）HR-HPV的E6/E7mRNA水平，每份宮頸細(xì)胞標(biāo)本均檢測兩次并取其平均值;陰道微生態(tài)檢測使用4支拭子進(jìn)行取樣：○a：1支用生理鹽水濕片，并在光鏡下進(jìn)行清潔度檢測;○b：1支接種至CO2培養(yǎng)基中進(jìn)行2 d厭氧培養(yǎng)，分離出乳酸菌后，將其接種至H2O2培養(yǎng)基進(jìn)行功能鑒定;○c：1支涂片后采用Gram染色法，通過油鏡每視野中的平均菌數(shù)及菌群數(shù)將菌群密集度與多樣性進(jìn)行分級;將油鏡下最多見的微生物歸為優(yōu)勢菌;觀察有無芽生孢子、假菌絲等，并進(jìn)行Nugent評分;○d：1支使用pH精密試劑檢測pH值。

1.3診斷標(biāo)準(zhǔn)? ①HR-HPV檢測RLU/CO>1.0即為陽性;HR-HPVE6/E7mRNA檢測Copies/cell>1.0即為陽性;②微生態(tài)正常指標(biāo)[3]：清潔度Ⅰ～Ⅱ度，pH值3.8～4.5，菌群密集度及多樣性均為Ⅱ～Ⅲ級，優(yōu)勢菌為乳酸菌，且乳酸菌產(chǎn)H2O2陰性;③Nugent評分7分及以上可診斷細(xì)菌性陰道炎（BV）;需氧菌診斷評分3分及以上可診斷為需氧菌陰道炎（AV）;檢測出滴蟲（TV）、假菌絲（VVC）則診斷為對應(yīng)陰道炎[4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 通過SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件解析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料使用（%）描述，組間比較行？字2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 HR-HPV類型、檢出情況? 1000例HR-HPV陽性患者中單一型感染821例高于復(fù)合型感染179例，單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復(fù)合型感染以16+18型占比最多，見表1。

2.2四組HR-HPV感染與陰道微生態(tài)的關(guān)系? 空白組未檢出VVC、TV、AV，而對照組1、2與實(shí)驗(yàn)組的VVC、TV、AV檢出率差異近乎相同（P>0.05）;清潔度異常、pH值異常、BV、乳酸菌產(chǎn)H2O2陽性、菌群密度陽性、菌群多樣性陽性的檢出率比較，空白組<對照組1<對照組2<實(shí)驗(yàn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3討論

陰道微生態(tài)屬于女性生殖系統(tǒng)重要的屏障，是指陰道內(nèi)微生物、免疫系統(tǒng)、正常解剖結(jié)構(gòu)與內(nèi)分泌變化等共同組成并相互制約協(xié)調(diào)的一種動態(tài)平衡。臨床常用優(yōu)勢菌、菌群密度/多樣性、病原菌、炎性反應(yīng)等反映微生態(tài)特征。正常優(yōu)勢菌多為乳酸菌，乳酸菌消耗糖原產(chǎn)生乳酸從而穩(wěn)定微生態(tài)的pH值及清潔度，并通過激活免疫系統(tǒng)、抑制病原體入侵及增殖等起到維持微生態(tài)平衡的作用[5，6]。HPVE6/E7mRNA由E6/E7促進(jìn)癌基因與DNA聚合酶轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生，是HPV病毒活躍期的標(biāo)志。但由于HPV病毒需要在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行整合，導(dǎo)致癌變過程不穩(wěn)定，易受微生態(tài)免疫調(diào)節(jié)影響，故大部分女性感染HR-HPV病毒呈一過性，即會被微生態(tài)及時清除[7-9]。

本研究結(jié)果顯示，桂西北地區(qū)1000例HR-HPV陽性患者中單一型感染821例高于復(fù)合型感染179例，單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復(fù)合型感染以16+18型占比最多。四組研究對象中，空白組未檢出VVC、TV、AV，對照組1、2與實(shí)驗(yàn)組的VVC、TV、AV檢出率相近;清潔度異常、pH值異常、BV、乳酸菌產(chǎn)H2O2陽性、菌群密度陽性、菌群多樣性陽性的檢出率空白組、對照組1、對照組2、實(shí)驗(yàn)組依次升高。說明HR-HPV感染者明顯存在微生態(tài)異常情況，HPVE6/E7mRNA感染者HPV病毒活躍，微生態(tài)異常更為突出。對照組1的微生態(tài)異常檢出率低于其他陽性組，可能與HR-HPV檢測只單一提示體內(nèi)存在HPV-DNA，并未反映病毒活動及進(jìn)展有關(guān)，與羅秀清等[10]研究結(jié)果一致。筆者分析其原因在于，HR-HPV感染者HPV病毒活躍，使陰道微生態(tài)改變，pH值異常加重陰道內(nèi)環(huán)境失調(diào)，形成惡性循環(huán)，，女性年齡、生育狀況都會對陰道微生態(tài)內(nèi)環(huán)境造成影響，但由于自身免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)，內(nèi)環(huán)境發(fā)生輕微異常時，可通過自身菌群調(diào)節(jié)恢復(fù)正常，乳酸菌是陰道微生態(tài)中主要優(yōu)勢菌群，其代謝產(chǎn)生的乳酸、細(xì)菌素等可維持陰道微生態(tài)正常生存運(yùn)轉(zhuǎn)，并對陰道感染有一定的防御作用，但HPV病毒入侵機(jī)體，抑制乳酸菌及其他陰道微生態(tài)菌群正常代謝，導(dǎo)致菌群失調(diào)，病毒活躍性越高，微生態(tài)異常更為嚴(yán)重[11，12]。

綜上所述，HR-HPV單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復(fù)合型感染以16+18型占比最多，感染HR-HPV女性存在陰道微生態(tài)異常情況，與BV、乳酸菌異常、菌群密度及多樣性改變有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]薛鳳霞，王寶晨.中國HPV感染面臨的問題與挑戰(zhàn)[J].國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志，2015，34（6）：445-449.

[2]李明珠，沈丹華，李靜然，等.女性下生殖道肛門HPV感染相關(guān)病變的研究進(jìn)展[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2019，54（5）：358-360.

[3]樊尚榮，黎婷.2015年美國疾病控制中心陰道感染診斷和治療指南[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2015，18（25）：3046-3049.

[4]郭雪冬，樊尚榮.陰道微生態(tài)的形態(tài)學(xué)診斷[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2017，33（8）：800-804.

[5]韓玉，艾桂娟，韓萍，等.陰道微生態(tài)與高危型人乳頭瘤病毒感染和宮頸病變的相關(guān)性分析[J].中國計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，2016，8（3）：66-68.

[6]周燕，羅孟軍，鄧耀.陰道微生態(tài)異常與高危型HPV感染的相關(guān)性分析[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2019，31（2）：99-110.

[7]Camus C，Sébastien V，Céline L，et al.Quantification of HPV16 E6/E7 mRNA Spliced Isoforms Viral Load as a Novel Diagnostic Tool for Improving Cervical Cancer Screening[J].J Clin Med，2018，7（12）：530.

[8]劉建華，王耀玲.陰道微生態(tài)變化與宮頸人乳頭瘤病毒感染及相關(guān)病變的關(guān)系[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2017，33（8）：807-809.

[9]Yue XA，Chen P，Tang Y，et al.The dynamic changes of vaginal microecosystem in patients with recurrent vulvovaginal candidiasis：a retrospective study of 800 patients[J].Arch Gyneco Obstet，2015，292（6）：1285-1294.

[10]羅秀清，任保輝，謝蕓.陰道微生態(tài)檢測與高危型HPV感染的710例臨床報(bào)告分析[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2018，19（5）：441-442.

[11]Shipitsyna E，Krysanova A，Khayrullina G，et al.Quantitation of all Four Gardnerella vaginalis Clades Detects Abnormal Vaginal Microbiota Characteristic of Bacterial Vaginosis More Accurately than Putative G.vaginalis SialidaseA Gene Count[J].MolDiagn Ther，2019，23（1）：139-147.

[12]Comar M，Monasta L，Zanotta N，et al.Human papillomavirus infection is associated with decreased levels of GM-CSF in cervico-vaginal fluid of infected women[J].J Clin Virol，2013，58（2）：479-481.

收稿日期：2020-08-20;修回日期：2020-09-01

編輯/肖婷婷